基因芯片技术分析斑蝥素对肝癌细胞细胞毒作用的分子机制

目的 :研究抗癌药斑蝥素对肝癌细胞细胞毒作用的分子机制。方法 :应用基因芯片技术检测 12 .5 μmol/ L 斑蝥素作用于肝癌 QGY770 3细胞 2 4 h后基因表达谱的变化。结果 :斑蝥素抑制细胞表达参与细胞周期进程基因 (如 p 2 7、ref - 1、DN Apolymerase delta、X RCC9等 )、能量代谢基因 (如 malate dehydrogenase、ADP/ ATP translocase等 )、致瘤活性基因 (如 c- myc、tre等 )以及肿瘤特异表达基因 (如 bladder cancer related protein等 )。相反 ,斑蝥素促进了多种细胞生长抑制基因 (如 BCRA2、BTG2、dual- specificity protein phosphatase等 )以及凋亡相关基因 (如 ATL - derived PMA- responsive peptide等 )的表达。 结论 :斑蝥素改变调控细胞周期进程、细胞增殖。

激光显微切割结合蛋白质组学技术分析DDAH-1在肝细胞癌表达的变化

目的:应用激光显微切割(laser capture microdissection,LCM)结合蛋白组学技术筛查肝细胞癌(hepatocellular carcinoma,HCC)组织及其癌旁组织的差异表达蛋白,分析二甲基精氨酸二甲胺水解酶1(dimethylarginine dimethylaminohydrolase1,DDAH-1)在肝细胞癌表达的变化。方法:选取2003-2006年间东方肝胆外科医院原发性肝细胞癌患者的手术切除标本40例。利用LCM技术分离捕获肝癌组织及癌旁组织的肝实质细胞,应用二维凝胶电泳技术(two dimensional gel electrophoresis,2-DE)筛选全部标本共同差异表达频率>80%、差异强度>3倍的蛋白质点;应用电喷雾串联质谱(electrospray ionisation tandem mass spectrometry,ESI-MS/MS)及基质辅助激光解析电离飞行时间质谱(matrix-assisted laser desorption/ionization time of flight mass spectrometry,MALDI-TOF-MS)对差异蛋白点进行质谱鉴定分析;采用Western blotting及免疫组化对差异蛋白DDAH-1进行检测。结果:2-DE筛查获得在肝癌及癌旁组织差异表达的蛋白质点共20个,通过质谱鉴定获得12个蛋白质,其中5个在肝癌组织表达上调,7个下调;这12个蛋白质与细胞代谢、增殖、分化及信号调控相关,其中的DDAH-1是参与调控一氧化氮相关通路的重要酶。Western blotting检测显示,20例标本中16例DDAH-1表达明显升高;免疫组化检测证实,10例标本DDAH-1全部呈强阳性表达。结论:肝细胞癌组织细胞中筛查到12个差异表达蛋白质,其中的DDAH-1在肝癌组织中表达上调,其有可能在肝癌发生、发展过程中起重要作用。

MicroRNAs与肝癌

MicroRNAs(miRNAs)是广泛存在的非编码小RNA,通过干预mRNA翻译的方式负向调控基因的表达,具有肿瘤抑制基因和癌基因的双重作用。其在肿瘤发生中所发挥的作用补充、丰富了肿瘤的发生机制。肝癌严重威胁人类健康.但其发病机制尚未完全清楚。miRNAs对肝癌的发生、分化及其治疗策略均有影响,本文就近年来miRNA与肝癌诊治的相关研究作一综述。

内镜下十二指肠乳头切开术后迟发性出血的护理

内镜下十二指肠乳头切开术（endoscopic sphincterotormy,EST）是治疗胆、胰疾病的一种方法,术后出血是较严重的并发症,占2%～3%。出血又可分为即刻性出血和迟发性出血,后者临床少见,Wilcox等认为术后2～7d的出血为迟发性出血。现将EST术后迟发性出血的护理体会报告如下。

HBx基因转染胆管癌QBC939细胞对其凋亡的影响及作用机制的研究

目的:探讨乙型肝炎病毒x基因(hepatitis B virusx,HBx)转染胆管癌QBC939细胞引起凋亡及其发生的可能机制。方法:将构建有HBx基因的真核表达载体pcDNA3-x采用脂质体转染法瞬时转染QBC939细胞,RT-PCR及Western印迹法鉴定HBx在QBC939细胞中的表达;DAPI染色后荧光显微镜镜下观察细胞核的改变,结合FCM法检测细胞的凋亡;以未转染和转染空质粒pcDNA3的QBC939细胞为对照,Western印迹法检测Bax、Bak、Bid、Bcl-XL、CytC、p65的表达;JC-1染色法检测细胞线粒体膜电位(ΔΨm)的变化;RT-PCR法检测Fas和c-myc在mRNA水平的表达;双荧光素酶报告系统分析细胞核因子-κB(nuclear factor kappa B,NF-κB)的转录活性。结果:RT-PCR及Western印迹法检测均证实转染后的QBC939细胞中有HBx的表达;DAPI显示转染细胞核呈现固缩且边缘化等细胞凋亡特征性的改变;FCM检测结果显示,转染HBx组与对照组相比,凋亡细胞数量明显增多;Western印迹法检测结果显示,Bcl-2家族中Bax表达升高,Bcl-XL下降,p65在核内的表达水平升高,细胞质中细胞色素C(cytochrome C)表达升高;RT-PCR结果显示,Fas和c-myc的mRNA水平均高于对照组;JC-1染色法结果显示ΔΨm下降;双荧光素酶报告系统分析提示NF-κB的转录活性升高。结论:成功将HBx基因转入QBC939细胞中,HBx可能是通过调节Fas/FasL死亡受体途径,Bcl-2家族引起的线粒体路径及NF-κB的激活、c-myc等凋亡相关基因的表达而引起QBC939细胞的凋亡。

信号调节蛋白α1在自身免疫性肝炎中的表达及其意义

目的观察信号调节蛋白（SIRP）a1在自身免疫性肝炎（AIH）中的表达情况，并探讨其与肝炎活动程度之间的关系。方法用免疫组织化学检测的方法对33例AIH患者肝脏穿刺获得的标本和10例正常肝组织标本中SIRPa1的表达情况进行检测，用秩和检验作统计学分析。结果SIRPd1在AIH标本中呈弱阳性或阳性表达，阳性着色定位于肝脏血窦内枯否细胞的细胞质，呈局灶性分布。SIRPa1在正常肝组织中无表达；在轻度A1H中呈阴性或弱阳性表达，阳性率为36．4％（4／11）；在中度AIH中呈阳性或强阳性表达，阳性率为84．2％（16／19）。轻、中、重度AIH总体比较，X^216．129，P〈0．01，差异有统计学意义。轻、中度AIH之间比较，W=82．5，P〈0．01，差异有统计学意义。而轻、重度AIH之间及中、重度AIH之间比较，差异均无统计学意义（P值均〉0．05）。结论SIRPa1作为一种负向调控因子在AIH的枯否细胞中表达，并且与AIH的严重程度有一定相关陛。