人穿孔素氨基端肽段的原核表达与纯化

目的 :用基因工程方法表达人穿孔素 (PFP)氨基端肽段 ,并加以纯化。 方法 :构建表达人 PFP蛋白 N端118个氨基酸肽段 (h PFP- N)的重组质粒 ,转化 E. coli BL 2 1菌株 ,经异丙基 -β- D-硫代半乳糖苷 (IPTG)诱导表达。在十二烷基肌氨酸钠存在下以超声处理 ,使得到的融合蛋白包涵体溶解。通过谷胱甘肽琼脂糖柱亲和层析获得纯化的 GST/h PFP- N融合蛋白 ,经凝血酶酶切去除 GST部分。 结果与结论 :p GEX- KG质粒能够高效表达 GST/h PFP- N融合蛋白 ,经谷胱甘肽琼脂糖亲和层析和凝血酶酶切后得到纯化的 h PFP- N蛋白。