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Red/ET重组及其在生物医学中的应用 被引量:13
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作者 王军平 张友明 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第3期502-506,共5页
通过应用Rac噬菌体的RecE RecT和λ噬菌体的RedαRedβ系统而建立的DNA工程平台———Red ET重组,是一种不依赖于限制性内切酶的分子克隆新技术。运用该技术能够介导PCR产物或寡核苷酸对目标基因进行剪切、插入、融合及突变等多种操作,... 通过应用Rac噬菌体的RecE RecT和λ噬菌体的RedαRedβ系统而建立的DNA工程平台———Red ET重组,是一种不依赖于限制性内切酶的分子克隆新技术。运用该技术能够介导PCR产物或寡核苷酸对目标基因进行剪切、插入、融合及突变等多种操作,在生物医学领域里具有广阔的应用前景,尤其在基因组功能研究中对BACs、PACs和细菌染色体的打靶修饰以及基因敲除动物DNA靶分子的快速构建等方面最有效。随着Red ET重组的推广与应用,该技术本身也在不断被改进,在工作效率得到显著提高的同时,其操作也变得更加简单、省时、省力。结合自身的一些研究结果,对Red ET重组的技术特点、发展现状和在生物医学中的应用进行了详细阐述。 展开更多
关键词 Red/ET重组 DNA修饰 BACs 噬菌体
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长期摄入含贫铀的饲料对雄性大鼠的遗传毒性研究
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作者 李蓉 冷言冰 +3 位作者 艾国平 徐辉 粟永萍 程天民 《第四军医大学学报》 CAS 北大核心 2007年第9期787-790,共4页
目的:大鼠长期食入一定剂量的贫铀后是否会产生遗传毒性.方法:给予初断乳大鼠含贫铀饲料,摄入的剂量分别为0,0.4,4,40mg/(kg·d),4mo后,观察亲代(F0代)和子代(F1代)大鼠精子畸形率,骨髓细胞微核率的改变,用单细胞凝胶电泳法研究贫... 目的:大鼠长期食入一定剂量的贫铀后是否会产生遗传毒性.方法:给予初断乳大鼠含贫铀饲料,摄入的剂量分别为0,0.4,4,40mg/(kg·d),4mo后,观察亲代(F0代)和子代(F1代)大鼠精子畸形率,骨髓细胞微核率的改变,用单细胞凝胶电泳法研究贫铀对精子DNA的损伤程度.结果:摄入小剂量贫铀的F0代大鼠精子畸形率和彗星细胞的各指标与正常组差异无统计学意义(P>0.05).但中、高剂量组F0和F1代的精子畸形率、骨髓细胞微核率和彗星细胞率均增加(P<0.01),并与摄入贫铀的剂量和摄入时间呈一定的相关关系.结论:长期摄入一定剂量的贫铀可对大鼠产生遗传毒性. 展开更多
关键词 贫铀 摄入 遗传毒性 微核 彗星电泳
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发卡样NF-κB特异性RNA干扰表达载体的构建及体外效应研究 被引量:2
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作者 王明海 王锋超 +4 位作者 陆建华 麦跃 刘晓宏 程天民 粟永萍 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2004年第8期655-657,共3页
目的 采用RNA干扰 (RNAinterference ,RNAi)技术 ,通过构建人NF κBp65基因的特异性siRNA真核表达载体 ,体外观察对NF κB基因的沉默作用 ,以及对内毒素 (LPS)刺激后NF κB活性的调控作用。方法 采用基因克隆技术 ,将合成的发卡样特异... 目的 采用RNA干扰 (RNAinterference ,RNAi)技术 ,通过构建人NF κBp65基因的特异性siRNA真核表达载体 ,体外观察对NF κB基因的沉默作用 ,以及对内毒素 (LPS)刺激后NF κB活性的调控作用。方法 采用基因克隆技术 ,将合成的发卡样特异性p65RNA干扰寡核苷酸序列插入真核表达载体 (pPUR U6) ,构建p65siRNA的表达载体 ,转染体外ECV 3 0 4细胞 ,48h后观测胞内NF κBp65亚单位蛋白水平 (Westernblotting)、及对LPS ( 10 μg ml)刺激后NF κB活化的抑制作用。结果 ①成功构建发卡样p65siRNA(smallinterfereRNA)真核表达载体 (pPUR U6 p65siRNA) ;②pPUR U6 p65siRNA转染 (脂质体法 )ECV 3 0 4细胞 ,48h后明显下调胞内P65蛋白水平 ;③转染pPUR U6 p65siRNA的细胞 ,明显抑制LPS ( 10μg ml)刺激后NF κB的活化。 结论 该RNA干扰真核表达载体能明显干扰p65蛋白的表达、释放 ,进而抑制NF κB的活化 ,可望进一步抑制细胞的过度炎症反应 ,减轻创伤组织的受损程度 。 展开更多
关键词 NF-ΚB RNA干扰 ECV-304 LPS
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L-carnitine对缺氧/复氧新生大鼠心肌细胞能量生成及CPT-Ⅱ mRNA表达的影响 被引量:5
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作者 朱光旭 谢燕 +3 位作者 王小华 周舟 楼淑芬 余争平 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2004年第3期201-204,共4页
目的 探讨L 肉毒碱 (L carnitine ,L Car)对缺氧 复氧培养新生大鼠心肌细胞能量生成的影响及其机制。方法 以原代培养新生大鼠心肌细胞建立缺氧 复氧损伤模型 ,高效液相色谱检测单纯缺氧 复氧以及L Car预处理缺氧 复氧心肌细胞ATP... 目的 探讨L 肉毒碱 (L carnitine ,L Car)对缺氧 复氧培养新生大鼠心肌细胞能量生成的影响及其机制。方法 以原代培养新生大鼠心肌细胞建立缺氧 复氧损伤模型 ,高效液相色谱检测单纯缺氧 复氧以及L Car预处理缺氧 复氧心肌细胞ATP、ADP、AMP生成改变 ;RT PCR方法检测心肌细胞肉毒碱脂酰基转移酶 Ⅱ (carnitinepalmitoyltransferase Ⅱ ,CPT Ⅱ )mRNA表达。结果 与正常对照组比较 ,培养心肌细胞缺氧 2 4h复氧 0、2、4、8h后 ,心肌细胞ATP、ADP均明显下降。与单纯缺氧 复氧组比较 ,L Car预处理组心肌细胞缺氧 复氧后ATP含量明显增高 ;培养心肌细胞缺氧 2 4h后 ,CPT ⅡmRNA表达除复氧 2h有所上升外 ,复氧 4、8h表达渐次降低。L Car预处理使缺氧 2 4h复氧 4h心肌细胞CPT ⅡmRNA表达呈浓度依赖性增高 ,5 0nmol L处理组CPT ⅡmRNA表达显著高于 0nmol L处理组。结论 心肌细胞缺氧 复氧过程中能量生成明显降低 ,其损伤可能与三羧酸循环中呼吸酶CPT Ⅱ表达降低有关 ;L Car对培养仔鼠心肌细胞缺氧复氧损伤具有显著保护作用 ,其机制可能是与L Car从转录调控水平改善CPT Ⅱ合成有关。 展开更多
关键词 缺氧/复氧 L-camitine 能量代谢 CPT-Ⅱ 心肌细胞 新生大鼠
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Red/ET同源重组介导细菌人工染色体的快速修饰 被引量:4
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作者 王军平 张友明 粟永萍 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2005年第5期468-473,共6页
随着基因组测序工程的实施与完成,如何对包含完整基因信息的特定细菌人工染色体(BAC)进行有目的修饰,已成为功能基因组学研究的一个重要环节.应用新近优化的Red/ET同源重组技术对目标BAC进行修饰,以pSC101-BAD-gbaA为依托质粒,采用rpsL... 随着基因组测序工程的实施与完成,如何对包含完整基因信息的特定细菌人工染色体(BAC)进行有目的修饰,已成为功能基因组学研究的一个重要环节.应用新近优化的Red/ET同源重组技术对目标BAC进行修饰,以pSC101-BAD-gbaA为依托质粒,采用rpsL鄄neo为正/反向筛选系统,可以快速、高效地对BAC进行剪切、插入、替换等操作,其中能够进行抗性筛选的一步BAC修饰只需一周时间,以插入非抗性标记基因Cre为代表的两步BAC修饰在两周内即可完成.通过阿拉伯多糖诱导调控和简单地变化培养温度,能使pSC101-BAD-gbaA依托质粒在发挥完Red/ET同源重组作用后自然消失,最终获得完整而纯净的修饰后BAC,为加快功能基因组学研究提供了一个可靠的实验平台. 展开更多
关键词 Red/ET同源重组 BAC修饰 功能基因组
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小鼠全身照射后血中造血祖细胞水平变化 被引量:1
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作者 宫立众 孙士红 +3 位作者 程天民 粟永萍 罗成基 郭朝华 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2004年第4期363-364,共2页
关键词 辐射损伤 粒细胞巨噬细胞集落形成单位 早期红系祖细胞
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某教研室天然外照射和表面沾染情况调查
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作者 卢雪涛 张国庆 +8 位作者 李涛 柏杨 丁艳凯 薛春洪 蔡同建 孙斌 王伟华 郭朝华 李蓉 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2004年第2期134-134,138,共2页
关键词 天然外照射 空气吸收剂量率 β表面沾染
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