基于pSPORT1质粒的转基因小鼠家系的建立

目的：建立在基因组中整合有ｐＳＰＯＲＴ１质粒的转基因小鼠家系，为体内基因突变研究提供有效的动物模型。

基因打靶置换型载体的构建和应用研究

目的：构建针对小鼠凝血因子Ⅸ（ｍＦⅨ）基因的基因打靶置换型载体，并用于小鼠胚胎干细胞基因打靶研究。方法：在用噬斑原位杂交法克隆ｍＦⅨ基因组ＤＮＡ并完成结构分析的基础上，利用常规的分子克隆技术，设计并构建置换型载体，经过限制性内切酶酶切鉴定和ＰＣＲ鉴定其结构正确后，用电穿孔法对体外培养的小鼠胚胎干细胞Ｒ１株进行基因转移，经Ｇ４１８／ＧＡＮＣ（Ｇａｎｃｙｃｌｏｖｉｒ）分组药物选择，进行ｐＭＦⅣＤＥＬ载体的应用研究。结果：构建获得包括正负双向选择基因的表达元件、长短同源臂等在内的基因打靶置换型载体ｐＭＦⅨＤＥＬ，在胚胎干细胞中能有效地发生重组，正负双向选择系统的应用对同源重组事件富集效率提高了２４倍。结论：本研究构建获得了针对ｍＦⅨ基因的置换型载体，在胚胎干细胞基因打靶中得到有效的应用。

耐氨苄西林流感嗜血杆菌产β-内酰胺酶机制研究

目的：探讨耐氨苄西林的流感嗜血杆菌产生β－内酰胺酶的机制。方法：对临床分离的１１２株流感嗜血杆菌耐药菌用纸片法作β－内酰胺酶测定，用ＰＣＲ法检测产酶流感嗜血杆菌中的β－内酰胺酶基因的存在。结果：纸片法测得产酶菌株３２株，产酶率２８．６％ （３２／１１２）；３２株产酶菌中ＰＣＲ法测β－内酰胺酶基因阳性菌株２９株，阳性率为９０．６％ （２９／３２），其中质粒ＤＮＡ 模板组阳性为２５株，基因组ＤＮＡ模板组阳性为４例。结论：（１）流感嗜血杆菌耐氨苄西林主要由质粒介导产生β－内酰胺酶所造成。（２）ＰＣＲ法是研究流感嗜血杆菌是否携带β－内酰胺酶基因及该基因所在位置的简便而有效的方法。