PDGF-A基因修饰皮片对眼睑皮肤创伤修复的研究

目的利用PDGF-A基因修饰的全层皮肤皮片，利用HE染色、PCR、蛋白定量分析几个层面，探讨其对眼睑皮肤损伤修复的情况及部分机理。方法贵州小香猪6只，背部脊柱两侧造成全层皮肤缺损圆形创面（Ф3．67cm）各3个，共36个创面。A组（基因修饰皮片组）“PDGF-A基因修饰皮片”，移植到其右侧的18个创面作为实验组；B组（细胞皮片植入组）以HAM负载未经基因修饰的自体bMSCs与角朊细胞，构建成“细胞皮片”植入其左侧前6个创面；C组（单纯HAM敷盖组）单纯HAM敷盖其左侧后12个创面，作对照组。观察移植后1～4周内，各组创面愈合、肉芽组织生长、上皮化等情况。并进行创面组织HE、Laminin免疫组化及胶原含餐等检测。结果（1）A组于伤后15～17d愈合，B组于伤后21～23d愈合，C组于伤后24～26d愈合，A组较其它两组分别提前5～6d与8～9d愈合，且愈合质量好。（2）A组创面于移植15～17d，其肉芽组织生长旺盛，肉芽组织中Laminin、成纤维细胞和毛细血管含量丰富，可见胶原沉积。两对照组创面组织仍见许多炎细胞浸润，肉芽组织中Laminin、成纤维细胞和毛细血管含量少，胶原沉积不明显。结论PDGF-A基因修饰皮片移植对眼睑皮肤的创伤有较好的促愈作用，愈合质量较高。

贫铀弹伤害及其医学防护

贫铀在军事上主要用于加固装甲和制造贫铀弹。贫铀武器多次在实战中被使用,造成人员死伤,装备破坏,环境污染,产生了严重后果。本文从贫铀弹的4种杀伤因素、贫铀弹伤害的主要临床病理特点、医学防护和救治几个方面阐述了贫铀弹所致的伤害及其医学防护,同时也对防护中几个基本问题提出了自己的看法。

小鼠皮肤创伤后创面局部真皮干细胞参与修复过程

目的研究小鼠皮肤创伤后,创面局部的真皮干细胞是否被激活并参与创伤愈合过程。方法小鼠背部行全层皮肤损伤后,首先应用腹腔单次注射BrdU 2 h后标记快速分裂细胞(rapidly dividing cells,RDCs),检测创面局部组织中不同时间点细胞增殖反应情况;其次通过多次连续注射BrdU长时间后在体检测标记存留细胞(label-retaining cells,LRCs),以反映创伤后局部真皮干细胞被激活情况;最后分离BrdU在体多次连续标记后的肉芽组织细胞和正常真皮细胞,通过比较其集落形成能力并检测BrdU信号存留情况,研究肉芽组织中真皮干细胞被激活和参与修复的情况。结果单次注射BrdU 2 h后,在正常皮肤组织中,仅在表皮基底层和毛囊上皮细胞中存在少量的BrdU阳性细胞,而创伤后在创缘表皮、毛囊、创缘真皮和肉芽组织细胞都发生了明显的增殖反应;创伤后多次连续注射BrdU 3 d后,通过长时间示踪,证实创面愈合后肉芽组织中存在LRCs,而在正常真皮组织中未检测到被BrdU标记的细胞;进一步发现肉芽组织细胞较正常真皮细胞具有更强的集落形成能力,且在肉芽组织细胞形成的集落中仍可检测到BrdU信号阳性的LRCs。结论创面肉芽组织中存在具有干细胞特性的LRCs,提示皮肤创伤后局部真皮干细胞被激活并参与创伤愈合过程。

机械牵张加重模拟缺血缺氧心肌细胞损伤的研究

目的 验证机械牵张加重模拟缺血缺氧对心肌细胞的损伤效应。方法 利用所建立的心肌细胞体外牵张模型 ,模拟施加缺血缺氧因素 ,观察心肌细胞形态、培养液中乳酸脱氢酶 (LDH)含量及碘化丙啶 (PI)染色阳性细胞比例的变化。结果 10 %牵张后 ,心肌细胞形态完整 ,LDH及PI染色阳性细胞比例无明显变化。模拟缺血缺氧后形态明显破坏 ,LDH及PI染色阳性细胞比例显著增加。牵张复合模拟缺血缺氧后 ,细胞形态破坏加剧 ,LDH含量急剧上升 ,PI染色阳性细胞比例进一步显著增加 (P <0 .0 1)。结论 机械牵张加剧了模拟缺血缺氧对心肌细胞的损伤效应 ,提示严重烧伤早期过多过快补液导致心脏前负荷的迅速增加对心肌组织产生牵拉可能会加剧业已存在的心肌细胞损伤 ,从而进一步促进了心肌损害的发生。

丹参对复合全身放射损伤大鼠创面的影响

目的:丹参能有效促进溃疡和表皮创面愈合,观察丹参对大鼠放射损伤复合局部创伤(简称放创复合伤)创面的影响。方法:实验于2003-01/07在第三军医大学药理学教研室完成。大鼠接受6Gy全身照射后在背部作圆形全层切除,局部给予丹参1g/cm2,连续7d。结果:伤后3～23d,丹参治疗组创面愈合速度明显快于对照组,其完全愈合时间为(19.17±2.93)d,较对照缩短3.83d。且治疗组创面蛋白和羟脯氨酸含量也明显高于对照。结论:丹参能加快放创复合伤创面愈合,且提高创面愈合质量。

创伤修复中白细胞介素12的生物学特性及其作用

研究证实,白细胞介素12(IL-12)在创伤修复与创伤免疫领域中应用比较广泛,对烧伤、放射损伤、复合伤、多发伤等不同类型的创伤均有作用,但不同创伤条件下,IL-12水平的变化以及IL-12基因表达的作用是不相同的。IL-12具有的强大免疫调节功能与造血调控的多功能作用,主要由黏附细胞(单核/巨噬细胞)和B淋巴细胞产生,具有独特的分子结构和生物学意义。IL-12对自然杀伤细胞和T细胞有明显的增殖作用,对多种细胞因子有诱导作用,对Th1细胞有调节作用,可调节淋巴样细胞表面的一些分子基因表达。

全身照射大鼠骨髓提取液对真皮多能干细胞趋化作用的实验研究

目的 观察 5Gyγ射线全身照射后大鼠骨髓提取液对真皮多能干细胞 (dermalmultipotentstemcells ,dMSCs)的趋化作用 ,并定量分析尾静脉输注的dMSCs在大鼠体内的分布。方法 在Transwell培养体系中 ,观察骨髓提取液对dMSCs的趋化作用。3H TdR标记dMSCs ,经尾静脉输注到大鼠体内后 ,液闪法测量各组织内dMSCs的含量。结果 Transwell培养体系中 ,照射组骨髓提取液组从上层迁移到下层的细胞明显多于不照射的正常对照组和生理盐水组 (P <0 0 1)。照射后 1周始 ,照射组骨髓dMSCs含量明显高于正常对照组 (P <0 0 1) ;伤后 3周和 4周 ,照射组单位重量骨髓dMSCs含量也明显高于同组的肺脏、肝脏等组织。结论 全身照射大鼠骨髓提取液对dMSCs有很强的趋化作用 ,从而促进静脉输注的dMSCs偏向分布于损伤的骨髓。

骨髓间充质干细胞在小鼠肝脏局部分化为肝细胞的实验研究

目的探讨小鼠骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs)在肝内分化为肝细胞的可行性。方法腹腔注射丙烯醇致雌性C57BL/6小鼠全肝损伤后局部接受雄性同品系绿色荧光蛋白(green fluorescence protein,GFP)转基因小鼠骨髓间充质干细胞移植。移植后3周取骨髓嵌合小鼠肝脏做冰冻切片,荧光显微镜下观察GFP阳性细胞在肝内分布,石蜡切片行GFP抗体和白蛋白(albumin,Alb)抗体免疫组化双标法检测GFP阳性细胞在受体小鼠肝内的分化情况。结果移植后3周小鼠肝内可见GFP阳性细胞,并可见GFP和Alb双阳性细胞。结论异体骨髓间充质干细胞可在小鼠肝内分化为表达Alb的肝细胞,为肝组织的再生和修复提供了新思路,显示了其在肝病治疗中的应用潜力。

C反应蛋白对合并^(60)Coγ射线放射损伤家兔创面的影响

目的观察纯化的人C反应蛋白(C-reactive prote in,CRP)对合并放射损伤家兔创面的影响。方法亲和层析法纯化CRP,SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳和双向免疫扩散法鉴定CRP纯度和抗原特异性。家兔接受5Gyγ射线照射后,背部切出4个直径为2 cm的圆形创面,随机选择创面给予生理盐水或CRP(每个创面5、50、500μg),连续5 d。伤后3、7、14及21 d测定创面愈合率、创面组织蛋白和羟脯氨酸含量。结果分离纯化的CRP纯度为92%,抗原特异性好。伤口局部使用CRP未显著加快放、创复合伤创面愈合速度,但50、500μg/每个创面的CRP治疗组伤后7 d创面组织蛋白和羟脯氨酸含量明显高于对照组(P<0.05)。结论本研究表明CRP提高放、创复合伤创面愈合早期的愈合质量。

防御素基因工程制备研究进展

本文综述了防御素在重组表达与制备方面的主要进展,包括在原核细胞表达时宿主菌、载体、表达策略的选择,在酵母等真核细胞中进行重组表达的优缺点,以及重组防御素纯化研究的现状。本文还概括了当前防御素研发与临床应用面临的主要问题,将来的研究方向和开发前景。

全身辐射损伤大鼠伤口中性粒细胞凋亡及W_(11)-a_(12)促进伤口愈合的作用

目的:促愈合药W_11-a_12能显著提高伤口中性粒细胞(neutrophils,Neu)的数量和功能,观察合并全身放射损伤大鼠伤口Neu凋亡率的变化,并观察促伤口愈合药W_11-a_12的作用。方法:实验于1999-05/10在解放军第三军医大学预防医学院全军复合伤研究所完成。将健康成年大鼠随机分为单纯创伤组和6Gy放射复合伤组。6Gy放射复合伤组动物在接受6Gyγ射线全身照射后立即在背部致创伤,伤口局部给予生理盐水或W_11-a_12(每伤口10mg)。从埋入伤口的海绵分离伤口细胞,分别采用TUNEL法、Westemblot及RT-PCR方法检测伤口Neu凋亡率、Neu中Bcl-2蛋白、mRNA含量,透射电镜观察伤口凋亡的Neu。结果:伤后3,6,12,24及48h6Gy放射复合伤组伤口Neu凋亡率变化曲线呈“∧”型,而单纯创伤组呈“∨”型。伤后6,12,24h6Gy放射复合伤组Neu凋亡率分别为(9.90±2.26)%,(12.50±1.83)%和18.16±5.56)%,显(著高于单纯创伤组的(6.44±1.96)%,(2.74±1.22)%和(7.38±2.10)%(t=2.01,2.81,2.52,P<0.05),同时Neu中Bcl-2蛋白及mRNA表达均低于单纯创伤组。W_11-a_12使用组与对照组伤口Neu凋亡率无明显差异。结论:全身电离辐射后伤口Neu凋亡率增加且变化规律与单纯创伤组明显不一致,这与电离辐射引起伤口愈合延缓有关。

局部解剖学知识对防原医学实验的促进作用

防原医学主要研究战时核武器与平时核事件所致伤害的医学防护和救治,是军事预防医学的主干学科,更是一门包含放射病理、创伤外科等多学科的特殊新兴学科。放射性碘极易经胃肠道、呼吸道、完整的皮肤及伤口吸收,

Genistein靶向多肽偶联物的制备及体外抑瘤活性研究

目的:制备Genistein靶向多肽偶联物(GEN-P),增强Genistein的抑瘤活性。方法:采用固相法设计、合成能够与组织因子(TF)特异性结合的配体分子-FHS001,凝血酶原时间(PT)法测定其凝血活性,荧光显微镜直接检测其与高表达TF的人乳腺癌细胞株MCF-7的结合。通过异型双功能交联剂Sul-fo-SANPAH将FHS001与Genistein交联,制备偶联物GEN-P;MTT法检测其对MCF-7的杀伤作用。结果:合成的FHS001多肽能够与高表达TF的MCF-7细胞特异性结合且无明显的凝血活性。GEN-P偶联物在0.2～200.0μmol/L的浓度范围内对MCF-7细胞均有不同程度的增殖抑制作用,作用6h后抑制率为16.3%～83.1%,且呈一定的剂量依赖性。GEN-P和Genistein对MCF-7细胞的IC50分别为2.0和120μmol/L,GEN-P效果明显优于游离药物Genistein。结论:与FHS001偶联后Genistein的抑瘤活性明显增强,有希望进一步应用于癌症的治疗。

骨髓间充质干细胞可塑性研究

骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells,MSCs)具有跨系统、甚至跨胚层分化的特性,称为MSCs的可塑性(plasticity),成为细胞工程、再生医学中的主要选择细胞。但随着对成体干细胞可塑性质疑的出现,使MSCs是否具有转分化能力,存在着极大的分歧。对MSCs可塑性是否真正存在的进一步明确,越加显得急切和重要,也对干细胞基础理论及其临床应用具有指导性意义。

去甲肾上腺素促进骨髓间充质干细胞增殖的研究

目的观察去甲肾上腺素对骨髓间充质干细胞增殖的影响及其作用途径。方法将BMSCs细胞随机分为3组:①正常对照组;②去甲肾上腺素(10-6～10-4mol/L)处理组;③酚妥拉明(10-6mol/L)采+去甲肾上腺素(10-5mol/L)处理组。采用3H-TdR掺入实验检测不同实验组对BMSCs增殖的影响;免疫组化和免疫印记法检测去甲肾上腺素对蛋白激酶C的作用。结果①10-6～10-4mol/L的去甲肾上腺素作用8h后均促进了骨髓间充质干细胞的增殖,并且在10-5mol/L时去甲肾上腺素对骨髓间充质干细胞的促增殖作用最为显著;②酚妥拉明阻断了去甲肾上腺素对骨髓间充质干细胞的促增殖作用;③去甲肾上腺素诱导蛋白激酶C从细胞质到细胞膜转位,酚妥拉明抑制了去甲肾上腺素诱导的蛋白激酶C激活。结论去甲肾上腺素能够促进骨髓间充质干细胞的增殖,并且这种促增殖作用是通过肾上腺素能受体、蛋白激酶C信号通路来调节的。

安定-氯胺酮麻醉对严重烧伤小鼠肺组织糖皮质激素受体表达的影响

目的观察严重烧伤早期小鼠肺组织糖皮质激素受体（GR）表达的变化，并探讨安定-氯胺酮麻醉对其表达变化的影响。方法70只成年健康昆明小鼠，随机分为健康对照组、烧伤组、烧伤后麻醉组，20％～30％体表总面积Ⅲ度烧伤作为烧伤模型，烧伤后麻醉组在小鼠严重烧伤后立即肌肉注射安定0．4mg／kg、氯胺酮10mg／kg进行麻醉。应用Western blot技术检911各组小鼠肺组织GR蛋白表达水平。结果在严重烧伤后30min，小鼠肺组织中GR蛋白表达水平就已经开始降低，12h后逐渐恢复至正常水平。而烧伤后应用安定-氯胺酮麻醉，小鼠肺组织GR蛋白表达水平均无明显变化。结论严重烧伤可引起小鼠肺组织GR表达水平的早期下降，而严重烧伤后应用安定氯胺酮麻醉能显著抑制GR表达水平下调，结果提示安定氯胺酮麻醉可能部分改善严重烧伤诱发的应激状态．这可能与抑制GR表达水平下调有关。

骨髓间充质干细胞及其临床应用研究进展

骨髓间充质干细胞因具有容易获得、容易体外培养增殖、长期培养的过程中始终保持多向分化的潜能、抗原性小、组织修复能力强等特征,使之成为干细胞研究领域的热点和前沿,并被认为是最有前途的组织工程种子细胞之一。以干细胞工程为代表的现代组织工程学为组织器官的修复与替代提供了一个崭新的领域,并将此领域扩展到细胞替代治疗、支持造血、基因治疗等更多方面。

不同构型人α防御素-5多肽抗HSV-2感染的实验研究

目的探讨不同构型人α防御素-5(HD-5)多肽对单纯疱疹Ⅱ型病毒(HSV-2)感染的抑制作用,分析不同构型HD-5抗HSV-2活性的差异。方法 HSV-2病毒感染体外培养的绿猴肾细胞(Vero细胞),分别给予100μg/mL的HD-5/N、HD-5/Acm和HD-5/A肽处理,72h后观察细胞病变效应(CPE),并通过CCK-8法测定细胞保护率;建立HSV-2感染豚鼠生殖器实验动物模型,按照症状评分方法对不同构型HD-5多肽的体内抗HSV-2病毒感染作用进行分析。结果 HD-5/N与HD-5/Acm均能显著抑制HSV-2感染体外培养的Vero细胞(P<0.01),而HD-5/A的抗病毒作用不明显;阴道内给予HD-5/N多肽12.5μg.kg-1.d-1治疗8d能显著改善HSV-2感染豚鼠的生存状况,提高动物30d存活率(P<0.01),外阴感染症状评分显著降低(P<0.01),而HD-5/Acm治疗效果并不明显。结论天然结构HD-5多肽(HD-5/N)在体外或豚鼠阴道内应用均可发挥显著抗HSV-2感染的作用,二硫键缺失会显著影响HD-5多肽的体内抗病毒效果。