小鼠毒理基因芯片的设计和制作

背景与目的设计并制作一种用于毒理学实验研究的小鼠毒理基因芯片。材料与方法根据环境与毒理学研究的要求,挑选各个生物学通路上的相关基因,采用美国NIA(National Institute on Aging)小鼠cDNA文库克隆扩增所挑选的基因片段,点样法制作芯片,荧光染色法抽样检验芯片质量。结果设计的小鼠毒理基因芯片含1796个基因,涉及8种生物学功能;PCR扩增的目的基因片段95.12%为完全合格;Picogreen荧光染色实验可用于检验芯片的点样质量。结论目的基因扩增和芯片制作基本成功,自行研制的毒理基因芯片为进一步用于毒理学相关研究创造了条件。

小鼠毒理基因芯片的可靠性验证

背景与目的建立小鼠毒理基因芯片杂交检测方法,同时验证芯片数据的可靠性。材料与方法采用数据的标准化处理、芯片内的参照点分析、自身比较实验以及差异分析实验方法,检验芯片数据的可靠性。结果局部均值化标准化方法使数据的线性趋势更加明显;参照点分析显示芯片无非特异性杂交,芯片内部基因表达的重复性较高;自身比较实验中各个批次芯片的假阳性率在1%以下,并且无明显差异;差异分析实验中荧光交换标记方法可以减少染色误差的影响。结论以上结果初步表明,所建立的基因芯片制作和检测技术能保证获得可靠性较好的数据。

提高军事医学院校教员的信息素养

本文就军事医学院校教员的信息素养培养的必要性、以及如何提高信息素养进行了初步探讨。

昆明山海棠总生物碱诱发HL-60细胞凋亡的观察

目的 观察昆明山海棠 (TH)总生物碱诱导白血病细胞凋亡的发生情况。方法 应用台盼蓝染色法 ,荧光双重染色法 ,DNA电泳结合流式细胞仪对HL 6 0细胞的凋亡进行观测。结果 HL 6 0细胞在TH总生物碱作用下出现典型的细胞凋亡特征 ,包括细胞形态改变、DNA梯状带及亚G1峰 ,且动态变化过程较为一致。结论 TH总生物碱具有较强的诱导白血病HL 6 0细胞凋亡的能力 ,总生物碱是TH诱导凋亡的有效成份之一。

建立大鼠单侧输尿管梗阻模型手术方式的选择

目的 选择一种简便、有效、快捷的手术方式 ,减少其感染的发生率。方法 采用入下腹结扎输尿管下段。结果 经下腹行输尿管下段结扎 ,单侧输尿管梗阻模型建立的成功率高于常规背部入腹行输尿管上段结扎的术式。结论 经下腹行输尿管下段结扎是一种建立大鼠单侧输尿管梗阻模型的较好术式。

昆明山海棠水提液的急性毒性研究

目的 探明昆明山海棠的急性毒性及半数致死剂量 (LD50 ) ,为临床的安全使用提供依据和资料。方法 THH水提液多剂量小鼠口服 ,观察小鼠的死亡率和脏器的感官病理改变。结果 雄性的LD50 ( 95 %可信限 )为 79g kg( 69～ 89g kg) ,雌性的LD50 ( 95 %可信限 )为 10 0g kg ( 90～ 112g kg) ;肉眼未见脏器明显的病理改变。结论 按化学物质的急性毒性分级标准 ,THH水提液属中等毒级别 ,临床使用比较安全 。

环磷酰胺和异环磷酰胺Balb/c小鼠肝脏毒性的基因表达谱

目的利用毒理基因芯片技术研究环磷酰胺和异环磷酰胺肝脏毒性效应的分子机制。方法利用构建的小鼠毒理基因芯片和环磷酰胺及异环磷酰胺致Balb/c小鼠肝毒性动物模型,观察不同时相点小鼠肝脏基因表达谱变化,结合层次聚类和生物信息数据库检索对差异表达基因进行初步功能分析。结果两种药物作用后引发小鼠肝脏多种基因表达改变,分析发现类似的表达谱变化趋势如蛋白质生物合成相关基因上调,抗氧化相关基因失衡,免疫调节、细胞增殖及凋亡相关基因异常改变等均存在于两种药物组,提示两种药物存在多种共同的肝毒性效应机制。结论环磷酰胺和异环磷酰胺有共同的肝脏毒性分子机制。

昆明山海棠总生物碱诱导小鼠淋巴瘤细胞tk基因突变的研究

目的 :研究昆明山海棠 (THH)总生物碱对小鼠淋巴瘤L5 178Y细胞tk基因的影响。方法 :用抽提的THH总生物碱对L5 178Y细胞进行浓度梯度染毒 ,不同时间点进行单细胞微孔接种 ,计数阳性集落 ,测定细胞接种效率、相对存活率、相对悬浮增长率和突变频率。结果 :随着THH总生物碱作用剂量的增加 ,L5 178Y细胞相对存活率和相对悬浮增长率均明显下降 ;在 0 .1～ 2 .0 g·L-1范围内可诱导细胞tk位点的突变 ,诱发突变频率是自发突变频率的 2～ 9倍。在tk位点诱发了两种不同表型的突变集落 ,即大集落与小集落 ,但以大集落为主 ,这一现象可能与THH的作用机制有关。结论 :THH总生物碱对L5 178Y细胞具有肯定的细胞毒性与诱导基因突变作用。

昆明山海棠碱通过Fas受体介导途径诱导Jurkat淋巴瘤细胞株凋亡

目的 探讨Fas、caspase 8在昆明山海棠碱 (THH碱 )对Jurkat淋巴瘤细胞的凋亡诱导中的变化 ,以进一步研究THH碱诱导凋亡的分子机制。方法 采用Annexin V标记和流式细胞术检测细胞的凋亡发生率 ,采用westernblotting分析FasL、caspase 7、caspase 8、Bid等蛋白表达的变化。结果 THH碱能有效诱导Jurkat细胞凋亡 ;在其凋亡过程中 ,FasL逐渐表达增强、caspase 7、caspase 8、Bid剪切激活 ,并呈时间依赖性。结论 THH碱通过Fas受体 配体介导激活caspase 8,caspase 8再激活caspase 7和Bid等网络途径诱导Jurkat细胞凋亡。

微核试验在中国的应用、发展与展望

微核试验是反映染色体损伤的重要试验方法,已广泛应用于遗传、食品、药物、环境等多领域的遗传毒性评估,以及作为有害职业和生活环境暴露人群遗传损害的生物标志物。我国开展微核试验已有二十余年的历史,本文通过检索《中国生物医学文献数据库》(1980～2000),共检索到有关微核的专题研究文献共1316篇,研究内容涉及微核的文献共2083篇。本文对微核的相关信息进行了分析,并结合作者自己的研究工作,回顾了微核试验在中国的应用和发展,总结了我国学者开展该项工作的优势与不足,对微核试验在我国的进一步发展进行了展望。

大肠癌相关基因改变的研究进展

大肠癌是恶性肿瘤中的高发癌 ,大肠癌的发生是由机体内因和环境外因共同作用的结果。涉及多个基因和染色体的异常改变 ,其中既存在原癌基因如ras、myc等的激活 ,又有抑癌基因APC、DCC、MCC、p5 3等的失活。由于大肠癌是一类肠道疾病 ,所以大肠癌的发生也涉及代谢酶基因多态性。大肠癌的发生是多基因突变共同作用的结果 ,从某种意义上讲 ,大肠癌是一种基因突变所致的基因病 ,其发病机制的研究对大肠癌的防治具有重要意义。本文综述与大肠癌发生相关的基因改变 。

大肠癌SMAD4基因研究进展

SMAD4是近年来从染色体18q21.1分离出的一个候补肿瘤抑制基因,其编码的蛋白SMAD4参与了转化生长因子β(TGF鄄β)超家族细胞内信号传导过程。SMAD4是信号传递蛋白SMADs的功能活动中心。人大肠癌组织中常有染色体18q21的缺失,其中包括DCC、SMAD4和SMAD2等基因,SMAD4纯合性丢失可能参与了结直肠癌的致癌过程,并在晚期结肠癌生长中起重要作用,为临床肿瘤治疗开辟新的思路。

佛波酯对BALB/c3T3细胞转化早期基因表达的影响

目的 探讨佛波酯(12- O -tetradecanoylphorbol- 13 -acetate,TPA)促进细胞转化早期基因表达谱的变化。方法 以N 甲基 N’ 硝基 N 亚硝基胍 (N methyl N’ nitro N nitrosoguanidine,MNNG)为启动剂,TPA为促癌剂,建立BALB/c3T3细胞转化模型。采用锥虫蓝染色法检测细胞生长情况,流式细胞仪检测细胞周期变化。采用cDNA微阵列检测TPA处理早期的基因表达谱变化。结果 TPA处理早期可抑制细胞增殖,阻滞细胞于G1 期与S期。TPA处理 4h和 24h后,在检测的1 152个基因中筛选出 19个差异表达基因,其中 9个基因表达上调, 10个基因表达下调。许多差异表达基因的功能与细胞增殖、凋亡和周期调控相关,主要涉及ras和p53基因信号传导通路。结论 TPA在促进BALB/c3T3细胞转化的早期阶段,可影响某些调节细胞周期进展基因的转录表达,从而导致细胞生长阻滞。

1，3-丁二烯生产车间工人职业接触监测及健康影响调查

目的研究1,3-丁二烯(1,3-Butadiene,BD)生产车间作业工人职业接触水平及其对健康的影响。方法现场调查BD车间生产工艺与作业工人工作流程,结合受试对象一般健康与生活习惯背景资料,选择BD接触组(74人)与对照组(157人),确定空气监测采样点,测定BD含量,并且对受试对象进行职业健康检查。结果BD接触组工作地点空气中BD浓度为(20.79±34.95)mg/m^3,而对照组工作地点均低于仪器检测下限(<0.5 mg/m^3);在涉及神经系统、呼吸系统以及生殖系统的主诉症状方面,BD接触组明显高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);BD接触组血红蛋白含量(121.38±21.74)g/L明显低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);BD接触组的心电图异常比例明显高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05),主要表现为T波低平。结论BD对职业接触人群具有一定的毒性作用,可能在人体内存在多种靶器官和组织。

乙基亚硝基脲对人白血病细胞HPRT基因的影响

目的 探讨乙基亚硝基脲 (ENU)诱导人次黄嘌呤鸟嘌呤磷酸核糖基转移酶 (HPRT)基因突变的分子图谱和发生机制。方法 采用单细胞克隆培养、双向筛选计数、多重聚合酶链反应扩增和电泳分析等方法。结果 随着ENU剂量的增加 ,细胞接种存活率非常显著下降 (10 0～ 2 0 0 μg/ml剂量组 )、突变频率显著升高 (12 5～ 2 0 0 0 μg/ml剂量组 )。自发突变没有全部基因外显子缺失型 ,只有 7 7%检测出单个外显子缺失 ;而ENU诱发突变中却有 79 7%显示缺失改变 ,其中缺失突变可以发生于HPRT基因的每个外显子 ,且诱发突变中大多数是多个外显子连锁缺失 (88 1% )。结论 ENU诱发HPRT基因突变图谱与自发突变完全不同 ,易诱发较大遗传结构改变 。