CXCR4基因转染促进移植dMSCs向放创复合伤大鼠创面分布的研究

目的探讨CXCR4腺病毒表达载体（Adv—CXCR4）转染的真皮多能干细胞（dMSCs）移植后可否更多地向放创复合伤大鼠创面分布，并加速创面愈合。方法3H—TdR标记Adv—CXCR4转染的dMSCs（A组）、绿色荧光蛋白腺病毒表达载体转染的dMSCs（B组）、未转染病毒载体的dMSCs（C组）后移植到放创复合伤大鼠体内，液闪法测量创面中dMSCs的含量。用生物医学图像分析仪测量伤后创面残留面积。结果从伤后5d起，A组创面中dMSCs的含量约占移植细胞总量的1．95％～3．85％，明显高于B组和C组（占移植细胞总量的1．07％～1．86％）。从伤后12d开始，A组创面残留面积明显小于B组和C组。A组创面愈合时间比B组和C组提前约1．5d。结论Adv—CXCR4转染的dMSCs在移植后可更多地分布到放创复合伤大鼠的创面，且能更快地促进创面愈合。

去甲肾上腺素促进骨髓间充质干细胞增殖的研究

目的观察去甲肾上腺素对骨髓间充质干细胞增殖的影响及其作用途径。方法将BMSCs细胞随机分为3组:①正常对照组;②去甲肾上腺素(10-6～10-4mol/L)处理组;③酚妥拉明(10-6mol/L)采+去甲肾上腺素(10-5mol/L)处理组。采用3H-TdR掺入实验检测不同实验组对BMSCs增殖的影响;免疫组化和免疫印记法检测去甲肾上腺素对蛋白激酶C的作用。结果①10-6～10-4mol/L的去甲肾上腺素作用8h后均促进了骨髓间充质干细胞的增殖,并且在10-5mol/L时去甲肾上腺素对骨髓间充质干细胞的促增殖作用最为显著;②酚妥拉明阻断了去甲肾上腺素对骨髓间充质干细胞的促增殖作用;③去甲肾上腺素诱导蛋白激酶C从细胞质到细胞膜转位,酚妥拉明抑制了去甲肾上腺素诱导的蛋白激酶C激活。结论去甲肾上腺素能够促进骨髓间充质干细胞的增殖,并且这种促增殖作用是通过肾上腺素能受体、蛋白激酶C信号通路来调节的。

骨髓间充质干细胞及其临床应用研究进展

骨髓间充质干细胞因具有容易获得、容易体外培养增殖、长期培养的过程中始终保持多向分化的潜能、抗原性小、组织修复能力强等特征,使之成为干细胞研究领域的热点和前沿,并被认为是最有前途的组织工程种子细胞之一。以干细胞工程为代表的现代组织工程学为组织器官的修复与替代提供了一个崭新的领域,并将此领域扩展到细胞替代治疗、支持造血、基因治疗等更多方面。

放烧复合伤及其神经内分泌治疗

放射复合伤多发生于核事故、核战争及核恐怖袭击中，受到国内外的高度重视。放烧复合伤（即放射损伤合并烧伤）是其中最为常见的一种，在发病早期即表现出复杂的病理改变，最主要的特征是造血功能障碍、免疫调节紊乱、胃肠道功能受损、烧伤创面的延迟愈合和急性炎性反应。

沉默转化生长因子β1对肝星状细胞-T6生长及增殖的影响

目的观察沉默转化生长因子β1(TGFβ1)对肝星状细胞(HSC)-T6生长及增殖的影响。方法用具有高效感染力的TGFβ1 shRNA慢病毒液感染HSC-T6细胞,以未经感染或经空病毒感染的HSC-T6细胞作对照。倒置荧光显微镜下观察HSC-T6细胞绿色荧光蛋白(GFP)的表达变化;CCK-8法检测TGFβ1 shRNA慢病毒对HSC-T6细胞生长及增殖的影响;RT-PCR和Western blotting分别检测HSC-T6细胞TGFβ1及增殖细胞核抗原(PCNA)基因及其编码蛋白的表达,并予以定量分析。结果经TGFβ1 shRNA慢病毒感染的HSCT6细胞显著表达GFP。CCK-8法检测结果显示:经TGFβ1 shRNA慢病毒感染的HSC-T6细胞的生长及增殖慢于对照细胞,培养48 h后差异有统计学意义(P<0.01)。RT-PCR和Western blotting检测结果显示:TGFβ1shRNA慢病毒能有效沉默HSC-T6细胞TGFβ1,并下调其核抗原PCNA基因及其编码蛋白的表达,与对照细胞的差异有统计学意义(P<0.01)。结论沉默TGFβ1能明显抑制HSC-T6的生长及增殖,并下调其核抗原PCNA的表达。

氧化石墨烯对人胚胎干细胞诱导的视网膜色素上皮细胞活性的影响

目的探索氧化石墨烯(graphene oxide,GO)对人胚胎干细胞(human embryonic stem cell,h ESC)诱导的视网膜色素上皮细胞(retinal pigment epithelial,RPE)活性的影响。方法 h ESCs通过自发分化法诱导为RPE细胞,通过免疫荧光法和透射电镜对其进行鉴定后,将h ESC-RPE细胞与浓度分别为0、12.5、25、50和100μg/m L的GO共培养24 h,采用CCK-8试剂盒检测其细胞活力,与浓度为50μg/m L的GO共培养24 h,流式细胞仪检测细胞凋亡和细胞内反应性活性氧(reactive oxygen species,ROS)水平。结果 h ESC分化的RPE细胞,呈典型的铺路石样形态,细胞间连接紧密,胞浆富含色素颗粒;免疫荧光检测表达RPE细胞早晚期及紧密连接的标记,并具有吞噬感光外节能力;电镜观察到顶端的微绒毛,细胞呈单层;GO经原子力显微镜检测,说明制备的氧化石墨烯溶液以单层为主;经紫外-可见吸收以及拉曼光谱测试表明石墨经过强氧化之后,其有序的结构遭到破坏,产生了许多缺陷和出现了大量的无序结构;CCK-8细胞活性检测结果显示各组均无统计学差异;细胞凋亡和氧化应激实验中与空白组之间差异没有统计学意义。结论 GO对于h ESC-RPE细胞生物相容性好,提示其有望作为RPE细胞的纳米载体。

转录辅助因子PC4参与大鼠骨髓间充质干细胞体外衰老过程的调控

目的研究转录辅助因子PC4(transcriptional positive coactivator 4)在骨髓间充质干细胞(mesenchymal stemcells,MSCs)体外传代衰老过程中的表达变化特点,初步探讨其在MSCs增殖和衰老中的可能作用。方法通过CCK-8法检测并绘制MSCs生长曲线,流式细胞术检测MSCs免疫表型,通过RT-PCR和Western blot检测PC4在MSCs长期体外培养中的表达特点,并检测细胞衰老标志物β-半乳糖苷酶活性的变化,进一步通过RNA干扰抑制PC4表达,检测其对MSCs增殖和衰老的影响。结果本实验分离培养的MSCs早期具有成体干细胞特性,长期体外连续传代后出现细胞衰老,β-半乳糖苷酶染色呈阳性,PC4在衰老细胞中的表达明显降低,RNA干扰抑制PC4表达后,MSCs增殖受到抑制,β-半乳糖苷酶染色阳性率增加[转染后48 h阴性对照组(8.8±2.5)%,空白对照组(5.7±1.8)%,siRNA组(56.3±4.9)%,P<0.05]。结论转录辅助因子PC4可能参与了体外连续传代培养过程中MSCs增殖活性降低和衰老过程的调控。

电离辐射对巨核细胞与白介素3及其受体基因表达的影响

目的 探讨辐射损伤对巨核细胞增殖和细胞周期的影响及其调控因子IL-3及其受体（IL-3Rα）表达的变化。方法 利用MTT法检测辐射损伤后Dami细胞的增殖作用，并通过流式细胞仪检测细胞周期的变化。用RT-PCR方法检测辐射后Dami细胞IL-3和IL-3Rα表达水平的变化。结果Dami细胞在受到不同剂量7射线照射后均发生增殖抑制，并发生明显的G0，G1期阻滞。辐射损伤5、10和15Gv后，IL-3和IL-3Rα在mRNA水平表达均显著低于对照组（P〈0．05），其变化趋势是随照射剂量增加而表达逐渐降低。结论不同剂量辐射所致造血功能障碍与巨核细胞增殖抑制、细胞周期改变和调控因子IL-3和IL-3Rα的异常表达有关。

γ射线照射后肠上皮内淋巴细胞IFN-γ，分泌变化及对IEC-6增殖的影响

目的探索肠上皮内淋巴细胞（IEL）受照射后IFN-γ分泌的变化及其对肠上皮细胞增殖的影响。方法采用ELISPOT法观察IEL受^60Coγ射线8Gy照射前后IFN-γ的分泌变化；利用新分离的IEL及大鼠隐窝空肠上皮细胞株（IEC-6）为离体细胞模型，通过混合、双室（隔离）培养系统，用MTF法观察IEL对IEC-6增殖活性的影响。结果照射后IEL分泌IFN-γ增加，受照射IEL培养上清对IEC-6细胞增殖具有抑制作用，而双室培养可减轻抑制作用，加入抗IFN-γ抗体亦可减轻对IEC-6的抑制作用。结论IEL受照后IFN-γ的分泌增加，对IEC-6的增殖具有抑制作用，IFN-γ是一种重要的介质因子，细胞与细胞紧密接触是IEL影响IEC-6增殖分化的一种重要方式。

分泌性白细胞蛋白酶抑制剂的生物学功能及其在组织修复中的作用

分泌性白细胞蛋白酶抑制剂（secretary leukocyte protease inhibitor。SLPI）也叫抗白细胞蛋白酶（antileukoprotease，AIJP）或分泌性蛋白酶抑制剂（mucous protease inhibitor，MPI），为黏膜上皮细胞分泌的非糖基化单链多肽蛋白，是一种嗜中性弹性蛋白酶阳离子抑制剂，具有抗细菌、抗病毒、抗炎症因子和诱导细胞增殖分化等生物学功能，对创伤组织的愈合也具有重要作用。SLPI基因敲除的小鼠组织愈合十分困难，