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华支睾吸虫钙调节蛋白的生物学特性及与肝纤维化的关系
被引量:
6
1
作者
郑明慧
胡坤华
+1 位作者
刘炜
余新炳
《南方医科大学学报》
CAS
CSCD
北大核心
2015年第5期659-664,共6页
目的:对华支睾吸虫成虫(Clonorchis sinensis, Cs)钙调节蛋白(CaM)进行生物学及功能分析,以确定其在肝纤维化中的作用。方法从Cs cDNA质粒文库中寻找CsCaM全长序列,以BLASTx搜索其同源序列并进行比对分析。以生物信息学进行同源...
目的:对华支睾吸虫成虫(Clonorchis sinensis, Cs)钙调节蛋白(CaM)进行生物学及功能分析,以确定其在肝纤维化中的作用。方法从Cs cDNA质粒文库中寻找CsCaM全长序列,以BLASTx搜索其同源序列并进行比对分析。以生物信息学进行同源比对、理化性质分析及功能域预测。以分子生物学方法进行原核克隆,大肠杆菌表达,亲和层析纯化,并将纯化蛋白免疫大鼠,产生多克隆抗体。ELISA检测CsCaM抗体滴度及产生曲线。免疫印迹实验分析CsCaM重组蛋白纯化及其抗体识别效果。免疫组化分析其组织定位;腹腔注射法建立CsCaM致大鼠肝纤维化模型。结果重组、表达及纯化了CsCaM,其编码150位氨基酸,理论相对分子质量23400。结构域预测其具有EF手位模序。pET-30a-CsCaM重组质粒其目的蛋白表达于宿主菌BL21 E. coli上清,相对分子质量约23400。总IgG抗体滴度于2~4周达较高峰,效价大于1∶51200。免疫组织化学定位显示CsCaM在成虫睾丸表达丰富。CsCaM腹腔注射大鼠的肝脏均显示不同程度病变,HE染色可见炎症反应较严重,可见气球样变、门管区炎及碎片状坏死;网状纤维染色显示小胆管周围胶原增生,有轻到中度纤维化。结论 CsCaM促进大鼠肝脏炎症病变及纤维化的作用,提示其可能参与了华支睾吸虫病致肝纤维化的作用。
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关键词
华支睾吸虫
钙调节蛋白
肝纤维化
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职称材料
题名
华支睾吸虫钙调节蛋白的生物学特性及与肝纤维化的关系
被引量:
6
1
作者
郑明慧
胡坤华
刘炜
余新炳
机构
中山大学孙逸仙纪念
医院
检验科
中山大学中山医学院热带病防治
重点
实验室
病原生物学教研室
中山大学药理学教研室
第三附属医院广东省肝脏疾病研究重点实验室
出处
《南方医科大学学报》
CAS
CSCD
北大核心
2015年第5期659-664,共6页
基金
国家自然科学青年科学基金(81401689)
广东省医学科研基金(B2014137)
中央高校基本科研业务费专项资金资助(14ykpy23)~~
文摘
目的:对华支睾吸虫成虫(Clonorchis sinensis, Cs)钙调节蛋白(CaM)进行生物学及功能分析,以确定其在肝纤维化中的作用。方法从Cs cDNA质粒文库中寻找CsCaM全长序列,以BLASTx搜索其同源序列并进行比对分析。以生物信息学进行同源比对、理化性质分析及功能域预测。以分子生物学方法进行原核克隆,大肠杆菌表达,亲和层析纯化,并将纯化蛋白免疫大鼠,产生多克隆抗体。ELISA检测CsCaM抗体滴度及产生曲线。免疫印迹实验分析CsCaM重组蛋白纯化及其抗体识别效果。免疫组化分析其组织定位;腹腔注射法建立CsCaM致大鼠肝纤维化模型。结果重组、表达及纯化了CsCaM,其编码150位氨基酸,理论相对分子质量23400。结构域预测其具有EF手位模序。pET-30a-CsCaM重组质粒其目的蛋白表达于宿主菌BL21 E. coli上清,相对分子质量约23400。总IgG抗体滴度于2~4周达较高峰,效价大于1∶51200。免疫组织化学定位显示CsCaM在成虫睾丸表达丰富。CsCaM腹腔注射大鼠的肝脏均显示不同程度病变,HE染色可见炎症反应较严重,可见气球样变、门管区炎及碎片状坏死;网状纤维染色显示小胆管周围胶原增生,有轻到中度纤维化。结论 CsCaM促进大鼠肝脏炎症病变及纤维化的作用,提示其可能参与了华支睾吸虫病致肝纤维化的作用。
关键词
华支睾吸虫
钙调节蛋白
肝纤维化
Keywords
Clonorchis sinensis
calmodulin
hepatic fibrosis
分类号
R575.2 [医药卫生—消化系统]
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作者
出处
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1
华支睾吸虫钙调节蛋白的生物学特性及与肝纤维化的关系
郑明慧
胡坤华
刘炜
余新炳
《南方医科大学学报》
CAS
CSCD
北大核心
2015
6
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