牛磺酸营养干预下缺氧大鼠视网膜中葡萄糖转运蛋白1的表达

目的观察高原缺氧条件下大鼠视网膜中葡萄糖转运蛋白1(GLUT-1)的变化,探讨牛磺酸对视网膜缺氧适应的影响。方法96只SD大鼠随机分为6组,对照组(C)、牛磺酸组(T)、4500m缺氧组(45H)、4500m缺氧+牛磺酸组(45HT)、5500m缺氧组(55H)和5500m缺氧+牛磺酸组(55HT),分别以基础饲料和添加了2.4%牛磺酸的饲料喂养1周,营养干预后C组、T组继续在平原饲养,45H组、45HT组和55H组、55HT组放入低压氧舱分别模拟4500m和5500m高度的高原缺氧条件。在处理0、1、2、3d后取视网膜,提取总RNA和总蛋白,应用RT-PCR和Westernblot方法检测视网膜GLUT-1mRNA和蛋白表达。结果缺氧第1天视网膜中GLUT-1mRNA与蛋白的表达显著降低(P<0·05)。缺氧第2天mRNA与蛋白的表达开始回升,第3天mRNA的表达恢复正常水平,蛋白的表达高于对照,牛磺酸处理后表达量均比对应的缺氧组高。结论高原缺氧条件下,牛磺酸能通过上调GLUT-1的表达促进视网膜缺氧适应性调节机制的建立。

葛根黄酮提取物对HL-60细胞增殖和凋亡的影响

目的观察葛根黄酮提取物对HL-60细胞的影响及作用机制。方法用MTT测定对HL-60细胞增殖的影响;用流式细胞仪检测细胞周期变化及凋亡情况;采用NBT比色法检测诱导HL-60细胞分化的能力;DNALadder检测HL-60细胞的凋亡特征及效果;用TUNEL检测体内诱导凋亡能力。结果葛根黄酮提取物有较强抑制HL-60细胞生长和增殖能力,处理3d可出现明显的凋亡特征,凋亡率可达38.3%,其诱导分化能力弱,葛根黄酮提取物的主要成分葛根素和大豆甙元的诱导凋亡能力弱,但大豆甙元具有较强的诱导HL-60细胞分化的能力,葛根黄酮提取物有体内诱导凋亡抗肿瘤能力。结论葛根黄酮提取物可通过诱导细胞凋亡抗人白血病HL-60细胞的生长。

牛磺酸对高原缺氧大鼠视网膜形态结构及SDH、LDH活性的影响

目的观察急性持续性高原缺氧条件下视网膜结构、功能变化,探讨牛磺酸对视网膜缺氧损伤的保护作用。方法以低压舱模拟4 500 m和5 500 m高原条件,SD大鼠经2.4%牛磺酸干预后入舱缺氧。光镜观察视网膜层状结构,检测琥珀酸脱氢酶(SDH)和乳酸脱氢酶(LDH)活性的变化,电镜技术观察视网膜Müller细胞的超微结构。结果缺氧使内核层、内网状层和节细胞层受损。缺氧早期内网状层细胞移行高于对照组(P<0.05),4 500 m时牛磺酸促进细胞的移行,5 500 m早期抑制细胞移行。缺氧后Müller细胞肿胀,核崩解,细胞器变形,添加牛磺酸损伤减轻。缺氧导致SDH与LDH活性显著下降(P<0.05),牛磺酸能上调其活性(P<0.05)。结论缺氧引起视网膜内层细胞出现损伤,牛磺酸能显著提高SDH、LDH的活性,减轻视网膜的缺氧损伤,其保护作用与Müller细胞的功能和结构维持相关。

胆固醇合成抑制剂洛伐他汀对HL-60细胞caspase-3基因表达的影响

目的 观察胆固醇合成抑制剂洛伐他汀 (lovastatin ,LOV)对HL 60细胞caspase 3基因表达的影响 ,进一步探讨其抑制细胞增殖、诱导细胞凋亡的分子机制。方法 4、8、16μmol/LLOV处理HL 60细胞 1～ 4d后 ,MTT比色法及生长曲线测定检测细胞增殖效应 ,流式细胞仪测定细胞周期相的分布及凋亡率 ,DNA梯形带检测观察细胞的凋亡效应 ,RT PCR及Westernblot方法分别分析LOV对HL 60细胞caspase 3mRNA、caspase 3蛋白表达的影响。结果 LOV能显著抑制HL 60细胞增殖 ,使细胞周期阻滞于G0 /G1期 ,细胞凋亡率增加 ,有凋亡特征性的DNA梯形带出现 ;LOV能上调HL 60细胞cas pase 3蛋白表达 ,但对caspase 3mRNA表达无明显影响 ,该作用呈剂量 效应和时间依赖关系。结论 LOV对HL 60细胞有增殖抑制和诱导凋亡作用 ,LOV能上调HL 60细胞caspase 3蛋白表达 ,推测这可能是LOV抑制HL 60细胞增殖并诱导其凋亡的重要分子机制。

N-6/N-3多不饱和脂肪酸不同比例对乳腺癌细胞缝隙连接细胞通讯的影响

目的观察n-6／n-3多不饱和脂肪酸（polyunsaturated fatty acid，PUFA）不同比例对乳腺癌细胞缝隙连接细胞通讯的影响。方法n-6／n-3PUFA不同比例（1～10）处理MCF-7（ER^＋）和MDA-MB-231（ER^-）乳腺癌细胞，采用免疫细胞化学观察细胞核Ki-67表达，Western blot检测细胞膜和细胞质缝隙连接蛋白Cx26、Cx43表达，划痕负载染料迁移法分析细胞缝隙连接通讯功能。结果免疫组化结果显示，单纯n-6和10：1n-6／n-3 PUFA增强两种乳腺癌细胞Ki-67表达（P〈0．05），5：1 n-6／n-3 PUFA虽无明显变化，但单纯n-3和1：1n-6／n-3 PUFA抑制细胞Ki-67表达（P〈0．01）。免疫印迹发现，单纯n-3和1：1n-6／n-3 PUFA能明显上调MCF-7细胞膜和细胞质的Cx26、Cx43蛋白表达，单纯n-6 PUFA却下调两种蛋白表达；在MDA-MB-231细胞，n-6／n-3 PUFA不同比例对膜和细胞质的Cx43蛋白表达与MCF-7细胞具有相同趋势，但对Cx26蛋白则无明显作用。用划痕负载染料迁移法却发现，n-6／n-3 PUFA不同比例对细胞缝隙连接通讯功能均无明显影响。结论单纯n-3和1：1n-6／n-3PUFA对MCF-7和MDA-MB-231乳腺癌细胞增殖活性的抑制作用，可能是Cx26和Cx43蛋白通过独立于缝隙连接细胞通讯功能的调节所致。

CYCLIND1/CDK4在洛伐他汀抑制裸鼠乳腺癌移植瘤增殖中的作用

目的以裸鼠乳腺癌异种移植瘤动物模型为研究对象,检测了洛伐他订(LOV)对高表达BRCA1基因乳腺癌异种移植瘤生长能力的影响,并初步探讨了其作用的分子机制。方法将PCDNA3-BETA-HA-HSBRCA1质粒进行扩增、鉴定后,运用脂质体转染MCF-7乳腺癌细胞,经RT-PCR、WESTERN BLOTTING鉴定转染后BRCA1的表达,以2×106个MCF-7、MCF-7BRCA1细胞接种BALB/C裸鼠,建立乳腺癌细胞异种移植瘤动物模型,肿瘤生长4周后,皮下注射LOV[50MG/(KG.D)]10D,检测肿瘤的增殖能力和组织病理学变化,RT-PCR、WESTERN BLOTTING检测CYCLIND1、CDK4MRNA及蛋白表达。结果裸鼠分别接种MCF-7、MCF-7BRCA1细胞后均能长出肿瘤,成瘤率为100%,组织病理切片观察其生物学特性没有发生改变;经LOV干预10D后,MCF-7细胞和MCF-7BRCA1细胞移植瘤体积均缩小,移植瘤内CYCLIND1、CDK4MRNA及蛋白表达降低;癌细胞数减少,坏死灶增多,且MCF-7BRCA1细胞移植瘤组变化更明显。结论洛伐他汀明显阻滞高表达BRCA1基因乳腺癌异种移植瘤的生长、增殖,这可能与移植瘤组织内CYCLIND1、CDK4表达的降低有关,该效应提高了乳腺癌异种移植瘤对洛伐他汀的敏感性,增强了洛伐他汀的抗肿瘤作用。

牛磺酸降低高原低氧时视网膜谷氨酸兴奋性及其机制

目的观察牛磺酸对高原低氧时视网膜中谷氨酸兴奋性的影响并探讨其作用的机制。方法大鼠随机分为对照组(Con)、牛磺酸组(Tau)、4500m低氧组(45H)、4500m低氧+牛磺酸组(45HT)、5500m低氧组(55H)和5500m低氧+牛磺酸组(55HT),分别以基础饲料和添加了牛磺酸的饲料喂养1w后,模拟4500m和5500m的高原低氧条件。免疫组化检测谷氨酸的分布,RT-PCR检测谷氨酸转运蛋白(GLAST)和谷氨酰胺合成酶(GS)表达。结果谷氨酸的染色随低氧程度增加而加深,牛磺酸干预后各层染色明显变浅。低氧初期GLASTmRNA表达较高,12h后表达降低,时间延长,降低幅度增大,牛磺酸干预组的表达基本恢复正常。4500m组在低氧初期GSmRNA表达反应性增强,之后逐渐降低,5500m组的表达则随低氧时间延长逐渐降低,牛磺酸干预使其表达提高。结论预防性地给予牛磺酸能降低高原低氧所致的谷氨酸高兴奋性,作用的机制可能是牛磺酸通过增加GLAST和GS的表达提高Müller细胞对谷氨酸的摄取和代谢。

辛基酚和三羟异黄酮对大鼠乳腺癌ER、AIB1和PCNA表达的影响

目的:探讨辛基酚和三羟异黄酮对大鼠乳腺癌激活因子(AIB1)、雌激素受体(ER)和增殖细胞核抗原(PCNA)表达的影响。方法:动物随机分为正常对照组(Con)、二甲苯恩(DMBA)诱导乳腺癌模型组(Mod)、三羟异黄酮组(GEN)、辛基酚组(OP)和联合作用组(GP),采用RT-PCR和免疫组化检测正常乳腺组织和乳腺癌组织中AIB1、ER和PCNA的mRNA或蛋白表达水平。结果:与Con组比较,Mod组乳腺癌组织中AIB1和ER mRNA表达水平上调,PCNA、ER表达量增加。与Mod组比较,GEN组乳腺癌组织中AIB1、ER mRNA及ER表达量明显降低,而OP组AIB1、ER mRNA和ER、PCNA表达水平则明显增加。与OP组比较,GP组能部分降低乳腺癌组织中AIB1、ER mRNA和ER、PCNA的表达量。结论:OP上调乳腺癌组织中AIB1、ER、PCNA的表达使二甲苯蒽诱导乳腺癌的发生率增加,而GEN及其与OP联合作用可下调AIB1、ER和PCNA的表达量,降低诱导乳腺癌的发生。

牛磺酸对低氧诱导的大鼠视网膜Müller细胞细胞骨架蛋白的影响

目的观察牛磺酸对低氧培养的视网膜Mller细胞特征性骨架蛋白的影响。方法体外纯化培养并鉴定大鼠视网膜Mller细胞,流式细胞技术检测低氧培养时牛磺酸干预对细胞周期的影响,免疫荧光法观察细胞中的胶质纤维酸性蛋白(GFAP)、波形蛋白和S-100的变化。结果低氧降低Mller细胞24h活性,牛磺酸促进阻滞于G0/G1期的细胞进入S期和G2/M期。低氧引起Mller细胞GFAP和波形蛋白表达增强,S-100表达核质比降低。0.1、1、10mmol/L的牛磺酸预处理减弱低氧引起的GFAP和波形蛋白的过表达。S-100表达核质比在牛磺酸处理后趋于正常。结论低氧导致的Mller细胞特征性蛋白表达变化可被牛磺酸减轻或阻止。

大豆异黄酮防治妇女雌激素缺乏相关疾病的研究进展

大豆异黄酮的结构与雌激素 17β_雌二醇相似 ,具有雌激素活性而被称为植物雌激素。绝经后妇女热潮红、心血管疾病、骨质疏松症和老年性痴呆等发病率升高 ,可能与体内雌激素水平下降有关。本文综述了近年来有关大豆异黄酮防治绝经后妇女雌激素缺乏相关疾病的研究进展。

洛伐他汀对HL-60细胞Fas抗原表达的影响

目的:观察洛伐他汀(LOV)对HL-60细胞Fas抗原表达的影响,探讨其抑制细胞增殖、诱导细胞凋亡的可能分子机制。方法:采用流式细胞仪检测HL-60细胞的细胞周期相分布,细胞凋亡率,Fas抗原表达水平。结果:4、8、16μmol/LLOV处理HL-60细胞48h后,G0/G1期细胞增多、细胞凋亡百分率增加、增殖指数降低、Fas抗原的平均荧光强度增加,与剂量呈正相关。结论:LOV对HL-60细胞有增殖抑制和诱导凋亡作用,上调节Fas抗原表达可能是其分子机制之一。

Caspases在视黄酸诱导pRARE4-IFNα转染肿瘤细胞凋亡中的作用

目的探讨视黄酸(RA)及其诱导的外源性α-干扰素(IFNα)抗肿瘤作用与半胱氨酸蛋白酶(caspase)的关系。方法含视黄酸反应元件(RARE)的IFNα表达载体(pRARE4-IFNα),转染肿瘤细胞并证实外源性IFNα基因的表达受RA的诱导后,分析了细胞增殖功能、细胞DNA梯形带,caspase-1、3基因表达,caspase-3活性以及caspase-3特异性抑制剂(DEVD-CHO)对RA和/或IFNα诱导细胞凋亡的抑制作用。结果对RA敏感的HL-60细胞和caspase-3基因缺失的MCF-7细胞经RA处理后,增殖能力减弱,出现明显的DNA梯形带,caspase-1基因表达上调节,HL-60细胞caspase-3基因表达上调节,活性升高,DEVD-CHO可拮抗RA引起的HL-60细胞caspase-3活性升高,并部分削弱RA引起的细胞增殖抑制和凋亡。结论Caspase-3在RA诱导的细胞凋亡中有重要作用,同时,RA可能通过其它途径诱导caspase-3基因缺失细胞的凋亡。

视黄酸对pRARE4-IFNα表达载体转染HL-60细胞放射敏感性的影响

目的探讨视黄酸(RA)及其诱导的外源性α-干扰素(IFNα)对肿瘤细胞放射敏感性的影响及其可能机制。方法含视黄酸反应元件(RARE)的IFNα表达载体(pRARE4-IFNα),转染肿瘤细胞并证实外源性IFNα基因的表达受RA的诱导后,对细胞进行RA和辐射联合处理,分析细胞增殖功能、细胞DNA片段化百分率,caspase-3蛋白表达与活性,以及caspase-3特异性抑制剂(DEVD-CHO)对RA和/或辐射的效应的拮抗作用。结果HL-60和HL-60IFNα细胞经2×10-7mol/L RA和/或4 Gy60Coγ射线电离辐射处理后,细胞增殖能力减弱,DNA片段化百分率增加,caspase-3蛋白表达上调,活性升高,RA和辐射联合处理作用更明显,DEVD-CHO可拮抗RA引起的caspase-3活性升高,并部分削弱RA引起的细胞增殖抑制和凋亡。结论RA及其诱导的外源性IFNα可提高肿瘤细胞放射敏感性,caspase-3的表达和活性升高在RA和辐射诱导细胞凋亡过程中可能具有重要作用。

Lovastatin对人粒系白血病细胞增殖和细胞周期的影响

目的:观察洛伐他汀(lovastatin ,LOV)对体外培养的人粒系白血病细胞株HL - 6 0增殖和细胞周期的影响。方法:采用生长曲线测定、MTT检测、流式细胞仪分析等实验技术。结果:LOV对HL - 6 0细胞有增殖抑制作用,能使细胞周期阻滞于G0 /G1期,该作用呈剂量-效应和时间依赖关系。结论:LOV能抑制HL - 6 0细胞的增殖,同时影响该细胞的细胞周期进程。

模拟海拔5000m高原间断性缺氧对大鼠视网膜的损伤及牛磺酸的防护作用

目的 探讨间断性低氧对大鼠视网膜的损伤及牛磺酸的防护作用。方法 动物经基础饲料饲养或牛磺酸干预 4周后 ,利用低压舱模拟 5 0 0 0m海拔高度 ,每天低氧停留时间为 8h ,连续 3d。用氨基酸分析仪检测视网膜中牛磺酸、谷氨酸和γ氨基丁酸的含量 ,通过免疫组织化学方法观察大鼠视网膜中谷氨酸和γ氨基丁酸的分布情况 ,通过电镜观察大鼠视网膜外网状层双极细胞超微结构变化。结果 高原缺氧引起大鼠视网膜各层组织及细胞结构的明显损伤 ,而牛磺酸干预能减轻缺氧对视网膜的损伤。高原缺氧导致视网膜组织中的谷氨酸和牛磺酸含量显著增加 ,而牛磺酸干预能拮抗缺氧引起Glu的升高。结论 牛磺酸营养干预能明显拮抗高原缺氧引起的视网膜组织中的谷氨酸含量增加而降低谷氨酸的兴奋毒性作用 ,从而对视网膜的神经元起到保护作用。

大豆异黄酮防治妇女雌激素缺乏相关性疾病的研究进展

大豆异黄酮是一种结构与雌激素17β-雌二醇棚似,具有雌激素活性的重要植物雌激素。妇女绝经后由于雌激素水平下降,热潮红、心血管疾病、骨质疏松症和老年性痴呆等发病率升高。本文综述了近年来有关大豆异黄酮防治绝经后妇女雌激素缺乏相关性疾病的研究进展。

三羟异黄酮对照射小鼠造血系统损伤的防护作用

目的 探讨三羟异黄酮 (Genistein)对辐射损伤小鼠造血系统的防护作用。方法 6 0Gyγ射线全身照射BALB c雄性小鼠 ,分 4组 ,照射前 2 4h给予genistein灌胃 ,观察小鼠照射后 30d存活情况及不同时相点有关造血指标的变化 ,同时HE染色观察骨髓病理学改变。结果 Genistein处理组小鼠骨髓照后损伤较R组轻 ,外周血WBC、骨髓有核细胞数和CFU S下降幅度小且恢复较快(P <0 .0 5 ) ,同时genistein能明显延长辐射损伤小鼠的平均存活天数、提高小鼠 30d存活率 (P <0 0 5 ) ,以上结果均与已烯雌酚处理组相似 ,而且genistein对小鼠脾重系数的恢复也有一定的促进作用 (P <0 0 5 )。结论 Genistein能降低辐射对小鼠造血系统的损伤 ,具有一定的辐射保护作用。

视网膜光化学损伤感光细胞凋亡的分子基础

视网膜光化学损伤动物模型是研究视网膜变性类疾病的良好模型 ,研究发现凋亡是视网膜感光细胞光化学损伤以及其它视网膜变性疾病感光细胞丢失的主要机制[1 ] 。本文阐述了核转录因子κB(NFκB)体系 ,arrestin蛋白家族 ,AP- 1和神经营养因子受体 P75 NTR等调控感光细胞凋亡的分子机制。