氯胺酮对放烧复合伤小鼠肠源性感染影响的实验研究

目的 探讨氯胺酮对放烧复合伤小鼠肠源性感染的影响。方法 以放烧复合伤小鼠 (5Gyγ射线全身照射 +15 %Ⅲ度烧伤 )为动物模型 ;伤后 30min ,腹腔内注入氯胺酮 (2 0mg/kg)进行麻醉 ;伤后 3、5、7d检测肠道形态及功能变化 ;主要检测指标为小肠湿重、小肠绒毛高度及隐凹深度的显微测量、细菌移位检测实验、血浆内毒素含量检测等。结果 放烧复合伤后 ,氯胺酮麻醉组小肠绒毛高度及小肠湿重明显高于对照组 ,移位至肠系膜淋巴结、肝及血中的细菌和内毒素浓度较对照组降低。结论 氯胺酮麻醉能减轻放烧复合伤小鼠肠道损害 ,降低肠源性感染程度。

放烧复合伤大鼠血清对小鼠骨髓造血祖细胞的影响

以单纯烧伤、放射损伤为对照 ,观察放烧复合伤大鼠血清对骨髓造血祖细胞的影响及细胞因子的变化。用6 0 Coγ射线全身照射 12Gy ,5kW溴钨灯致大鼠背部 30 %全身体表面积Ⅲ度烧伤。伤后 3、12、2 4、4 8、72和 96小时无菌抽取大鼠血清。按 10 μg m1蛋白加入到骨髓红系或粒系培养体系中培养。伤后 2 4小时 ,应用ELISA法检测血清TNFα水平 ,应用放射免疫法检测IL 6含量。结果显示 ,无论烧伤或放烧复合伤血清组 ,伤后 3、12、2 4、4 8、72和 96小时的CFU E、BFU E和CFU GM培养集落数 ,均显著高于正常对照组 (P <0 .0 1) ,且以伤后 2 4小时最高 ,烧伤组高达 342 .8%、2 6 1.6 %和 2 2 8.4 % ;复合伤组为 2 5 2 .4 %、2 0 5 .1%和 174 .2 %。但当加入放射损伤大鼠血清时 ,CFU E、BFU -E和CFU GM集落数生长较少 ,最高为 12 .7%。同时 ,烧伤组和复合伤组血清TNFα和IL 6水平显著高于正常对照组 ,更高于放射损伤组。结论 :烧伤或放烧复合伤后的血清对骨髓红系和粒系造血均有明显的促进作用 ,放射损伤后的血清则有明显的抑制作用 ;该作用与血清细胞因子变化有关。

丹参对复合全身放射损伤大鼠创面的影响

目的:丹参能有效促进溃疡和表皮创面愈合,观察丹参对大鼠放射损伤复合局部创伤(简称放创复合伤)创面的影响。方法:实验于2003-01/07在第三军医大学药理学教研室完成。大鼠接受6Gy全身照射后在背部作圆形全层切除,局部给予丹参1g/cm2,连续7d。结果:伤后3～23d,丹参治疗组创面愈合速度明显快于对照组,其完全愈合时间为(19.17±2.93)d,较对照缩短3.83d。且治疗组创面蛋白和羟脯氨酸含量也明显高于对照。结论:丹参能加快放创复合伤创面愈合,且提高创面愈合质量。

机械牵张加重模拟缺血缺氧心肌细胞损伤的研究

目的 验证机械牵张加重模拟缺血缺氧对心肌细胞的损伤效应。方法 利用所建立的心肌细胞体外牵张模型 ,模拟施加缺血缺氧因素 ,观察心肌细胞形态、培养液中乳酸脱氢酶 (LDH)含量及碘化丙啶 (PI)染色阳性细胞比例的变化。结果 10 %牵张后 ,心肌细胞形态完整 ,LDH及PI染色阳性细胞比例无明显变化。模拟缺血缺氧后形态明显破坏 ,LDH及PI染色阳性细胞比例显著增加。牵张复合模拟缺血缺氧后 ,细胞形态破坏加剧 ,LDH含量急剧上升 ,PI染色阳性细胞比例进一步显著增加 (P <0 .0 1)。结论 机械牵张加剧了模拟缺血缺氧对心肌细胞的损伤效应 ,提示严重烧伤早期过多过快补液导致心脏前负荷的迅速增加对心肌组织产生牵拉可能会加剧业已存在的心肌细胞损伤 ,从而进一步促进了心肌损害的发生。

饥饿素对贫铀所致MC3T3-E1细胞损伤的保护作用研究

目的评价饥饿素对贫铀(DU)所致成骨细胞(MC3T3-E1细胞)损伤的影响。方法不同浓度的饥饿素提前1 h预处理MC3T3-E1细胞后暴露于DU(500μM)24 h,检测细胞存活率、细胞内抗酒石酸酸性磷酸酶(Str ACP)、碱性磷酸酶(AKP)、骨保护素(OPG)、可溶性核因子-κB受体活化因子配体(sRANKL)含量以及细胞内过氧化氢酶(CAT)和活性氧(ROS)水平。结果饥饿素预处理可明显提高DU暴露后细胞存活率及CAT含量,降低细胞内Str ACP、AKP、sRANKL/OPG以及ROS水平,并且存在剂量依赖关系。结论饥饿素通过调节OPG/RANKL系统的失衡以及降低细胞内氧化应激,发挥对DU暴露后MC3T3-E1细胞的保护作用。

PDGF-A基因修饰皮片对眼睑皮肤创伤修复的研究

目的利用PDGF-A基因修饰的全层皮肤皮片，利用HE染色、PCR、蛋白定量分析几个层面，探讨其对眼睑皮肤损伤修复的情况及部分机理。方法贵州小香猪6只，背部脊柱两侧造成全层皮肤缺损圆形创面（Ф3．67cm）各3个，共36个创面。A组（基因修饰皮片组）“PDGF-A基因修饰皮片”，移植到其右侧的18个创面作为实验组；B组（细胞皮片植入组）以HAM负载未经基因修饰的自体bMSCs与角朊细胞，构建成“细胞皮片”植入其左侧前6个创面；C组（单纯HAM敷盖组）单纯HAM敷盖其左侧后12个创面，作对照组。观察移植后1～4周内，各组创面愈合、肉芽组织生长、上皮化等情况。并进行创面组织HE、Laminin免疫组化及胶原含餐等检测。结果（1）A组于伤后15～17d愈合，B组于伤后21～23d愈合，C组于伤后24～26d愈合，A组较其它两组分别提前5～6d与8～9d愈合，且愈合质量好。（2）A组创面于移植15～17d，其肉芽组织生长旺盛，肉芽组织中Laminin、成纤维细胞和毛细血管含量丰富，可见胶原沉积。两对照组创面组织仍见许多炎细胞浸润，肉芽组织中Laminin、成纤维细胞和毛细血管含量少，胶原沉积不明显。结论PDGF-A基因修饰皮片移植对眼睑皮肤的创伤有较好的促愈作用，愈合质量较高。

全身照射大鼠骨髓提取液对真皮多能干细胞趋化作用的实验研究

目的 观察 5Gyγ射线全身照射后大鼠骨髓提取液对真皮多能干细胞 (dermalmultipotentstemcells ,dMSCs)的趋化作用 ,并定量分析尾静脉输注的dMSCs在大鼠体内的分布。方法 在Transwell培养体系中 ,观察骨髓提取液对dMSCs的趋化作用。3H TdR标记dMSCs ,经尾静脉输注到大鼠体内后 ,液闪法测量各组织内dMSCs的含量。结果 Transwell培养体系中 ,照射组骨髓提取液组从上层迁移到下层的细胞明显多于不照射的正常对照组和生理盐水组 (P <0 0 1)。照射后 1周始 ,照射组骨髓dMSCs含量明显高于正常对照组 (P <0 0 1) ;伤后 3周和 4周 ,照射组单位重量骨髓dMSCs含量也明显高于同组的肺脏、肝脏等组织。结论 全身照射大鼠骨髓提取液对dMSCs有很强的趋化作用 ,从而促进静脉输注的dMSCs偏向分布于损伤的骨髓。

CBL结合TBL在防原医学教学中的应用

当今社会核威胁依然存在,并且核事故可能就在身边。作为专门研究核辐射所致伤害及其防护的学科,防原医学逐渐受到人们的重视。防原医学所涉及的核武器损伤的医学防护能力及平时核事件的医学处置技术,对于即将从事国防卫生事业的军校学员,显得尤为重要。防原医学是在学员学习了基础医学和临床医学课程之后,专门为大四学员开设的课程。该学科理论性强,教学内容庞杂,知识更新速度快,同时又与许多学科之间有着广泛的交叉,

C3H1OT1/2细胞向神经元诱导分化的方法研究

目的探讨体外诱导间充质干细胞(mesenchymal stemc ells,MSCs)系C3H1OT1/2细胞分化为神经元细胞的方法。方法取3月龄SD大鼠1只,体重200g,进行神经元细胞的原代培养及诱导上清液的收集,用细胞免疫组织化学方法进行鉴定。将C3H1OT1/2细胞进行培养,分别用β巯基乙醇(A组)和神经元原代细胞上清液(B组)作为诱导剂,对C3H1OT1/2细胞进行诱导分化;对照组(C组)不加诱导剂进行培养。采用细胞免疫组织化学方法对分化的细胞进行鉴定。结果细胞免疫化学检测原代培养细胞为神经元,表达特异标志物:神经丝蛋白(neurofilament protein,NF)和神经元特异性烯醇化酶(neuronspecifi enolase,NSE)。A组C3H1OT1/2细胞经β巯基乙醇诱导2h即表达NF和NSE,5h表达强度增强。B组C3H1OT1/2细胞经原代神经元培养上清液诱导,1d有NF和NSE表达,但表达强度比A组弱。各组NSE表达阳性率和强度均高于NF。结论化学分子和微环境体液因素均可诱导MSCs向神经元细胞分化;为MSCs通过神经分化参与脑创伤的修复提供了理论依据。

RNAi作用机制研究进展及其应用

RNA干扰(RNAinterference,RNAi)是由双链RNA(doublestrandedRNA,dsRNA)引发的转录后基因沉默机制(posttranscriptionalgenesilencing,PTGS)[1]。RNA干扰可以简单、有效、特异地下调细胞中基因的表达,它不但是研究基因功能的一种有力工具,而且为特异性基因治疗提供了新的技术手段。本文介绍了目前RNA干扰作用机制,与之相关的酶、蛋白、“扳机点”和调节因子,及RNA干扰在生物学方面的应用。

p38对骨髓间充质干细胞成肌分化作用的研究

目的以5氮杂胞苷(5AzaCR)诱导骨髓间充质干细胞(MSCs)成肌分化,探讨生肌调控因子中Myf5的表达及信号转导通路p38在此分化过程中的作用。方法分离、纯化MSCs,以10μmol/L5AzaCR诱导其向成肌细胞分化,RTPCR测定Myf5的表达,免疫组化检测肌球蛋白(myosin)的表达,Westernblot检测p38信号通路特异抑制剂SB203580作用前后磷酸化p38的变化。结果SB203580作用后,Myf5表达由6h延迟至9h,诱导12d部分MSCs表达myosin,18d表达的数量及程度明显增加;5AzaCR诱导后,磷酸化p38蛋白水平较作用前增强,但在SB203580抑制后明显受抑。结论5AzaCR诱导后,MSCs表达生肌调控因子并向成肌细胞分化,p38在此分化过程中起着正向信号转导作用。

C反应蛋白对合并^(60)Coγ射线放射损伤家兔创面的影响

目的观察纯化的人C反应蛋白(C-reactive prote in,CRP)对合并放射损伤家兔创面的影响。方法亲和层析法纯化CRP,SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳和双向免疫扩散法鉴定CRP纯度和抗原特异性。家兔接受5Gyγ射线照射后,背部切出4个直径为2 cm的圆形创面,随机选择创面给予生理盐水或CRP(每个创面5、50、500μg),连续5 d。伤后3、7、14及21 d测定创面愈合率、创面组织蛋白和羟脯氨酸含量。结果分离纯化的CRP纯度为92%,抗原特异性好。伤口局部使用CRP未显著加快放、创复合伤创面愈合速度,但50、500μg/每个创面的CRP治疗组伤后7 d创面组织蛋白和羟脯氨酸含量明显高于对照组(P<0.05)。结论本研究表明CRP提高放、创复合伤创面愈合早期的愈合质量。

严重烧伤早期小鼠腹腔巨噬细胞糖皮质激素受体变化及安定-氯胺酮对其影响

目的 观察严重创伤早期小鼠腹腔巨噬细胞糖皮质激素受体 (GR)蛋白表达的变化 ,并探讨安定 氯胺酮对其变化的影响 ,为安定 氯胺酮在创伤应激中的作用提供可靠实验依据。方法 95只成年健康昆明小鼠 ,随机分为正常对照组、烧伤组、安定 氯胺酮处理组、烧伤后安定 氯胺酮处理组 ,应用Westernblot技术检测各组小鼠处理后早期 2 4h内不同时期腹腔巨噬细胞GR的蛋白表达水平。结果 小鼠严重烧伤后 30min ,腹腔巨噬细胞中GR的表达就已经开始降低 ,在 6h达到最低 ,显著低于正常对照组 ,12h时逐渐回升 ,但在 2 4h时仍低于正常。而安定 氯胺酮组GR的表达水平无显著差异 ,在严重烧伤后应用安定 氯胺酮能明显地抑制GR蛋白表达水平的降低 ,烧伤后安定 氯胺酮处理组各时相点与正常对照组相比无显著差异。结论 严重烧伤可引起小鼠腹腔巨噬细胞GR表达水平的下降 ,而单纯应用安定 氯胺酮对小鼠腹腔巨噬细胞GR的表达水平无明显影响 ,在严重烧伤后应用安定 氯胺酮能显著抑制GR水平的下调 ,故安定 氯胺酮可能部分改善小鼠严重烧伤诱发的应激状态。

全身辐射损伤大鼠伤口中性粒细胞凋亡及W_(11)-a_(12)促进伤口愈合的作用

目的:促愈合药W_11-a_12能显著提高伤口中性粒细胞(neutrophils,Neu)的数量和功能,观察合并全身放射损伤大鼠伤口Neu凋亡率的变化,并观察促伤口愈合药W_11-a_12的作用。方法:实验于1999-05/10在解放军第三军医大学预防医学院全军复合伤研究所完成。将健康成年大鼠随机分为单纯创伤组和6Gy放射复合伤组。6Gy放射复合伤组动物在接受6Gyγ射线全身照射后立即在背部致创伤,伤口局部给予生理盐水或W_11-a_12(每伤口10mg)。从埋入伤口的海绵分离伤口细胞,分别采用TUNEL法、Westemblot及RT-PCR方法检测伤口Neu凋亡率、Neu中Bcl-2蛋白、mRNA含量,透射电镜观察伤口凋亡的Neu。结果:伤后3,6,12,24及48h6Gy放射复合伤组伤口Neu凋亡率变化曲线呈“∧”型,而单纯创伤组呈“∨”型。伤后6,12,24h6Gy放射复合伤组Neu凋亡率分别为(9.90±2.26)%,(12.50±1.83)%和18.16±5.56)%,显(著高于单纯创伤组的(6.44±1.96)%,(2.74±1.22)%和(7.38±2.10)%(t=2.01,2.81,2.52,P<0.05),同时Neu中Bcl-2蛋白及mRNA表达均低于单纯创伤组。W_11-a_12使用组与对照组伤口Neu凋亡率无明显差异。结论:全身电离辐射后伤口Neu凋亡率增加且变化规律与单纯创伤组明显不一致,这与电离辐射引起伤口愈合延缓有关。

小鼠皮肤创伤后创面局部真皮干细胞参与修复过程

目的研究小鼠皮肤创伤后,创面局部的真皮干细胞是否被激活并参与创伤愈合过程。方法小鼠背部行全层皮肤损伤后,首先应用腹腔单次注射BrdU 2 h后标记快速分裂细胞(rapidly dividing cells,RDCs),检测创面局部组织中不同时间点细胞增殖反应情况;其次通过多次连续注射BrdU长时间后在体检测标记存留细胞(label-retaining cells,LRCs),以反映创伤后局部真皮干细胞被激活情况;最后分离BrdU在体多次连续标记后的肉芽组织细胞和正常真皮细胞,通过比较其集落形成能力并检测BrdU信号存留情况,研究肉芽组织中真皮干细胞被激活和参与修复的情况。结果单次注射BrdU 2 h后,在正常皮肤组织中,仅在表皮基底层和毛囊上皮细胞中存在少量的BrdU阳性细胞,而创伤后在创缘表皮、毛囊、创缘真皮和肉芽组织细胞都发生了明显的增殖反应;创伤后多次连续注射BrdU 3 d后,通过长时间示踪,证实创面愈合后肉芽组织中存在LRCs,而在正常真皮组织中未检测到被BrdU标记的细胞;进一步发现肉芽组织细胞较正常真皮细胞具有更强的集落形成能力,且在肉芽组织细胞形成的集落中仍可检测到BrdU信号阳性的LRCs。结论创面肉芽组织中存在具有干细胞特性的LRCs,提示皮肤创伤后局部真皮干细胞被激活并参与创伤愈合过程。

人羊膜负载猪角朊细胞构建皮肤表皮替代物的实验研究(英文)

背景:人羊膜为半透明的薄膜,含有多种促进细胞增殖的营养成分,是一种较好的负载角朊细胞的生物材料。目的:将人羊膜负载培养猪角朊细胞构建皮肤表皮替代物,并观察猪角朊细胞在人羊膜上生长增殖的形态特点。设计:以细胞为研究对象,单一样本研究,重复测量观察。单位:解放军第三军医大学预防医学院全军复合伤研究所。材料:实验于2001-01/11在创伤、烧伤和复合伤国家重点实验室,第三军医大学预防医学院全军复合伤研究所完成。猪角朊细胞取自3月龄贵州小香猪。方法:将贵州小香猪的角朊细胞原代培养,传代扩增后,将角朊细胞以1.63×105/cm2的密度接种于人羊膜基质面,逐日于倒置显微镜下观察角朊细胞的生长增殖变化情况,并于培养3d与15d进行光镜、电镜观察,检测角朊细胞在人羊膜上的生长情况。主要观察指标:角朊细胞在人羊膜上的生长情况。结果:倒置显微镜下观察接种后30min内明显见到角朊细胞在人羊膜上黏附,24h内大部分黏附生长,3d形成单层完全覆盖人羊膜。光镜下人羊膜负载角朊细胞3d,可见角朊细胞在人羊膜基质面黏附呈单层生长,细胞扁平紧密排列。扫描电镜下可见胞体呈多边形,多见胞膜突起。透射电镜下可见角朊细胞与人羊膜黏附良好,生长在人羊膜上的角朊细胞内有许多角质丝。生长至15d,在倒置显微镜和扫描电镜下均可见,细胞因过于拥挤而隆起,因老化而形成较多碎片,部分细胞有空洞形成。结论:人羊膜是角朊细胞在体外培养的良好载体,对角朊细胞有明显的促增殖作用。但人羊膜负载角朊细胞生长至15d,因老化部分细胞有空洞形成。

端粒酶hTERT亚单位启动子靶向性慢病毒对肿瘤活体实时显像的实验研究

目的构建一种含优化型人端粒酶催化亚单位(hTERT)启动子的慢病毒,结合小动物活体光学成像系统,研究该启动子对端粒酶阳性肿瘤的特异性活体成像作用。方法将文献报道的优化型hTERT启动子克隆到pGL-Basic质粒,对优化型hTERT启动子进行功能检测。确定其驱动活性之后,构建一种含该启动子和GFP的第3代慢病毒表达系统,以含CMV启动子的慢病毒作为对照。采用小动物荧光成像系统体内外研究优化型hTERT启动子在肿瘤实时诊断中的作用。结果启动子功能检测发现hTERT启动子具有严格的端粒酶阳性肿瘤细胞特异性,并且具有很高的报告基因报答水平。第3代慢病毒包装系统获得了高滴度的病毒颗粒并且能高效整合报告基因之宿主细胞。体外研究表明,含有优化型hTERT启动子的慢病毒体外感染细胞后,能够在端粒酶阳性肿瘤细胞内特异表达GFP,并且能维持长达40d的报告基因表达时间。体内实验发现,感染含优化型hTERT启动子的慢病毒之后24h,端粒酶阳性活体肿瘤能够被特异性的实时观察到,并且肿瘤内的GFP信号在存活裸鼠体内维持30d,随肿瘤增大而增强。结论优化后hTERT启动子对报告基因的调控具有严格的端粒酶特异性,第3代慢病毒系统可将该启动子和报告基因整合至细胞基因组,并实现在端粒酶阳性肿瘤细胞内的特异表达。结合小动物活体光学成像系统,荷瘤裸鼠内的端粒酶阳性肿瘤能够被无创的、实时的、特异性的成像,为肿瘤的特异性早期诊断提供新的实验理论基础。

周细胞的研究进展

长久以来,周细胞的存在和作用一直很少受重视。但是作为微血管的构成成分之一,周细胞在微血管的发生、发展、稳定、成熟,以及再塑形的过程中都起着重要作用,近来越来越受到关注。本文就周细胞的定位,结构,表达,功能,相关的信号通路,以及和内皮细胞的相互作用进行了综述,为在周细胞的研究提供参考。

烧伤后小鼠类固醇受体辅活化子的表达变化

目的 观察小鼠烧伤后早期类固醇受体辅活化子（SRC）蛋白表达的时相变化，初步探讨烧伤早期糖皮质激素抵抗的分子机制。方法 将30只健康C57／129雄性小鼠随机分为正常对照组与烧伤组，烧伤组给予背部TBSA15％～20％Ⅲ°烧伤。分别于伤后1、6、12、24小时采用Westernblot测定肝、脾组织SRC家族（SRC-1、GRIP-1、NC0A-3）蛋白表达水平的变化。结果 烧伤组肝组织SRC-1蛋白表达水平在烧伤后l小时即显著降低，6小时降至最低，以后逐渐恢复，至24小时与正常对照组相比无显著差异；正常脾组织SRC-1蛋白表达水平较低，测定结果无统计学意义。烧伤组肝组织GRIP-1、NC0A-3蛋白表达水平在烧伤后显著升高，12小时达到高峰，24小时仍显著高于正常对照组；烧伤组脾组织GRIP-1、NC0A-3在烧伤后1小时显著升高，GRIP-1在烧伤后6小时达到高峰，24小时与正常对照相比差异不显著；而NC0A-3在烧伤后12小时达到高峰，24小时显著高于正常对照组。结论 小鼠烧伤后早期SRC-1显著降低，GRIP-1、NC0A-3显著升高，烧伤后糖皮质激素抵抗的发生发展可能与SRC家族成员表达变化有关。