根癌土壤杆菌接合转移和生物型特性的遗传学研究

用转座子Tn5-Mob和辅助诱动转移质粒R 68.45将根癌土壤杆菌(Agrobactcrium tumefaciens)生物型(Biotype)Ⅱ和Ⅲ接合转移到具三重缺陷的生物型Ⅰ的菌株中,获得了七组转移接合子。通过对其中六组转移接合子生物型分类的主要生理生化特性(3-酮基乳糖反应、石蕊牛奶反应、赤藓糖醇产酸、乙醇产酸、松三糖产酸、粘酸产碱及在New和Keer的选择性生长培养基上能否生长等)测试,发现这些性状通过接合转移而被转移到受体菌中。

囊虫病诊断用抗原编码cDNA的分子克隆

目的 :克隆与分析囊虫病诊断用抗原及其编码基因。方法 :采用基因重组技术 ,构建来源于猪囊尾蚴 m RNA的 c DNA文库。以囊虫病患者、囊虫病病猪的血清为探针从 c DNA文库中筛选出目的克隆。结果 :获得人、猪共同抗原 2个 (分子量分别为 2 8k Da和 18k Da) ,人特异性抗原和猪特异性抗原各 1个 (分子量为 34 k Da、 14k Da)。这些抗原的编码克隆分别命名为λc C1、λc C2、λc H1及 λc P1。c C1c DNA含有编码 2 8k Da的人、猪共同抗原的完整基因 ,全长 10 70 bp,起始密码 ( ATG)从自 2 2 bp,终止密码 ( TGA)结于 74 7bp,长为 74 7bp的开放阅读框架编码由 2 4 9个氨基酸组成的多肽 ,其理论推导分子量为 2 7.36k Da。结论 :以 c C1等融合蛋白为诊断用抗原 ,具有高度的特异性和较理想的敏感性。

猪囊尾蚴特异性抗原编码cDNA的阶段特异性表达

目的：分析猪囊尾蚴特异性抗原编码ｃＤＮＡ的阶段特异性表达机制。方法：用猪囊尾蚴特异性抗原编码ｃＤＮＡ（λｃＣ２８）及抗λｃＣ２８单表位抗体作探针，采用Ｎｏｒｔｈｅｒｎｂｌｏｔ、Ｓｏｕｔｈｅｒｎｂｌｏｔ和Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ分子杂交技术分析了λｃＣ２８编码ｃＤＮＡ在猪带绦虫各发育阶段的特异性表达。结果：猪囊尾蚴和成虫不同节片抗原蛋白具有阶段特异性，λｃＣ２８ｃＤＮＡ编码的２８ｋＤａ抗原蛋白只在囊尾蚴阶段表达，成虫幼节、成节、孕节都不表达。结论：猪囊尾蚴阶段特异性抗原的编码基因存在于囊尾蚴阶段和成虫的幼节中，但仅有囊尾蚴阶段的ｍＲＮＡ表达２８ｋＤａ抗原蛋白。

胰岛素对大鼠血管平滑肌细胞表型转化的影响

目的:探讨胰岛素对体外培养的血管平滑肌细胞(vascular smooth muscle cell,VSMC)表型转化的影响。方法:用酶消化法分离大鼠VSMC,采用免疫组织化学法检测胰岛素作用后VSMC肌动蛋白(α-SM actin),RT-PCR检测胰岛素作用后VSMC中bFGF、TGF-β、PDGF、matrix Gla和OPN各目的基因mRNA相对表达水平。结果:胰岛素组VSMC的3H-TdR掺入值比对照组升高47％(P<0.01),VSMC α-SM actin免疫组化结果显示对照组的α-SM actin比胰岛素组染色深。而matrixGla和OPN在培养的VSMC中mRNA的表达量,胰岛素组明显高于对照组(P<0.05),同时bFGF、TGF-β、PDGF的表达胰岛素组也明显高于对照组(P<0.05)。并可明显见到细胞骨架F-actin、G-actin重新分布。结论:在合成表型的matrix Gla和OPN表达量明显高于收缩表型,而合成表型的α-SM actin表达量明显低于收缩表型。提示胰岛素对VSMC的表型转化起了一定作用。胰岛素在促进了VSMC增殖的同时,伴有VSMC由收缩型转变为合成型及细胞骨架F-actin、G-actin重新分布。

以融合蛋白为抗原的简化Westernblot法诊断囊虫病

目的：为囊虫的诊断提供简便有效的方法。方法：猪囊尾蚴ｃＤＮＡ表达文库中筛选出的β－半乳糖苷糖－猪囊虫ｃＤＮＡ编码的融合蛋白为抗原，进行简化的Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ分析。结果：四个克隆的融合蛋白（ｃＣ１、ｃＣ２、ｃＰ１和ｃＨ１）联合使用，检测１２４例人囊虫病血清中的抗囊尾蚴ＩｇＧ抗体，阳性率达９３．７％，三个克隆的融合蛋白（ｃＣ１、ｃＣ２、和ｃＰ１）联合使用，检测３８例猪囊虫病血清中的相应抗体，阳性率达１００％，均高于各克隆融合蛋白单独使用的阳性率，且与其他寄生虫病血清无交叉反应。结论：以融合蛋白为抗原所进行的Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ分析具有高度灵敏性和特异性，且简便易操作。

Western blot法诊断囊虫病的应用研究

目的：探讨四种猪囊尾蚴（Ｃｙｓｔｉｃｅｒｃｕｓｃｅｌｕｌｏｓａｅ）特异性抗原ｃＣ１、ｃＣ２、ｃＰ１、ｃＨ１（分子量分别为２８ｋＤａ、１８ｋＤａ、１４ｋＤａ、３４ｋＤａ）混合应用诊断人囊虫病的价值。方法：以猪囊尾蚴ｃＤＮＡ表达文库中筛选出的β－半乳糖苷酶－猪囊虫特异性抗原ｃＤＮＡ编码的融合蛋白（ｆｕｓｉｏｎｐｒｏｔｅｉｎｓ，ＦＰ）为抗原，作简化的Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ（ｉｍｐｒｏｖｅｄＷｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ，ＩＷＢ）分析，检测１０７例囊虫病、４０例华支睾吸虫病、２４例包虫病和３４例健康人血清对融合蛋白的反应。同时应用粗制抗原（ｃｒｕｄｅａｎｔｉ－ｇｅｎ，ＣＡ）进行ＥＬＩＳＡ、ＩＨＡ对比检测。结果：在简化Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ检测中，ＦＰ被１０７例囊虫病患者血清中９４例（８７．９％）血清所识别，与华支睾吸虫病、包虫病患者及健康人血清无交叉反应，特异性为１００％。以粗制抗原作ＥＬＩＳＡ、ＩＨＡ检测囊虫病人血清中的ＩｇＧ抗体阳性率分别为８４．１％和７４．８％，与华支睾吸虫病患者血清存在交叉反应，假阳性率分别为２．５％、１２．５％；与包虫病患者血清存在交叉反应，假阳性率分别为８．３％、１６．７％；与健康人血清也存在交?

融合蛋白抗原检测不同病程及不同类型囊虫病

猪囊尾蚴四个阳性克隆：２８ＫＤａ、１８ＫＤａ、１４ＫＤａ、３４ＫＤａ以等比联合使用，经异丙基硫代－β－Ｄ半乳糖苷（ＩＰＴＧ）诱导出多克隆β－半乳糖苷酶—猪囊尾蚴重组基因融合蛋白（ＦＰ）抗原，以简化—Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ（ＳＷＢ）法检测不同病程及不同类型囊虫病，并与粗制抗原（ＣＡ）进行的ＥＬＩＳＡ、ＩＨＡ法相对比。结果显示：用多克隆ＦＰ—ＳＷＢ可提高检出率，且识别抗体更灵敏，阳性率＞８０％，囊虫病人血清循环抗体至少３年中仍有相当高的检出率（＞６０％）。

基因重组肿瘤坏死因子对LAK细胞体内外抗肿瘤作用的增强效果

TNF单独不能诱导LAK活性,也不能进一步提高最适剂量IL-2(1000U/ml)诱导的LAK活性,但能显著增强亚适剂量IL-2(10～100U/ml)诱导的LAK活性。抗TNF单抗和抗IL-2受体β链(p75)单抗显著抑制TNF/IL-2对LAK活性的协同诱导作用。实验证明,TNF能显著增强IL-2/LAK细胞的体内抗肿瘤效果,对于腹水型肝癌小鼠,以联合腹腔内注射TNF/IL-2/LAK细胞的体内抗肿瘤效果最佳。

用微载体技术培养家蚕BmN细胞的实验研究

观察了家蚕ＢｍＮ（从Ｓｉｌｋｗｏｒｍ Ｂｏｍｂｙｘ ｍｏｒｉ获得的细胞系）细胞在微载体Ｃｙｔｏｄｅｘ３上的贴壁分布，提出其分布符合Ｐｏｉｓｓｏｎ规律，并由此估计了不同细胞接种浓度时裸球的百分比，与实际观测结果基本符合；研究了不同接种浓度与微载体浓度时细胞的生长情况，家蚕ＢｍＮ细胞在Ｃｙｔｏｄｅｘ ３上生长的临界接种数为一珠粒６．４个细胞。当微载体浓度为３ｇ／Ｌ时，最低的接种浓度为１．０×１０＾５／

寄生虫的核酸疫苗研究

所谓核酸疫苗，就是把外源基因克隆到真核质粒表达载体上，然后将重组的质粒ＤＮＡ直接注射到动物体内，使外源基因在活体内表达，产生的抗原激活机体的免疫系统，引发免疫反应。核酸疫苗具有突出的优点：（１）能诱导全方位的免疫应答，优于亚单位疫苗和灭活疫苗，既可产...

人胎肝cDNA文库的构建

从水囊引产的5^+月孕龄胎儿肝脏中提取RNA,分离含poly(A)尾的信使RNA[poly(A)^+mRNA],合成双链cDNA,定向插入λgtll表达载体,转染Y1090受体菌,构建了人胎肝cDNA文库。该文库有1.35×10~6个噬菌体,重组率为87.5％,可用寡核苷酸探针和单克隆抗体两种方法筛选目的基因。

优化mRNA翻译起始区提高人粒－巨噬细胞集落刺激因子在E．coli中的表达

人粒－巨噬细胞集落刺激因子（ｈＧＭ－ＣＳＦ）是一种重要的造血生长因子．利用基因重组技术构建两个ｈＧＭ－ＣＳＦ的Ｅ．ｃｏｌｉ表达菌株，一个为在不改变氨基酸顺序的前提下，对ｍＲＮＡ翻译起始区核苷酸顺序进行优化突变（ｈＧＭ－ＣＳＦ（Ｍ）），另一个为未突变的对照（ｈＧＭ－ＣＳＦ（Ｎ））．经酶切电泳、ＤＮＡ测序、ＳＤＳ－ＰＡＧＥ和Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ等分析鉴定，证明两者均能表达特异性的１４．６ｋＤｈＧＭ－ＣＳＦ，但ｈＧＭ－ＣＳＦ（Ｍ）的表达水平较ｈＧＭ－ＣＳＦ（Ｎ）提高了１．２６倍，占菌体总蛋白的１６．９％．ｍＲＮＡ翻译起始区二级结构预测分析表明，优化突变后生成自由能ΔＧ从原来的－１０．２提高至－９．４Ｋｃａｌ，ＡＵＧ从部分配对状态变为非配对状态．

结核杆菌DNA聚合酶链反应中Mg^（2＋）浓度的优化

结核杆菌ＤＮＡ聚合酶链反应中Ｍｇ^（２＋）浓度的优化王俊霞，孙树汉（河北医科大学分子生物学研究室，石家庄０５００１７）关键词结核杆菌，聚合酶链反应，镁离子在结核杆菌的多聚酶链反应（ＰＣＲ）中，通常影响扩增效果的是反应缓冲液中Ｍｇ２＋浓度，Ｍｇ２＋浓度?..

囊尾蚴RNA的提取及体外无细胞翻译

猪带绦虫囊虫病(Taenia solium cys-ticercosis)是世界上重要的人畜共患病之一,在我国有着广泛的流域区域。它不仅危害着人类的健康,同时也给养猪业造成巨大的经济损失。由于囊尾蚴病临床症状复杂多样,易和其他神级系统疾病混淆而误诊,虽然CT技术对其诊断很有帮助,但大都为提示性、非确定性的,且费用昂贵。免疫学诊断技术对病人脑脊液(CSF)、血清或唾液进行猪囊尾蚴的特异性抗体或抗原检测是一种行之有效的方法。

猪囊尾蚴重组体的培养及其诱导表达

将猪囊尾蚴λｇｔ１１重组体转染ＥｃｏｌｉＹ１０９０并经ＩＰＴＧ诱导表达融合蛋白（ＦＰ），观察重组体数量、培养时间及ＩＰＴＧ浓度对ＦＰ产量的影响，结果表明，重组噬菌体数量及培养时间对ＦＰ制备有较大影响，ＩＰＴＧ的浓度对ＦＰ制备有调节作用。单克隆ＦＰ经简化－Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ（ＳＷＢ）检测，λＣＣ２检出率最高，为７３．３％；４个克隆以等比联合应用（λＣＭ），其检出率为８６．７％，高于单克隆ＦＰ的检测结果，应用λＣＣ２及λＣＭ检测其特异性均为１００％。

磺化标记的DNA探针用于检测恶性疟感染的评价

采用非同位素磺化修饰法(sulfomodification),标记恶性疟原虫DNA重组质粒片段pPF14。用此探针,以斑点杂交试验检测恶性疟原虫感染,并和常规血片法进行比较。结果显示:对于体外培养的恶性疟原虫,该法可检出25 pg纯化的DNA,或0.001％的原虫率。探针和人白细胞、鼠伯氏疟原虫、约氏疟原虫DNA均无交叉反应。对179份云南省西双版纳自治州疟疾病人血样进行检测,探针法结果和血片法有较好的相关性,探针法检测恶性疟的符合率为92.5％(99/107),和间日疟的交叉反应率为1.39％(1/72),和48例正常人血无一交叉反应。

猪囊尾蚴可溶性蛋白抗原多态性分析

猪囊尾蚴可溶性蛋白抗原多态性分析彭郁葱１王俊霞１王朝霞１孙树汉２由于囊虫病给人类带来的极大危害与损失，人们一直在探讨切实可行的诊断方法。目前多种免疫学方法都已应用于囊虫病的诊断，但是结果缺乏一致性，本文拟从猪囊尾蚴虫体蛋白质的免疫原性及免疫反应性方面...

热休克后表达受抑基因的差别显示及克隆

热休克反应是生物体对高于其正常生长温度环境而作出的一系列分子应答反应。热休克基因及其表达的正调控机制现已得到广泛而深入的研究。