缺氧预适应小鼠脑匀浆提取液对Hep G2细胞缺氧耐受性的影响

目的:探讨缺氧预适应小鼠脑匀浆提取液(HP)对Hep G2细胞缺氧耐受性的影响.方法:用4种浓度的HP作用于缺氧(2%O2)培养HepG2细胞,以同浓度正常小鼠脑匀浆提取液(NP)作对照,检测了在缺氧培养后,Hep G2细胞的MTT值、早期凋亡率(Annexin V-FITC/PI双染流式细胞仪检测)、晚期凋亡率(Hoechst33258染色荧光显微镜检测).结果:低浓度HP对Hep G2细胞有保护作用,而高浓度HP对Hep G2细胞有损伤作用.结论:HP的作用有浓度依赖性和时间依赖性.

不同浓度缺氧预适应小鼠脑匀浆提取液对PC12细胞缺氧耐受性的影响

目的:探讨缺氧预适应小鼠脑匀浆提取液(HP extract)对PC12细胞缺氧耐受性的影响。方法:复制小鼠急性重复缺氧模型,制备HP extract。在培养PC12细胞中加入HP extract使其终浓度分别为0.2、0.8、3.2、6.4、12.8g/L(HP组)。以同浓度正常小鼠脑匀浆提取液(N extract)作为对照组(N组)。缺氧(2%O2)培养24、48、72h后,采用四唑盐(MTT)比色法检测各组细胞活力(A570值)并检测缺氧24、48、72h乳酸脱氢酶(LDH)透出率、缺氧24h早期凋亡率(Annexin V-FITC/PI双染流式细胞仪检测)、缺氧72h晚期凋亡率(Hoechst33258染色荧光显微镜检测)。结果:HP extract浓度低于6.4g/L(包括6.4g/L),缺氧培养24h时,HP组A570值显著高于同浓度N组,其LDH透出率显著低于同浓度N组。随缺氧时间延长,高浓度HP extract逐渐失去细胞保护作用。至72h时浓度高于6.4g/L(包括6.4g/L)HP extract有促细胞凋亡作用,此时HP组A570值显著低于同浓度N组,其LDH透出率和晚期凋亡率均显著高于同浓度N组。结论:缺氧预适应小鼠脑匀浆提取液对PC12细胞缺氧耐受性的影响呈浓度依赖性和时间依赖性。

缺氧预适应小鼠脑匀浆去蛋白液中抗缺氧有效成分的初步研究

目的探讨缺氧预适应小鼠脑匀浆去蛋白液(deproteinized brain tissue extracts of hypoxia-preconditioned mice,DHP)对NGF诱导分化的PC12细胞缺氧耐受性的影响及其与腺苷的关系。方法复制缺氧预适应小鼠模型,高氯酸法制备DHP。HPLC法检测DHP中腺苷含量及正常小鼠脑匀浆去蛋白液(deproteinized brain tissue extracts of normal mice,DN)中腺苷含量。在已分化PC12细胞中加入DHP,以DN作对照,以1.0、10.0、100.0μmol/L的腺苷为阳性对照,分别于缺氧(2%O2)培养24、48、72h后检测MTT值、LDH透出率以及72h晚期凋亡率;在DHP、10.0μmol/L腺苷阳性对照组中分别加入腺苷A1、A2A受体阻断剂DPCPX、SCH58261(5.0μmol/L),以DN作对照,缺氧24、48、72h后分别检测各组MTT值、LDH透出率。结果DHP中腺苷含量显著高于DN;缺氧24h时,DHP组MTT值显著高于DN组,其LDH透出率显著低于DN组。随缺氧时间延长,DHP保护作用逐渐减弱,至72h时,DHP组MTT值、LDH透出率、晚期凋亡率与DN组均无显著差异;A2A受体阻断剂SCH58261可阻断DHP的保护作用。结论DHP在缺氧初期对分化PC12细胞的保护作用与缺氧预适应中腺苷含量增加有关,保护作用可能通过A2A受体实现。

缺氧预适应小鼠脑匀浆提取液增强分化PC12细胞缺氧耐受性的最适浓度研究

目的:探索缺氧预适应小鼠脑匀浆提取液(Brain tissue extract of hypoxia-preconditioned mice,BHP)对NGF诱导分化的PC12细胞缺氧耐受性的影响及保护性作用的适合浓度。方法:复制小鼠急性重复缺氧模型,制备BHP,用考马斯亮蓝法定量蛋白。在分化PC12细胞中加入BHP使其蛋白终浓度分别为1.0、10.0、100.0μg/ml(BHP组)。以等蛋白终浓度正常小鼠脑匀浆提取液(Brain tissue extract of normal mice,BN)作为对照组(BN组)。同时设置只加PBS的溶剂对照组(PBS组)。缺氧(2%o_2)培养24、48、72h后,采用回唑盐(MTT)比色法检测各组细胞活力(OD_(570nm)值)和乳酸脱氢酶(LDH)透出率、缺氧72h晚期凋亡率。结果:缺氧24h时,蛋白终浓度为10.0、100.0μg/ml的BHP组OD_(570nm)值显著高于同浓度BN组和缺氧PBS组,其LDH透出率显著低于同浓度BN组和缺氧PBS组。随缺氧时间延长,其保护作用逐渐减弱。至缺氧72h时,仅蛋白终浓度为100.0μg/ml的BHP组OD_(570nm)值显著高于同浓度BN组,其LDH透出率、晚期凋亡率均显著低于缺氧PBS组。结论:BHP对分化PC12细胞缺氧耐受性的增强作用有浓度依赖性和时间依赖性,蛋白终浓度为100.0μg/ml的BHP组保护作用稳定、持久。