以兴趣为导向的多元化医学免疫学教学改革探讨

医学免疫学内容相对繁杂抽象,学生难以很好地理解记忆,容易产生畏惧心理。"兴趣是最好的老师",激发学生对免疫学的兴趣是医学免疫学教学的正确方向。在教学实践中,综合运用故事教学、类比教学、多媒体教学、实验教学、文献讲解教学及提问式教学等方法以激发学生的学习热情和主动性,取得了明显成效。

学导-案例式教学法在免疫学教学中的运用

免疫学是一门所含知识广博、深奥、抽象的学科,学生学习过程中难免会感到困难,产生畏学心理。传统教学法容易导致学生学习被动,达不到理想效果。结合学导式教学和教学过程中的案例穿插讲解,以学导教学为主线,通过案例讲解加深学生对所学内容的理解,能很好地培养学生自学能力,同时挖掘学生发现和解决问题的探索精神。在此介绍学导-案例式教学法的内涵、实施过程和方法以及特色与优点。

TIM家族成员的免疫调控作用研究进展

T细胞免疫球蛋白黏蛋白(T-cell immunoglobulin and mucin,TIM)基因被发现表达于小鼠染色体11B1.1。TIM分子广泛存在于多种免疫细胞特别是抗原呈递细胞表面,可参与天然免疫和获得性免疫;某些TIM分子存在着多种配体,对T细胞具有双重作用;TIM的异常表达与多种疾病发生有关,可能作为药物治疗的新靶点;TIM与调节性T细胞(Tregs)相关性研究为移植免疫耐受诱导提供了新思路。因此,本文就TIM家族成员的免疫调节功能作一综述。

存放方式对船载冰箱保存红细胞活性与天然免疫功能的影响

目的探讨船载条件下血袋摆放方式对保存红细胞活性和天然免疫功能的影响。方法常规制备红细胞悬液4袋,每袋等分为4份,1份为对照组,留存陆地血库冰箱进行直立贴放,其余3份为实验组,于任务当天置于同1船载储血冰箱内,分别给予垂挂固定(E1)、直立贴放(E2)和平铺码放(E3)等不同方式储存,任务结束后检测每袋血液的红细胞渗透脆性、补体调控蛋白表达以及天然免疫黏附功能。结果与对照组相比,平铺码放方式保存的红细胞CD35以及免疫黏附功能均显著降低,渗透脆性明显增高;垂挂固定和直立贴放储存的红细胞,上述指标没有显著改变。3种不同存放方式对红细胞表面补体调控蛋白CD55和CD59的表达没有明显影响。结论从天然免疫黏附功能的角度分析,船载冰箱保存血液不适宜采用平铺码放方式。

树突状细胞的免疫耐受性及其在抗移植排斥中的应用

树突状细胞(dendritic cell,DC)作为专职抗原递呈细胞,其强大的抗原递呈以及免疫调节能力越来越引起人们的重视。近年来认为,DC具有调控免疫应答的作用,不仅可激发免疫反应,也可介导免疫耐受。DC的这种异质性决定了DC在肿瘤、自身免疫性疾病及移植排斥的免疫反应中起着重要的作用。

供肝丹参多酚酸盐预处理减轻受体大鼠肝移植术后胆道损伤

目的观察丹参多酚酸盐预处理供肝对受体大鼠肝移植术后胆道损伤的影响,探讨其可能的作用机制。方法根据供体肝脏保存方法,受体大鼠随机分为UW液组、丹参多酚酸盐预处理组(UW液+0.4 mg/ml丹参多酚酸盐)、生理盐水对照组(UW液+等量生理盐水)。大鼠行胆道持续外引流肝动脉化原位肝移植,观察移植术后1、6、24 h胆汁流量及胆汁酸盐分泌量。大鼠行肝动脉化大鼠原位肝移植,移植术后2周检测各组大鼠血清碱性磷酸酶、胆汁酸盐及总胆红素水平,观察胆道并发症发生率;采用实时荧光定量PCR、蛋白印迹法分别检测肝脏移植物内胆汁酸盐输出泵(bile salt export pump,BSEP)基因及蛋白的表达。结果与UW液组及生理盐水对照组相比,丹参多酚酸盐预处理组大鼠术后早期胆汁流量及胆汁酸盐分泌量明显增加(P<0.05);术后2周血清碱性磷酸酶、胆汁酸盐及总胆红素水平明显降低(P<0.05),胆汁淤积等胆道并发症发生率明显降低(P<0.01);肝脏移植物内BSEP mRNA及蛋白表达均升高(P<0.05)。结论UW液内加入丹参多酚酸盐保存供肝可明显减轻受体大鼠肝移植术后胆道损伤,降低术后胆道并发症的发生,可能与其促进移植肝内BSEP表达有关。

第五届全国肿瘤生物治疗会议述评

自1995年在上海召开第四届全国肿瘤生物治疗会议以来,我国的肿瘤生物治疗研究和应用发展迅速并取得了新的进展;与此同时,国外又涌现出许多新的理论和方法.因此,召开一次有关的全国性专业学术会议将对我国肿瘤生物治疗的深入研究及临床应用乃至未来的发展具有重要意义.由中国免疫学会肿瘤免疫与生物治疗专业委员会、中国抗癌协会肿瘤生物治疗专业研究会及中华医学会肿瘤学会联合主办的“第五届全国肿瘤生物治疗会议”于1997年9月21～25日在四川成都召开.这次会议共收到稿件429篇,为历届肿瘤生物治疗会议之最,也表明目前国内肿瘤生物治疗研究之兴盛.其中,21篇作了大会发言;203篇以摘要形式在《中国肿瘤生物治疗杂志》上发表;120篇参加了分组讨论.这次会议的主要议题是:(1)总结和交流自第四次全国肿瘤生物治疗会议以来我国肿瘤生物治疗领域的基础研究及临床工作,对此作出恰当的评价并增进对国外最新进展的了解;(2)介绍各单位在肿瘤生物治疗领域的研究及临床工作,从而加强国内同行彼此之间的交流与合作;(3)学习肿瘤生物治疗的规范化要求、新药技术的审评要求以加强对肿瘤生物治疗研究及应用的管理;(4)通过了解与学习国外该领域的最新进展。

趋化因子受体CXCR4小干扰RNA对人大肠癌细胞株迁移的抑制作用

目的:探讨趋化因子受体CXCR4小干扰RNA(siRNA)对人大肠癌细胞株迁移的抑制作用。方法:采用RT-PCR、Western印迹和体外迁移实验检测趋化因子受体CXCR4在大肠癌细胞株SW480、SW620、LoVo细胞的表达及迁移能力。将与CXCR4 mRNA互补的siRNA及非抑制性双链RNA(Non-silencing dsRNA),在脂质体介导下以150 nmol/L终浓度转染大肠癌细胞SW480,以RT-PCR和Western印迹法检测CXCR4表达的变化,Transwell迁移实验检测大肠癌细胞SW480迁移的变化。结果:大肠癌细胞SW480高表达CXCR4,大肠癌细胞LoVo低表达CXCR4,SW620的CXCR4表达水平介于二者之间。与LoVo细胞相比,SW480和SW620迁移细胞明显增多(P<0.01)。与对照组、脂质体组和Non-silencing dsRNA组相比,siRNA组SW480细胞内CXCR4 mRNA和蛋白均明显降低,细胞迁移被明显抑制(P<0.01)。结论:CXCR4 siRNA可通过下调CXCR4的表达抑制人大肠癌细胞SW480的迁移。

大鼠原位肝移植模型的手术技巧

目的探讨建立稳定的大鼠原位肝移植模型的外科手术技巧,为研究肝脏缺血再灌注损伤提供技术支持。方法110只雄性SD大鼠随机配对后分别作为供体和受体,通过改良Kamada"二袖套"法施行大鼠原位肝移植。结果改良Kamada法建立大鼠原位肝移植模型共52例,7d生存率88.5%,7例长期存活大于100d。结论大鼠原位肝移植模型的建立需要极度的耐心和娴熟的手术技巧,模型的建立有助于研究肝脏缺血再灌注损伤,移植免疫及器官保存。

缺失错配修复基因MLH1的结直肠癌HCT-116细胞对氟尿嘧啶耐药机制的研究

目的研究缺失错配修复基因MLH1(MutL homolog 1)的结直肠癌细胞HCT-116对氟尿嘧啶(5-Fu)耐药机制。方法通过构建MLH1缺失的结直肠癌细胞HCT-116稳定表达MLH1细胞株,CCK-8试剂检测细胞恢复MLH1表达后对化疗药物5-Fu耐药性的影响,并通过流式细胞仪检测细胞表面干细胞标志CD133和分化标志CK20以及CK8的表达变化。结果 HCT-116稳定表达MLH1分子后,其对5-Fu作用的化疗耐受性降低,5-Fu处理后细胞的活率显著降低(P<0.01);流式细胞仪检测结果显示CD133表达显著降低,并伴随细胞分化标志CK8和CK20表达上调。结论结直肠癌细胞缺失错配修复基因MLH1引起5-Fu耐药性可能与其促进肿瘤干细胞样特性密切相关。

α-黑色素细胞刺激素对二次打击急性呼吸窘迫综合征大鼠肺血管内皮细胞凋亡的影响

目的 研究α-黑色素细胞刺激素(α-MSH)对急性失血性休克加肺内毒素(LPS)损伤二次打击致急性呼吸窘迫综合征(ARDS)模型大鼠肺血管内皮细胞凋亡的影响,并探讨其可能的作用机制。方法雄性SD大鼠10只,体质量(337±25)g,随机分为ARDS模型组和α-MSH治疗组,每组5只。所有动物均行机械通气,吸入氧浓度(FiO2)为0.50;在20 min内自颈动脉放血至平均动脉压为(45±5)mm Hg(1 mm Hg=0.133 kPa),于休克1 h后开始液体复苏,在2 h内回输全部采集血液及等量平衡液;然后气管内给予LPS200μg/kg以建立ARDS动物模型。α-MSH治疗组在LPS致伤的同时和致伤后3、6 h各时间点均给予α-MSH 1.7 mg/kg。在LPS致伤9 h后处死大鼠,取肺组织,分别行光镜及电镜检查,观察组织病理改变和肺血管内皮细胞凋亡情况。结果 ARDS组大鼠肺泡腔内大量纤维蛋白性渗出,其中见大量红细胞。间质内大量炎症细胞浸润,肺泡壁小血管扩张充血;电镜下可见肺血管内皮细胞凋亡发展至晚期阶段,染色质明显边集,胞浆内大量空泡形成。α-MSH治疗组大鼠肺泡腔内未见炎症细胞渗出,可见少量浆液性渗出,毛细血管扩张充血不明显,间质中少量炎症细胞浸润;电镜下可见肺血管内皮细胞染色质边集程度较轻,凋亡为早期阶段。结论

小鼠胚胎干细胞来源的HPP-CFC体外和体内造血活性分析

小鼠的造血系统起源于胚胎发育 7d的卵黄囊胚外中胚层 ,研究表明胚胎干细胞 (Embryonicstemcells ,EScells)体外分化模型能够模拟卵黄囊造血的发生过程 ;此外 ,诱导ES细胞体外定向造血细胞分化对于建立治疗性克隆以治愈多种血液病具有重要的研究和应用价值。高增殖潜能集落形成细胞 (Highproliferativepotentialcolony form ingcells ,HPP CFC)是体外培养的最原始的多潜能造血前体细胞之一。本研究发现 :小鼠ES细胞在体外分化 5～14d形成的拟胚体中含有HPP CFC。其再生潜能与胚胎期 9d的卵黄囊来源的HPP CFC相似 ,与骨髓来源则不同。RT PCR分析表明 :ES细胞来源的HPP CFC表达与造血干细胞增殖相关的特异性转录因子和多种造血生长因子受体。但分化 12d的拟胚体细胞和HPP CFC集落细胞移植受致死剂量照射的小鼠不能产生典型的脾结节。因此 ,ES细胞来源的HPP CFC在体外和体内造血活性的差异值得更深入地研究。

胆汁中趋化因子IP-10及其可溶性受体CXCR3与移植肝急性排斥反应的相关性

目的:观察胆汁中趋化因子IP-10及其可溶性受体CXCR3(sCXCR3)的动态变化,探讨其与移植肝急性排斥反应(AR)的关系。方法:以2007年10月～2008年3月在本院行肝移植术的28例患者为研究对象,按急性排斥反应发生与否分为AR组(n=8)和NAR组(n=20);另选本院消化科因胆石症行鼻胆管引流(ENBD)的患者10例作为对照。采用双抗体夹心ELISA方法检测患者移植术后第1、3、5、7天和激素冲击治疗第1、3、7天胆汁中趋化因子IP-10及sCXCR3的表达变化,分析其与肝穿刺活检Banff排斥活动指数(RAI)的相关性,评价其对AR的诊断价值。结果:肝移植患者术后胆汁中趋化因子IP-10及sCXCR3的表达水平逐渐升高,术后第5天达到高峰,且从第5天开始,AR组患者的表达水平显著高于NAR组和ENBD组(P<0.05);经激素冲击治疗后,IP-10及sCXCR3的表达水平明显下降(P<0.05)。AR确诊当日,胆汁中趋化因子IP-10及sCXCR3的表达水平与RAI具有良好相关性(P<0.05)。术后第5天,截断值为964.45pg/ml时,IP-10诊断AR的敏感性为87.5%,特异度为100%;术后第7天,截断值为819.35pg/ml时,sCXCR3诊断AR的敏感性为87.5%,特异度为80%。结论:肝移植术后早期,胆汁中趋化因子IP-10及sCXCR3的动态变化与移植肝急性排斥反应密切相关,有望成为AR早期诊断及抗排斥治疗效果的无创监测指标。

Cy7.SE标记ICOS-Ab荧光示踪技术评估小鼠心脏移植术后急性排斥反应

目的探讨以T细胞活化表达的可诱导共刺激分子(inducible co-stimulatory molecule,ICOS)为基础的荧光示踪技术无创诊断小鼠心脏移植后急性排斥反应的可行性。方法以小鼠颈部异位心脏移植为模型,分为同系移植、同种移植、同种移植+他克莫司(tacrolimus,FK506)治疗(同种移植治疗组)及同种移植治疗后停药组,分别在移植术后1、3、5、7d,采用荧光染料Cy7.SE标记抗小鼠ICOS抗体(Cy7.SE-ICOS-Ab)经尾静脉注入移植小鼠,用荧光实时显像仪观察移植物荧光图像变化;同时用流式细胞仪检测各组小鼠脾脏T细胞表面ICOS表达,H-E染色分析心脏移植物病理改变。结果同系移植及同种移植治疗组小鼠移植术后各时间点基本不显影;同种移植术后1d,移植物荧光图像无明显变化,但术后3、5、7d荧光逐渐增强,术后7d时荧光强度最明显;同种移植治疗后停药组停药3d移植物荧光强度逐渐增强,停药5、7d后强度明显增强。H-E染色表明:各时间点同系移植及同种移植治疗组小鼠心脏移植物无明显排斥反应;同种移植及同种移植治疗后停药组在术后(或停药后)1d移植物无明显排斥反应,术后3、5、7d排斥反应逐渐出现并加重。流式细胞仪检测显示:术后1d,各组脾脏T细胞表达ICOS水平无明显差异;同系移植及同种移植治疗组在各时间点基本不表达ICOS,但同种移植及同种移植治疗后停药组在术后(或停药后)3、5、7dICOS表达逐渐增加(P<0.05)。结论 ICOS表达强度与心脏移植后排斥反应强度有关,荧光标记的ICOS抗体可能有助于无创评估移植术后急性排斥反应的发生及程度。

小鼠肝脏持续低灌注模型的建立及其对热缺血再灌注损伤的耐受性

目的建立一种稳定的小鼠肝脏持续低灌注模型，并在此基础上研究肝脏持续低灌注对小鼠肝脏热缺血再灌注损伤的影响。方法选用6～8周龄C57BL／6小鼠建模，将门静脉缩窄至1mL注射器针头直径，门静脉缩窄后3d、7d、14d和21d行肝功能及肝脏组织病理学检测；选用稳定的模型小鼠行70％缺血再灌注手术，再灌注3h、24h、48h后行肝功能及肝脏组织病理学检测。对照组采用正常C57BL／6小鼠行缺血再灌注手术。结果小鼠门静脉缩窄术后，丙氨酸转氨酶（ALT）和天冬氨酸转氨酶（AST）均有不同程度的升高，在7d时达到高峰[ALT：（60.8±6．2）U／LVS（25．5±2．8）U／L，P〈0．001；AST：（74．9±6．1）U／Lvs（39．1±3．2）U／L，P〈O．001），同时H-E染色显示7d时肝细胞损伤最重，并且有较多炎细胞浸润；在21d时，ALT基本恢复正常水平（P〉O．05），而AST仍高于正常水平（P=0．03）。低灌注处理7d的小鼠进行缺血再灌注手术后，肝酶和组织病理学检查显示肝细胞损伤较对照组显著加重，肝酶在再灌注3h达到高峰[ALT：（8217．0±1111．8）U／LVS（5597.4±1015．3）U／L，P=0．004；AST：（8548．2±1155．4）U／LVS（5765．4±956．9）U／L，P=0．003]；再灌注48h时，对照组小鼠ALT和AST均恢复正常，而经过低灌注处理的小鼠肝酶仍高于对照组[ALT：（608．8±442．9）U／LVS（47．4±20．1）U／L，P=0．008；AST：（861．8±442．8）U／LVS（70.8±68．3）U／L，P=0．008）。结论成功建立了稳定的小鼠肝脏持续低灌注模型，经持续低灌注处理后的肝脏对热缺血再灌注损伤的耐受能力显著降低，这在一定程度上能够模拟临床上心死亡器官捐献供肝的状况。

高迁移率族蛋白1的研究进展

高迁移率族蛋白1(HMGB1)是核蛋白的一种,与染色体的稳定性有关,并参与了细胞的转录等生理活动。近年研究发现,它在细胞外也起着非常重要的作用。尤其是在炎性反应中,作为一种迟发型介质,通过细胞的主动和被动分泌,介导了炎症的发展过程。与以前认为起主要作用的速发型介质如TNF、IL-1等相比,HMGB1可能更加具有临床意义。此外,它还与细胞的迁移和分化有一定的关系。

CD4^+记忆性T细胞产生的细胞学机制

在免疫应答中,初始T细胞增殖并分化为效应T细胞,其中很少一部分分化为T记忆细胞(Tm),后者具有介导再次免疫应答的作用。最近研究表明,CD4+Tm既可由活化的效应T细胞分化而来,也可以直接由初始T细胞分化而来。在此过程中,与效应T细胞竞争树突状细胞(DC)提呈的抗原信息、与DC接触的时间长短以及TCR信号的强弱均可影响CD4+Tm的形成。研究CD4+Tm形成的细胞学机制对了解机体免疫学功能,制备更有效的疫苗,研究肿瘤和自身免疫病的机制及治疗方案等均有重要的理论意义和实用价值。

CD4^+记忆性T细胞产生和维持的分子机制

免疫记忆是适应性免疫的主要特点之一。通过免疫记忆,机体能更迅速、有效地清除抗原。因此,免疫记忆(特别是T细胞免疫记忆)的产生和维持一直是免疫学家关心的课题。随着分子生物学,特别是基因工程动物技术的发展,诱导T细胞免疫记忆机制的研究逐步深入并成为当今免疫学研究的热点之一。对记忆性CD4+T细胞(CD4+Tm)的表型、诱导分化以及维持等有大量的细胞学研究,并已知IL-7是诱导CD4+Tm产生和维持存活的关键分子,且IL-7受体(IL-7R)相关的信号转导途径也有许多报道。在此,我们对IL-7在CD4+Tm产生和维持的分子机制研究近况作一阐述。