PCP-2胞外区/Fc融合蛋白的真核表达、纯化及其生物学活性鉴定(英文)

目的:构建PCP 2胞外区(PCP 2EC)与人免疫球蛋白IgG Fc融合蛋白表达载体,在哺乳动物细胞中表达并纯化PCP 2EC/Fc蛋白,研究其在神经细胞黏附中发挥的作用。方法:以PBLIISK PCP 2为模板扩增PCP 2EC片段,定向插入真核表达载体pIGplus;重组质粒分别转染COS 7细胞和293细胞,可溶性表达PCP 2EC/Fc融合蛋白,并通过金葡菌蛋白A特异性纯化;以此融合蛋白作为基质,观察原代培养神经元的黏附情况。结果: 成功构建PCP 2EC/Fc融合蛋白表达载体,表达载体的构建与预期设计相符;进一步在哺乳动物细胞中表达并纯化PCP 2EC/Fc蛋白;PCP 2EC/Fc蛋白可以促进原代培养神经元的黏附作用。结论:本研究成功地构建了PCP 2EC/Fc融合蛋白真核表达载体,获得有活性的PCP 2 胞外区可溶性分子,初步研究发现其在神经细胞黏附中发挥促进作用,为后续神经及其他领域中的功能研究奠定基础。