生物信号转导异常在肝癌发生发展中的作用

0 引言 原发性肝细胞肝癌(HCC)的发生发展涉及到癌基因过度激活,抑癌基因的突变、缺失,以及细胞因子、粘附分子和细胞外基质分解酶等多因素、多环节和多基因协调或单独作用不同阶段的复杂过程,恶性程度高,发展迅速,早期诊断困难,临床治疗效果差,生存期短,复发和死亡率高,浸润、转移和复发是其治疗困难,疗效差,死亡率高的主要原因之一,揭示引起HCC变的分子机制及其癌变后浸润转移的作用机制是HCC防治的关键所在[-5].近年来关于信号转导与肿瘤发生发展的关系已成为生命科学研究领域的热点,细胞信号转导在应答环境因素和调节基因表达、生理反应的同时,不仅维持细胞正常代谢,而且最终决定细胞增殖、生长、分化、衰老和死亡等生命现象.

激光显微切割结合蛋白质组学技术分析DDAH-1在肝细胞癌表达的变化

目的:应用激光显微切割(laser capture microdissection,LCM)结合蛋白组学技术筛查肝细胞癌(hepatocellular carcinoma,HCC)组织及其癌旁组织的差异表达蛋白,分析二甲基精氨酸二甲胺水解酶1(dimethylarginine dimethylaminohydrolase1,DDAH-1)在肝细胞癌表达的变化。方法:选取2003-2006年间东方肝胆外科医院原发性肝细胞癌患者的手术切除标本40例。利用LCM技术分离捕获肝癌组织及癌旁组织的肝实质细胞,应用二维凝胶电泳技术(two dimensional gel electrophoresis,2-DE)筛选全部标本共同差异表达频率>80%、差异强度>3倍的蛋白质点;应用电喷雾串联质谱(electrospray ionisation tandem mass spectrometry,ESI-MS/MS)及基质辅助激光解析电离飞行时间质谱(matrix-assisted laser desorption/ionization time of flight mass spectrometry,MALDI-TOF-MS)对差异蛋白点进行质谱鉴定分析;采用Western blotting及免疫组化对差异蛋白DDAH-1进行检测。结果:2-DE筛查获得在肝癌及癌旁组织差异表达的蛋白质点共20个,通过质谱鉴定获得12个蛋白质,其中5个在肝癌组织表达上调,7个下调;这12个蛋白质与细胞代谢、增殖、分化及信号调控相关,其中的DDAH-1是参与调控一氧化氮相关通路的重要酶。Western blotting检测显示,20例标本中16例DDAH-1表达明显升高;免疫组化检测证实,10例标本DDAH-1全部呈强阳性表达。结论:肝细胞癌组织细胞中筛查到12个差异表达蛋白质,其中的DDAH-1在肝癌组织中表达上调,其有可能在肝癌发生、发展过程中起重要作用。

急性肝功能衰竭大鼠eNOS及iNOS的表达

目的观察急性肝功能衰竭时机体重要脏器 eNOS 及 iNOS 表达的变化,揭示其诱导产生的 NO 在急性肝衰多脏器功能障碍中的作用.方法选取雄性 Wistar 大鼠60只,体重250g～350g,随机分为5组,SO 组、ALF(6h,12h)组、L-Arg 组、L-NAME 组、L-Arg+L-NAME 组,每组10只,L-Arg 用量300mg·kg^(-1),L-NAME用量30mg·kg^(-1),用生理盐水稀释后于手术前、后30min 经尾静脉注入,ALF 组分别于术后6h,12h 处死动物,其余各组于术后6h 处死动物,取肝、肺、肾组织置于40g·L^(-1)多聚甲醛固定液中,固定6h,石蜡包埋,4μm 切片,用免疫组化法检测肝、肺、肾组织 eNOS,iNOS 表达,并用 CMM-3北航-凌空病理图象分析系统分析,结果用方差分析统计处理.结果 ALF 6 h 肝、肺、肾组织 iNOS 表达显著增加,肝脏在12hiNOS 表达降低;而 eNOS 在肝、肾表达6h 明显降低(t=0.3146,P<0.05);应用 L-Arg 或 L-NAME 时,肝、肺、肾组织eNOS,iNOS 表达均明显降低(t=0.2971,P<0.05);同时应用 L-Arg 和 L-NAME,肝、肺组织 iNOS 表达均明显降低(t=0.4238.P<0.05).结论急性肝功能衰竭早期肝、肺、肾重要脏器 iNOS 表达显著增加,其诱导产生的大量 NO 可能参与了器官结构和功能的损害;应用 L-Arg 有利于重要脏器功能的保护,抑制 NOS,全面减少机体 NO 产生,对机体产生不利影响.