髋关节复合重建术治疗髋臼周围肿瘤的临床观察

目的：分析髋臼周围肿瘤切除联合髋关节复合重建术的疗效，为髋臼周围肿瘤的治疗提供临床依据。方法2001年5月至2010年5月收治24例髋臼周围肿瘤患者，完全切除肿瘤后采用人工全髋关节加重建钢板、螺钉、钢丝和骨水泥复合重建髋关节，术后对患者进行随访。按照骨与软组织肿瘤协会（ MSTS）功能评估标准进行功能评估。结果24例患者中有1例术中突发双侧肺动脉栓塞死亡，其余均顺利完成手术。23例患者术后4～6个月均能基本正常行走，其中11例髋关节功能正常，10例髋关节屈曲功能获部分恢复。5例伤口愈合延迟，均经换药后愈合；2例术后出现腓总神经损伤，1例术后半年恢复；1例在随访时仍未恢复，采用支具保护。随访12～84个月，中位随访40.0个月，随访率为100.0％；死亡2例，复发4例（2例已死亡），21例生存（13例无瘤生存，8例带瘤生存）。 MSTS评分为（23.8±9.2）分，优良率达87.0％（20／23）。结论髋关节复合重建术治疗的患者短期随访可获较好的髋关节功能，同时髋关节复合重建术操作较为简单且费用低，适用范围较广。

不同培养条件下脂肪干细胞与软骨细胞共培养的研究

探讨病理状态下软骨细胞能否诱导脂肪干细胞(ADSC)向软骨细胞分化以及可能的最佳条件,以便为临床修复关节软骨损伤提供可能的新途径。[方法]分离共培养新西兰大白兔骨关节炎模型的ADSC和软骨细胞,根据不同血清浓度(10%FBS和2%FBS)和不同培养空间(纤维蛋白凝胶支架和无支架单层培养)分组,共培养14d后,胰酶消化终止。倒置显微镜观察和透射电镜观察共培养后ADSC的形态变化。甲苯胺蓝染色法和免疫细胞化学检测共培养后ADSC的蛋白多糖和Ⅱ型胶原的表达水平。RT-PCR检测蛋白多糖和Ⅱ型胶原的基因转录水平。[结果]共培养7d后部分ADSC变圆,14d时ADSC形态高度分化与成熟软骨细胞相似,其蛋白多糖和Ⅱ型胶原的基因转录和蛋白表达均增高,尤以10%FBS支架共培养组最为明显。[结论]与病理状态下软骨细胞共培养后,ADSC可以被诱导成软骨样细胞。高浓度血清三维培养可以增强这种诱导作用。

纤维蛋白凝胶和脱钙骨基质支架材料复合软骨细胞修复兔膝关节软骨缺损的实验研究

目的:探讨纤维蛋白凝胶和脱钙骨基质支架材料复合软骨细胞作为软骨组织工程支架的可行性及有效性,并为后续研究可注射性材料做基础。方法:体外分离培养软骨细胞后接种到纤维蛋白凝胶和脱钙骨基质支架材料体外培养4周,然后植入兔膝关节软骨缺损区继续培养4、8、12周后取材,分别行大体、组织学、Ⅱ型胶原免疫组织化学观察。并进行Wakitani评分,观察其体内修复关节缺损效果。结果:大体观察4周后,实验组软骨缺损区可有乳白色组织修复,12周可修复完全,并无明显凹凸感。光镜下8周可见大量软骨细胞修复,并在TB染色下见Ⅱ型胶原比4周时明显增多。12周时软骨陷窝结构形成,细胞形态排列及Ⅱ型胶原与正常软骨组织相近。结论:纤维蛋白凝胶和脱钙骨基质支架材料复合软骨细胞可以作为软骨组织工程支架材料,能够用于再生修复软骨的缺损。并为构建可注射性修复材料提供途径。

活体观察贝伐单抗对人骨肉瘤裸鼠移植瘤模型的作用

目的探讨贝伐单抗(Avastin)对人骨肉瘤143-B裸鼠移植瘤模型生长和血管生成的影响。方法将成功建立的红色荧光蛋白标记的人骨肉瘤143-B裸鼠原位种植模型随机分为3组:对照组(生理盐水)、低剂量贝伐单抗组(Avastin-L,2.0mg/kg)和高剂量贝伐单抗组(Avastin-H,5.0mg/kg),每组7只。贝伐单抗每次腹腔注射0.2ml,1周2次,持续3周;对照组给予等体积生理盐水。每隔3天记录各组体质量,每隔7天用荧光影像系统测量原位肿瘤大小并计算抑瘤率;采用免疫组化En Vision法检测各组肿瘤组织中的CD34表达并计算微血管密度(MVD);酶联免疫吸附法检测各组血浆和肿瘤组织的血管内皮生长因子(VEGF)的水平。结果 3组实验裸鼠体质量及肺部转移率的差异无统计学意义(P>0.05);与对照组相比,Avastin-L组和Avastin-H组的肿瘤体积减小,MVD、血浆及肿瘤组织的VEGF水平降低,差异均有统计学意义(P<0.05);Avastin-H组对上述指标的改善程度优于Avastin-L组(P<0.05)。结论 Avastin对人骨肉瘤143-B肿瘤生长有抑制作用,同时可降低血管生成及VEGF水平,但对肺部转移无明显抑制作用。

骨溶解实验陶瓷磨损微粒的制备

目的探索制备第3代陶瓷股骨头假体陶瓷微粒方法,为人工关节假体无菌性松动和陶瓷微粒对组织相容性研究提供材料。方法取1枚第3代陶瓷股骨头假体部件,制成不规则碎块状,通过球磨法和无水乙醇重力液力分级法制成人工关节陶瓷微粒,分析微粒元素和粒度,用扫描电镜观察陶瓷微粒表征。结果元素分析在球磨过程无杂质污染。处理后90%陶瓷微粒直径<3.19μm,符合医学实验研究的要求。结论本研究使用的方法可以产生大量陶瓷微粒,可以为人工关节陶瓷材料体内外研究提供微粒来源。

发射单光子计算机断层扫描在关节置换感染翻修中的应用价值

目的 ：评价发射单光子计算机断层扫描（emission computed tomography,ECT）全身骨扫描在髋膝关节置换术后感染二次关节翻修术前感染控制评估方面的应用价值。方法：回顾性分析62例初次关节置换后假体周围感染的患者,其中男34例,女28例;年龄65~74岁,平均68.8岁。手术前行ECT骨扫描、血沉、C-反应蛋白检查,根据结果做出判断,ECT与C-反应蛋白、血沉两者之一阳性,可判定为感染,任意两项阴性即认为感染已排除。同时将结果与＂金标准＂术中行组织冰冻切片检查进行对比。结果 ：ECT骨扫描灵敏性、特异性及准确性分别为75.0%,88.9%及87.1%;ESR分别为50.0%,72.2%及69.4%;CRP分别为62.5%,81.5%及79.0%;3种方法联合检测分别为87.5%,96.3%及95.2%。结论：ECT骨扫描在排除感染方面较血沉、C-反应蛋白更准确、灵敏,三者联合应用时可提高关节翻修术前感染的排除诊断,值得推广和应用。

靶向软骨的非病毒纳米基因载体体内外转染特性的研究

目的采用一种靶向软骨的非病毒纳米基因传递系统，携带增强型绿色荧光蛋白（EGFP）在体内外对软骨细胞进行转染，探讨一种临床可用的促进软骨修复的方法。方法将高相对分子质量壳聚糖（HMWC）适度降解，成为低相对分子质量壳聚糖（LMWC），并与EGFP的质粒复合形成稳定的非病毒纳米基因传递系统。经过体外的转染实验后，这些纳米复合物被进一步注射到伴有全层软骨缺损的新西兰大白兔动物模型膝关节中，探讨其在体内传递治疗基因促进软骨修复的可能性。结果结果显示LMWC／DNA纳米复合物可以有效地转染体外单层培养的软骨细胞和软骨组织片。在体内应用时，LMWC／EGFP基因纳米复合物可以安全有效地转染软骨细胞，并表现出一定的靶向性。结论本研究显示了由LMWC／DNA纳米复合物介导的体内转染方法促进软骨修复的可行性，其有望成为一种简单、安全、有效、可控并且可早期使用的促进软骨修复的方法。

SCID小鼠单次唑来磷酸头皮下注射抑制人假体周围骨溶解

[目的]评价唑来磷酸在新型动物模型中对人关节假体周围界膜组织诱导的骨溶解的抑制效应。[方法]将髋关节翻修病人体内获得的界膜组织移植到SCIDbeige小鼠颅骨上。术后2d将唑来磷酸直接注射至小鼠头皮下,并在术后2、4周处死动物取出带移植组织的颅骨进一步检测。[结果]移植组织在动物体内存活至少4周,HE染色可见界膜组织引起大量的骨胶原纤维碎裂溶解。界膜组织中TNF-α、IL-6、RANKL和CPK的基因表达和蛋白水平均显著高于对照。单次局部注射唑来磷酸显著降低RANKL和CPK的表达但未影响TNF-α和IL-6的水平。[结论]单次局部注射唑来磷酸可有效抑制人界膜组织诱导的骨溶解,且效应持续。该新型动物模型模拟临床程度高,可作为评价假体周围骨溶解药物抑制效应的平台。