人降钙素cDNA的化学合成与克隆

目的：克隆人降钙素ｃＤＮＡ。方法和结果：应用ＡＢＩ３９１ＤＮＡ合成仪，将人降钙素ｃＤＮＡ分成６个片段合成。退火、磷酸化、连接，最终将人降钙素ｃＤＮＡ克隆于载体ｐＧＥＭ７ｚ（＋），经ＤＮＡ双链测序，证明克隆到的人降钙素ｃＤＮＡ序列与设计的完全一致。结论：本研究为寡肽ｃＤＮＡ（或基因）的化学合成与克隆提供了简捷、可靠的方法；为人的降钙素ｃＤＮＡ的高效表达奠定了基础。

烫伤早期大鼠肾皮质细胞氧自由基、Ca^（2＋）细胞化学和Ca^（2＋）－Mg^（2＋）－ATP酶活性的变化

研究重度烫伤大鼠肾皮质细胞膜（质膜、内质网及线粒体膜）Ｃａ２＋－Ｍｇ２＋－ＡＴＰ酶活性、细胞内Ｃａ２＋定位和半定量及肾皮质内Ｈ２Ｏ２（氧自由基）定位，以探讨烫伤早期肾损伤的机制。方法：化学法和细胞化学法。结果：发现肾小管细胞内Ｃａ２＋浓度升高在烫伤后６０ｍｉｎ达到高峰，Ｃａ２＋－Ｍｇ２＋－ＡＴＰ酶活性在６０或１２０ｍｉｎ为最低，并与亚细胞结构的损伤程度显著相关。烫伤后３０ｍｉｎ肾皮质间质毛细血管及肾小球毛细血管壁出现Ｈ２Ｏ２细胞化学阳性沉积物，６０ｍｉｎ时消失。以上变化在观察时间内（５ｈ）具有可恢复性。结论：严重烫伤时肾缺血，皮质毛细血管内皮细胞受氧自由基损伤，改变了血管通透性，引起组织水肿，继而Ｃａ２＋泵活性下降，Ｃａ２＋过载，进一步影响细胞结构和功能。

奥曲肽抑制肠梗阻时毒素的吸收

肠梗阻时不但有大量的体液丧失，而且还有毒素的吸收和细菌的易位［１，２］，有报道奥曲肽可用于肠梗阻的治疗［３］。本研究就奥曲肽能否在缓解肠梗阻的同时，减少毒素的吸收，降低血液内毒素水平作了实验性研究。１材料和方法１．１动物及分组４０只雄性ＳＤ大鼠，体质...

曲美他嗪对大鼠缺血再灌注心肌线粒体的保护作用

目的 探讨曲美他嗪对缺血再灌注损伤心肌线粒体的保护作用及其机制。方法 将5 0只SD雄性大鼠随机分为假手术组、生理盐水组和曲美他嗪组(5mg/kg组及10mg/kg组) 4组,假手术组只开胸,不结扎冠状动脉。余3组复制缺血再灌注损伤模型,缺血前分别静脉注射曲美他嗪(5或10mg/kg)及等量生理盐水,在缺血30min及再灌注4 0min时测定缺血再灌注损伤区心肌线粒体丙二醛、超氧化物歧化酶、谷胱甘肽、谷胱甘肽过氧化物酶及总钙浓度,并通过电镜观察心肌超微结构的改变。结果 与假手术组比较,生理盐水组及曲美他嗪组线粒体中的丙二醛及总钙显著增高,超氧化物歧化酶、谷胱甘肽及谷胱甘肽过氧化物酶显著降低。与生理盐水组比较,曲美他嗪组的丙二醛及总钙水平显著降低,超氧化物歧化酶、谷胱甘肽及谷胱甘肽过氧化物酶显著增高。电镜观察显示曲美他嗪组线粒体损伤较生理盐水组明显减轻。结论 以上提示曲美他嗪能减轻缺血再灌注心肌线粒体的脂质过氧化损伤,其机制可能是通过提高线粒体内谷胱甘肽含量及超氧化物歧化酶和谷胱甘肽过氧化物酶活性,以增强其抗氧化能力,并通过减轻线粒体内钙聚积在细胞水平提供心肌保护作用。

编码耐热邻苯二酚2,3-双加氧酶的pheB基因在大肠杆菌中的亚克隆与高表达

目的：构建ｐｈｅＢ基因高表达菌株，研究酶的耐热机制。方法与结果：通过ＰＣＲ扩增方法，对位于质粒ｐＦＤＡ１３上的ｐｈｅＢ基因进行扩增，克隆于ｐＵＣ１１８Ｎ和ｐＵＣ１１９Ｎ上，经双向测序，证明ＰＣＲ过程中并未发生突变，然后亚克隆于高表达载体ｐＪＬＡ５０３，转化Ｅ．ｃｏｌｉＴＧ１，经４２℃诱导，获得了高表达的基因产物，表达量占细菌总蛋白的３４．６％。并与ｘｙｌＥ基因编码的邻苯二酚２，３双加氧酶作了耐热性比较。结论：ｐｈｅＢ基因在大肠杆菌中获得了高表达，高表达后重组酶的耐热性未发生改变。

猫心肌缺血再灌注对Ca2+┐ATPase活力及肌浆网钙摄取能力的影响

目的：观察猫心肌缺血再灌注过程中心肌细胞膜Ｃａ２＋－ＡＴＰａｓｅ活力、肌浆网钙摄取能力、线粒体丙二醛及心肌ＡＴＰ含量变化。方法：利用猫体外循环模型，心脏低温停搏６０ｍｉｎ后，恢复正常血液灌注６０ｍｉｎ。测定心肌细胞膜Ｃａ２＋－ＡＴＰａｓｅ活力、肌浆网钙摄取能力、心肌ＡＴＰ及线粒体丙二醛含量。结果：心脏缺血６０ｍｉｎ时，随着心肌ＡＴＰ含量的下降，Ｃａ２＋－ＡＴ－Ｐａｓｅ活力及肌浆网钙摄取能力下降，而丙二醛含量仅有轻微增加；恢复灌注６０ｍｉｎ后，Ｃａ２＋－ＡＴＰａｓｅ活力及肌浆网钙摄取能力进一步下降，同时丙二醛含量明显增加。结论：缺血期间心肌细胞膜Ｃａ２＋－ＡＴＰａｓｅ活力及肌浆网钙摄取能力的下降主要与心肌能量储备降低有关，而复灌后Ｃａ２＋－ＡＴＰａｓｅ活力及肌浆网钙摄取能力进一步下降，可能与复灌过程中氧自由基大量产生。

持续灌注温血心脏停搏液对心肌保护作用的实验研究

用猫体外循环模型对比观察间断冷血、持续冷血及持续温血心脏停搏液灌注对心肌的保护作用。结果发现，心脏停搏３ｈ后心肌线粒体呼吸功能和氢化磷酸化能力，间断冷血组明显下降，持续冷血组呈轻度下降，持续温血组保持正常；而再灌注后间断冷血组和持续冷血组进一步下降，持续温血组仍保持正常。丙二醛含量间断冷血组明显增加，持续冷血组有增加趋势，再灌注后两组都进一步升高；而持续温血组始终维持在接近正常水平。表明持续灌注温血停搏液技术可使心脏在停搏期间有充足的血供，心肌不存在缺血、缺氧状态，消除了氧自由基产生的必要条件，有利于保护线粒体功能，同时避免了因缺血、缺氧所诱发的心肌再灌注损伤，是一种理想的心肌保护方法。

镉诱导金属硫蛋白的纯化及其抗体制备

目的：建立简便分离纯化镉诱导金属硫蛋白（ＣｄＭＴ）的方法，并制备抗ＣｄＭＴ抗血清。方法：采用加长ＳｅｐｈａｄｅｘＧ７５柱层析分离纯化由ＣｄＣｌ２诱导的大鼠肝组织ＣｄＭＴ，以此为抗原免疫家兔制得抗ＣｄＭＴ抗血清。结果：纯化的ＣｄＭＴ经ＳＤＳＰＡＧＥ测定相对分子质量及Ｃｄ含量测定与标准ＣｄＭＴ一致，氨基酸组分分析也与文献报道基本一致；获得的抗血清对大鼠ＣｄＭＴ具有特异性反应。结论：本法为一种简便高效的分离纯化ＣｄＭＴ的方法，抗ＣｄＭＴ抗血清的制备可为进一步建立敏感的ＥＬＩＳＡ和免疫组化方法进行组织内ＭＴ含量测定及定位，有利于深入研究Ｃｄ中毒机理和ＭＴ生物学功能。

血管内皮细胞生长因子在哺乳动物细胞的表达

目的：本实验试图构建具有生物学活性的ＶＥＧＦ真核表达载体，为ＶＥＧＦ基因治疗提供载体。方法：将已获得的ｈＶＥＧＦ１６５ ｃＤＮＡ克隆到ＧＳＴ融合表达载体，构建原核表达质粒，转染大肠杆菌ＤＨ５α，ＩＰＴＧ诱导表达，Ｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔ鉴定表达产物。在此基础上构建真核表达载体ｐｃＤＮＡ３ ／ｈＶＥＧＦ１６５，脂质体介导转染ＣＨＯ－Ｋ１细胞，Ｇ－４１８筛选，Ｎｏｒｔｈｅｒｎ ｂｌｏｔ，Ｗｅｓｔ－ｅｒｎ ｂｌｏｔ分别检测其在细胞内的转录和表达情况，３Ｈ－ＴｄＲ掺入法检测表达蛋白的活性。结果：实验组的Ｎｏｒｔｈｅｒｎ ｂｌｏｔ和Ｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔ出现特异性条带，而对照组在相应部位未出现条带。实验组的大鼠心肌血管内皮细胞３Ｈ－ＴｄＲ掺入率明显高于对照组（Ｐ＜ ０．００１）。结论：本实验所构建的ＶＥＧＦ真核表达质粒能够在真核细胞内获得表达，其表达产物具有血管内皮细胞增殖刺激活性。

心肺复苏后大鼠脑细胞线粒体呼吸功能的变化及左卡尼汀的干预作用

目的:研究心肺复苏后大鼠脑细胞线粒体呼吸功能的改变及左卡尼汀对其脑细胞线粒体呼吸功能的干预作用。方法:采用窒息合并0.5 mol/L冰氯化钾停跳液致大鼠心跳骤停5 min后开始心肺复苏的动物模型,SD大鼠88只,随机分为11组:对照组(假手术组),心肺复苏后3、12、24、48、72 h组,心肺复苏后左卡尼汀干预3、12、24、487、2 h组。每组均为8只大鼠。1 g/支的左卡尼汀溶于100 mL 0.9%NaCl注射液,按100 mg/kg的剂量给大鼠腹腔注射。取脑组织测定线粒体呼吸Ⅲ、Ⅳ态及呼吸控制率(RCR)、磷氧比(P/O)。结果:心肺复苏后大鼠脑细胞线粒体RCR和P/O明显下降;随着复苏成功后时间的延长,线粒体RCR和P/O维持在低水平;使用左卡尼汀干预后,RCR和P/O能接近正常。结论:心肺复苏后大鼠脑细胞线粒体呼吸功能明显下降,左卡尼汀对脑细胞呼吸功能有保护作用。

曲美他嗪对大鼠心肌缺血再灌注损伤的保护作用

目的 :探讨曲美他嗪 (trimetazidine ,TMZ)对心肌缺血再灌注损伤 (RI)的保护作用及其机制。 方法 :5 0只SD雄性大鼠随机分为假手术组、生理盐水组和药物组 (TMZ 5或 10mg/kg) ,共 4组 ,假手术组只开胸 ,不结扎冠脉。余 3组制作RI模型 ,缺血前分别静脉注射TMZ(5或 10mg/kg)及等量生理盐水 ,在缺血 30min及再灌注 4 0min时分别测定血清肌酸磷酸激酶 (CK) ,再灌注 4 0min时测定RI区心肌丙二醛 (MDA)、超氧化物歧化酶 (SOD)、谷胱甘肽 (GSH)及谷胱甘肽过氧化物酶(GSH Px)等变化。 结果 :药物组在缺血 30min时及再灌注 4 0min时的血清CK较生理盐水组显著降低。与假手术组相比 ,生理盐水组及药物组的MDA显著增高 ,SOD、GSH及GSH Px显著降低 ;与生理盐水组比较 ,药物组的MDA显著降低 ,SOD、GSH及GSH Px显著增高。 结论 :TMZ能抑制心肌细胞缺血及再灌注时心肌酶的漏出 ,对心肌缺血及缺血再灌注损伤具有一定的保护作用。其机制可能是通过提高体内自由基清除剂GSH的含量及SOD、GSH Px的活力 。

曲美他嗪对大鼠缺血再灌注心肌线粒体的保护作用

目的:探讨曲美他嗪(trimetazidine,TMZ)对缺血再灌注损伤(RI)心肌线粒体的保护作用及其机制。方法:50只雄性SD大鼠随机分为假手术组、等渗盐水组和药物组(TMZ 5 mg/kg组及TMZ 10 mg/kg组)共四组,假手术组只剖胸,不结扎冠状动脉。余三组制作RI模型,缺血前分别静脉注射TMZ(5 mg/kg或10 mg/kg)或等量等渗盐水,在缺血30 min及再灌注40 min时测定RI区心肌线粒体丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽(GSH)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-PX)及总钙浓度,并通过电镜观察心肌超微结构改变。结果:与假手术组相比,等渗盐水组及药物组线粒体中的:MDA及总钙显著增高(P<0.01),SOD、GSH及GSH-PX显著降低(均P<0.01);与等渗盐水组比较,药物组的MDA及总钙水平显著降低(P<0.05,P<0.01),SOD、GSH及GSH-PX 显著增高(P<0.05,P<0.01)。结论:TMZ能减轻缺血再灌注心肌线粒体的脂质过氧化损伤,其机制可能是通过提高线粒体内GSH含量及SOD、GSH-PX活性,增强其抗氧化能力,并通过减轻线粒体内钙聚积在细胞水平提供心肌保护作用。

衰老大鼠肝线粒体质与量的改变

目的：探究大鼠衰老时肝组织细胞线粒体的变化规律。方法：分别从４月龄和２４月龄大鼠的肝组织分离出线粒体，并用双缩脲法测定单位组织的线粒体蛋白；用Ｃｌａｒｋ氧电极极谱法分别测定线粒体呼吸链３个氧化酶活性：ＮＡＤＨ氧化酶、琥珀酸氧化酶和细胞色素氧化酶；用差光谱法（连二亚硫酸还原的消光值减去正铁氰化钾氧化的消光值）获得细胞色素ａ，ｂ，ｃ和ｃ１（Ｃｙｔａ，ｂ，ｃ和ｃ１）含量。结果：与４月龄大鼠相比，２４月龄大鼠的肝组织细胞线粒体含量有一定的下降，而３个氧化酶活性显著增强，同时细胞色素含量尤其是Ｃｙｔｂ和ｃ１也显著升高。结论：衰老大鼠肝组织线粒体呼吸链氧化功能增强可能是通过某种反馈机制使残存尚好的线粒体代偿性功能增强。

病理性氧供依赖与器官组织能量代谢间的关系

目的：分析病理性氧供依赖与器官组织能量代谢间的关系，探讨该关系对器官组织氧合评价的意义。方法：以大鼠盲肠结扎穿孔（ＣＬＰ）方法制作脓毒性休克模型，随机分成ＣＬＰ前及ＣＬＰ后２，４，５，６，７，８ｈ组，测定氧动力学等指标后，立即处死动物并取肝、心、肾组织标本，用生物发光法测定磷酸肌酸（ＰＣ）和三磷酸腺苷（ＡＴＰ）含量。结果：全身氧供给（ＤＯ２）与氧消耗（ＶＯ２）呈双相变化关系，ＤＯ２进行性降低并在ＣＬＰ后６ｈ降至临界ＤＯ２值（ｃＤＯ２），以后呈病理性氧供依赖关系。ＣＬＰ后５ｈ，肝组织ＰＣ含量明显降低（Ｐ＜０．０５），６ｈ时肝ＡＴＰ含量及肾ＰＣ、ＡＴＰ含量均明显降低；心肌ＰＣ、ＡＴＰ分别在ＣＬＰ后６，７ｈ始显著下降（Ｐ＜０．０１）。结论：病理性氧供依赖关系的出现反映了心、肝、肾组织能量代谢障碍存在，但在其出现前，肾、肝组织已开始出现这种异常，故应尽早预防器官生物能量衰竭发生。

锌对热应激大鼠SOD活性的影响

目的：探讨热应激时锌对超氧化物歧化酶（ＳＯＤ）活性的影响。方法：以ＳＤ大鼠制备热应激模型，测定以不同浓度的锌饲料喂养的大鼠在热应激的不同时间肝脏、大脑皮质ＳＯＤ活性。结果：热应激后大鼠ＳＯＤ活性升高，持续应激后ＳＯＤ活性下降；高、中锌组ＳＯＤ活性明显高于低锌组。结论：充足的锌能够通过增强ＳＯＤ活性而提高机体热耐受力。

大鼠烧伤休克延迟复苏后内脏能量代谢的变化

目的：观察烧伤休克延迟复苏后内脏能量代谢的变化．方法：通过建立大鼠烧伤休克延迟复苏模型，测定烧伤后不复苏、立即复苏和延迟复苏后心、肺、肝、肾中ＡＴＰ含量及肺、肾组织Ｎａ＋，Ｋ＋－ＡＴＰ酶活力的变化。结果：实验发现烧伤后３种复苏条件下都有ＡＴＰ含量的一过性上升，随后下降。肺、肾ＡＴＰ酶活力在伤后３０ｍｉｎ即已开始下降，在１２ｈ和６ｈ分别降至最低点，随后逐渐回升。结论：烧伤早期内脏中能量代谢紊乱是明显的，其中不仅有能量供应障碍，而且还有能量利用障碍。

冷适应对大鼠棕色脂肪组织线粒体内膜解偶联蛋白与嘌呤核苷三磷酸结合的影响

目的 :探讨冷适应对大鼠棕色脂肪线粒体内膜解偶联蛋白 (UCP)活性与含量的影响。方法 :用 [3 H]标记的鸟嘌呤核苷三磷酸 (GTP)与解偶联蛋白相结合 ,用液体闪烁仪测定其放射性活性 ,经Scatchardplot分析得出两者结合的解离常数 (Kd)和最大结合量 (Bmax)。结果 :冷适应能使棕色脂肪增加 ;冷适应组Bmax显著高于对照组 ,Kd值显著低于对照组。结论 :冷适应不仅能使棕色脂肪线粒体内膜UCP含量增加 ,而且能使其活性增加。

失血性休克大鼠IL－1活性呈双峰型变化

目的：观察大鼠失血性休克后血浆白细胞介素１（ＩＬ－１）活性及巨噬细胞分泌ＩＬ－１能力的动态变化。方法：ＳＤ大鼠失血后（３０％，按体重折算）１ｈ回输失血，不同时间采血或收集腹腔巨噬细胞，用改良ＬＡＦ法检测ＩＬ－１活性。结果：失血性休克后２～３ｈ及２４～７２ｈ血浆ＩＬ－１活性显著升高，１～２ｈ及２４～７２ｈ腹腔巨噬细胞分泌ＩＬ－１的能力也明显增强，与第１峰相比，第２峰峰值更高，持续时间更长。结论：大鼠失血性休克后ＩＬ－１活性呈双峰型升高，推测第１峰为应激峰，β－内啡肽、糖皮质激素起重要调控作用；第２峰为炎症峰，肠道内毒素入血及细菌移位起主要作用。

基因xylE编码的邻苯二酚2，3－双加氧酶在大肠杆菌中的亚克隆与高表达

目的：构建ｘｙｌＥ基因高表达菌株，为快速检测芳香类化合物污染提供可能。方法和结果：通过ＰＣＲ扩增，将位于质粒ｐＴＧ４０２上的ｘｙｌＥ基因进行扩增，克隆于ｐＵＣ１１８Ｎ和ｐＵＣ１１９Ｎ上，经双向测序，证明ＰＣＲ过程中并未发生突变，然后进一步克隆于高表达载体ｐＪＬＡ５０３，转化Ｅ．ｃｏｌｉＴＧ１，经４２℃诱导，获得了高表达的基因产物，表达量占全菌总蛋白的３４．２％。结论：ｘｙｌＥ基因在大肠杆菌中获得了高表达。

大鼠肝脏再生增强因子cDNA的克隆及其序列分析

目的：克隆大鼠肝脏再生增强因子（ＡＬＲ）ｃＤＮＡ，并对其序列进行分析。方法：建立大鼠２／３肝切除模型，从再生肝组织中提取总ＲＮＡ，利用ＲＴ－ＰＣＲ技术扩增出大鼠ＡＬＲｃＤＮＡ，亚克隆于ｐＧＥＭ－Ｔ载体，并将ＤＮＡ序列及其推测的氨基酸序列与Ｇｅｎｅｂａｎｋ作同源性比较。结果和结论：克隆到大鼠ＡＬＲｃＤＮＡ，经核苷酸序列测定证实序列完全正确，其核苷酸序列没有任何突变，它与酵母ＥＲＶ１ｃＤＮＡ有较高的同源性，核苷酸序列同源性达５４．９９％，氨基酸序列同源性达４７．０１％，并发现氨基酸序列中含有锌指蛋白结合区域。