TIM家族成员的免疫调控作用研究进展

T细胞免疫球蛋白黏蛋白(T-cell immunoglobulin and mucin,TIM)基因被发现表达于小鼠染色体11B1.1。TIM分子广泛存在于多种免疫细胞特别是抗原呈递细胞表面,可参与天然免疫和获得性免疫;某些TIM分子存在着多种配体,对T细胞具有双重作用;TIM的异常表达与多种疾病发生有关,可能作为药物治疗的新靶点;TIM与调节性T细胞(Tregs)相关性研究为移植免疫耐受诱导提供了新思路。因此,本文就TIM家族成员的免疫调节功能作一综述。

以兴趣为导向的多元化医学免疫学教学改革探讨

医学免疫学内容相对繁杂抽象,学生难以很好地理解记忆,容易产生畏惧心理。"兴趣是最好的老师",激发学生对免疫学的兴趣是医学免疫学教学的正确方向。在教学实践中,综合运用故事教学、类比教学、多媒体教学、实验教学、文献讲解教学及提问式教学等方法以激发学生的学习热情和主动性,取得了明显成效。

学导-案例式教学法在免疫学教学中的运用

免疫学是一门所含知识广博、深奥、抽象的学科,学生学习过程中难免会感到困难,产生畏学心理。传统教学法容易导致学生学习被动,达不到理想效果。结合学导式教学和教学过程中的案例穿插讲解,以学导教学为主线,通过案例讲解加深学生对所学内容的理解,能很好地培养学生自学能力,同时挖掘学生发现和解决问题的探索精神。在此介绍学导-案例式教学法的内涵、实施过程和方法以及特色与优点。

从医学免疫学本科教学塑造学术型人才的实践

医学免疫学是以实验为基础的学科,在多年理论和实验教学实践的基础上,总结教学心得和方法,通过多元化的教学手段,从课堂理论教学有意识地激发学生的学术潜能,通过实验课和第二课堂加强学生的动手能力,为培养具有科研素质的学术型创新人才提供实践经验。

存放方式对船载冰箱保存红细胞活性与天然免疫功能的影响

目的探讨船载条件下血袋摆放方式对保存红细胞活性和天然免疫功能的影响。方法常规制备红细胞悬液4袋,每袋等分为4份,1份为对照组,留存陆地血库冰箱进行直立贴放,其余3份为实验组,于任务当天置于同1船载储血冰箱内,分别给予垂挂固定(E1)、直立贴放(E2)和平铺码放(E3)等不同方式储存,任务结束后检测每袋血液的红细胞渗透脆性、补体调控蛋白表达以及天然免疫黏附功能。结果与对照组相比,平铺码放方式保存的红细胞CD35以及免疫黏附功能均显著降低,渗透脆性明显增高;垂挂固定和直立贴放储存的红细胞,上述指标没有显著改变。3种不同存放方式对红细胞表面补体调控蛋白CD55和CD59的表达没有明显影响。结论从天然免疫黏附功能的角度分析,船载冰箱保存血液不适宜采用平铺码放方式。

树突状细胞的免疫耐受性及其在抗移植排斥中的应用

树突状细胞(dendritic cell,DC)作为专职抗原递呈细胞,其强大的抗原递呈以及免疫调节能力越来越引起人们的重视。近年来认为,DC具有调控免疫应答的作用,不仅可激发免疫反应,也可介导免疫耐受。DC的这种异质性决定了DC在肿瘤、自身免疫性疾病及移植排斥的免疫反应中起着重要的作用。

落新妇苷通过促进IL-10表达保护小鼠缺血再灌注损伤肝脏

目的:观察落新妇苷对肝脏热缺血再灌注损伤的保护作用,对其机制进行初步探讨。方法:C57BL/6小鼠随机分为4组:假手术组(Sham)、模型组(I/R)、落新妇苷小剂量(10mg/kg)干预组和落新妇苷大剂量(40mg/kg)干预组。缺血前24h和1h干预组小鼠腹腔注射分别给予10或40mg/kg的落新妇苷,建立肝左、中叶70%部分肝缺血再灌注模型,模型组和假手术组给予同样体积的生理盐水。小鼠肝脏左叶缺血90min、再灌注6h后各实验组采集血液和肝脏组织样本。检测血清中丙氨酸转氨酶(ALT)的活性作为肝功能损伤的指标,同时用ELISA检测肝组织中MPO含量。观察肝脏组织病理学改变。Western印迹检测肝组织中IL-10蛋白含量,半定量RT-PCR检测IL-10 mRNA表达情况。结果:落新妇苷干预能有效降低部分肝脏热缺血再灌注小鼠血清ALT水平,能有效降低缺血肝脏中MPO含量,改善肝组织病理表现。干预组肝组织中IL-10蛋白表达与I/R模型对照组比较均渐次升高,与半定量RT-PCR结果相符(小剂量干预组P<0.05;大剂量干预组P<0.01)。结论:落新妇苷干预能减轻小鼠肝脏热缺血再灌注损伤后的炎症反应,有效改善肝功能和肝脏病理损害;机制可能在于其能促进缺血再灌注损伤肝组织中IL-10的高表达。

供肝丹参多酚酸盐预处理减轻受体大鼠肝移植术后胆道损伤

目的观察丹参多酚酸盐预处理供肝对受体大鼠肝移植术后胆道损伤的影响,探讨其可能的作用机制。方法根据供体肝脏保存方法,受体大鼠随机分为UW液组、丹参多酚酸盐预处理组(UW液+0.4 mg/ml丹参多酚酸盐)、生理盐水对照组(UW液+等量生理盐水)。大鼠行胆道持续外引流肝动脉化原位肝移植,观察移植术后1、6、24 h胆汁流量及胆汁酸盐分泌量。大鼠行肝动脉化大鼠原位肝移植,移植术后2周检测各组大鼠血清碱性磷酸酶、胆汁酸盐及总胆红素水平,观察胆道并发症发生率;采用实时荧光定量PCR、蛋白印迹法分别检测肝脏移植物内胆汁酸盐输出泵(bile salt export pump,BSEP)基因及蛋白的表达。结果与UW液组及生理盐水对照组相比,丹参多酚酸盐预处理组大鼠术后早期胆汁流量及胆汁酸盐分泌量明显增加(P<0.05);术后2周血清碱性磷酸酶、胆汁酸盐及总胆红素水平明显降低(P<0.05),胆汁淤积等胆道并发症发生率明显降低(P<0.01);肝脏移植物内BSEP mRNA及蛋白表达均升高(P<0.05)。结论UW液内加入丹参多酚酸盐保存供肝可明显减轻受体大鼠肝移植术后胆道损伤,降低术后胆道并发症的发生,可能与其促进移植肝内BSEP表达有关。

青藤碱对大鼠原位肝移植缺血再灌注损伤的保护作用

目的:探讨青藤碱对大鼠原位肝移植缺血再灌注损伤的保护作用。方法:采用Kamada’s"二袖套法"建立SD→SD大鼠原位肝移植模型,随机分为假手术组、对照组、低剂量(40mg/kg)和高剂量(80mg/kg)青藤碱组,分别观察移植术后1周存活率,检测术后2、6、12、24h血清ALT,TUNEL法检测肝细胞凋亡指数(AI),RT-PCR检测肝脏组织中的TNF-α、IL-1β mRNA的含量,并观察移植肝脏病理学改变。结果:与对照组比较,青藤碱低剂量、高剂量组术后1周存活率显著提高(75%、75%vs12.5%,P<0.01);在各个时间点,青藤碱治疗组的ALT水平明显低于对照组(P<0.01),肝组织中的TNF-α、IL-1β mRNA表达与对照组相比均显著降低(P<0.01),肝脏病理学形态也明显改善。结论:青藤碱可以通过抑制TNF-α、IL-1β等炎症性细胞因子合成,抑制肝细胞凋亡,减轻肝细胞及肝窦内皮细胞的损伤,达到保护肝移植缺血再灌注损伤的效果。

第五届全国肿瘤生物治疗会议述评

自1995年在上海召开第四届全国肿瘤生物治疗会议以来,我国的肿瘤生物治疗研究和应用发展迅速并取得了新的进展;与此同时,国外又涌现出许多新的理论和方法.因此,召开一次有关的全国性专业学术会议将对我国肿瘤生物治疗的深入研究及临床应用乃至未来的发展具有重要意义.由中国免疫学会肿瘤免疫与生物治疗专业委员会、中国抗癌协会肿瘤生物治疗专业研究会及中华医学会肿瘤学会联合主办的“第五届全国肿瘤生物治疗会议”于1997年9月21～25日在四川成都召开.这次会议共收到稿件429篇,为历届肿瘤生物治疗会议之最,也表明目前国内肿瘤生物治疗研究之兴盛.其中,21篇作了大会发言;203篇以摘要形式在《中国肿瘤生物治疗杂志》上发表;120篇参加了分组讨论.这次会议的主要议题是:(1)总结和交流自第四次全国肿瘤生物治疗会议以来我国肿瘤生物治疗领域的基础研究及临床工作,对此作出恰当的评价并增进对国外最新进展的了解;(2)介绍各单位在肿瘤生物治疗领域的研究及临床工作,从而加强国内同行彼此之间的交流与合作;(3)学习肿瘤生物治疗的规范化要求、新药技术的审评要求以加强对肿瘤生物治疗研究及应用的管理;(4)通过了解与学习国外该领域的最新进展。

自噬及其作用的相对性

自噬,"自我吞噬",即细胞能够吞噬包裹细胞自体成分或外来病原体,用于降解、清除或能量循环。这一现象所涉及的两个重要阶段——自噬体形成和溶酶体降解内容物,其发现及机制分别获得了2016年和1974年的诺贝尔生理学或医学奖,彰显这一生命现象的重要性。从酵母到人类细胞,自噬这一保守的细胞过程均发挥着重要的生理功能。自噬功能异常会导致很多病理性改变,与感染、肿瘤、神经退行性改变及缺血性疾病等都有着密切和重要的关系;并且在不同疾病或同一疾病的不同病理阶段,自噬发挥着复杂甚至相对的作用。

趋化因子受体CXCR4小干扰RNA对人大肠癌细胞株迁移的抑制作用

目的:探讨趋化因子受体CXCR4小干扰RNA(siRNA)对人大肠癌细胞株迁移的抑制作用。方法:采用RT-PCR、Western印迹和体外迁移实验检测趋化因子受体CXCR4在大肠癌细胞株SW480、SW620、LoVo细胞的表达及迁移能力。将与CXCR4 mRNA互补的siRNA及非抑制性双链RNA(Non-silencing dsRNA),在脂质体介导下以150 nmol/L终浓度转染大肠癌细胞SW480,以RT-PCR和Western印迹法检测CXCR4表达的变化,Transwell迁移实验检测大肠癌细胞SW480迁移的变化。结果:大肠癌细胞SW480高表达CXCR4,大肠癌细胞LoVo低表达CXCR4,SW620的CXCR4表达水平介于二者之间。与LoVo细胞相比,SW480和SW620迁移细胞明显增多(P<0.01)。与对照组、脂质体组和Non-silencing dsRNA组相比,siRNA组SW480细胞内CXCR4 mRNA和蛋白均明显降低,细胞迁移被明显抑制(P<0.01)。结论:CXCR4 siRNA可通过下调CXCR4的表达抑制人大肠癌细胞SW480的迁移。

大鼠原位肝移植模型的手术技巧

目的探讨建立稳定的大鼠原位肝移植模型的外科手术技巧,为研究肝脏缺血再灌注损伤提供技术支持。方法110只雄性SD大鼠随机配对后分别作为供体和受体,通过改良Kamada"二袖套"法施行大鼠原位肝移植。结果改良Kamada法建立大鼠原位肝移植模型共52例,7d生存率88.5%,7例长期存活大于100d。结论大鼠原位肝移植模型的建立需要极度的耐心和娴熟的手术技巧,模型的建立有助于研究肝脏缺血再灌注损伤,移植免疫及器官保存。

α-黑色素细胞刺激素对二次打击急性呼吸窘迫综合征大鼠肺血管内皮细胞凋亡的影响

目的 研究α-黑色素细胞刺激素(α-MSH)对急性失血性休克加肺内毒素(LPS)损伤二次打击致急性呼吸窘迫综合征(ARDS)模型大鼠肺血管内皮细胞凋亡的影响,并探讨其可能的作用机制。方法雄性SD大鼠10只,体质量(337±25)g,随机分为ARDS模型组和α-MSH治疗组,每组5只。所有动物均行机械通气,吸入氧浓度(FiO2)为0.50;在20 min内自颈动脉放血至平均动脉压为(45±5)mm Hg(1 mm Hg=0.133 kPa),于休克1 h后开始液体复苏,在2 h内回输全部采集血液及等量平衡液;然后气管内给予LPS200μg/kg以建立ARDS动物模型。α-MSH治疗组在LPS致伤的同时和致伤后3、6 h各时间点均给予α-MSH 1.7 mg/kg。在LPS致伤9 h后处死大鼠,取肺组织,分别行光镜及电镜检查,观察组织病理改变和肺血管内皮细胞凋亡情况。结果 ARDS组大鼠肺泡腔内大量纤维蛋白性渗出,其中见大量红细胞。间质内大量炎症细胞浸润,肺泡壁小血管扩张充血;电镜下可见肺血管内皮细胞凋亡发展至晚期阶段,染色质明显边集,胞浆内大量空泡形成。α-MSH治疗组大鼠肺泡腔内未见炎症细胞渗出,可见少量浆液性渗出,毛细血管扩张充血不明显,间质中少量炎症细胞浸润;电镜下可见肺血管内皮细胞染色质边集程度较轻,凋亡为早期阶段。结论

缺失错配修复基因MLH1的结直肠癌HCT-116细胞对氟尿嘧啶耐药机制的研究

目的研究缺失错配修复基因MLH1(MutL homolog 1)的结直肠癌细胞HCT-116对氟尿嘧啶(5-Fu)耐药机制。方法通过构建MLH1缺失的结直肠癌细胞HCT-116稳定表达MLH1细胞株,CCK-8试剂检测细胞恢复MLH1表达后对化疗药物5-Fu耐药性的影响,并通过流式细胞仪检测细胞表面干细胞标志CD133和分化标志CK20以及CK8的表达变化。结果 HCT-116稳定表达MLH1分子后,其对5-Fu作用的化疗耐受性降低,5-Fu处理后细胞的活率显著降低(P<0.01);流式细胞仪检测结果显示CD133表达显著降低,并伴随细胞分化标志CK8和CK20表达上调。结论结直肠癌细胞缺失错配修复基因MLH1引起5-Fu耐药性可能与其促进肿瘤干细胞样特性密切相关。

胆汁中趋化因子IP-10及其可溶性受体CXCR3与移植肝急性排斥反应的相关性

目的:观察胆汁中趋化因子IP-10及其可溶性受体CXCR3(sCXCR3)的动态变化,探讨其与移植肝急性排斥反应(AR)的关系。方法:以2007年10月～2008年3月在本院行肝移植术的28例患者为研究对象,按急性排斥反应发生与否分为AR组(n=8)和NAR组(n=20);另选本院消化科因胆石症行鼻胆管引流(ENBD)的患者10例作为对照。采用双抗体夹心ELISA方法检测患者移植术后第1、3、5、7天和激素冲击治疗第1、3、7天胆汁中趋化因子IP-10及sCXCR3的表达变化,分析其与肝穿刺活检Banff排斥活动指数(RAI)的相关性,评价其对AR的诊断价值。结果:肝移植患者术后胆汁中趋化因子IP-10及sCXCR3的表达水平逐渐升高,术后第5天达到高峰,且从第5天开始,AR组患者的表达水平显著高于NAR组和ENBD组(P<0.05);经激素冲击治疗后,IP-10及sCXCR3的表达水平明显下降(P<0.05)。AR确诊当日,胆汁中趋化因子IP-10及sCXCR3的表达水平与RAI具有良好相关性(P<0.05)。术后第5天,截断值为964.45pg/ml时,IP-10诊断AR的敏感性为87.5%,特异度为100%;术后第7天,截断值为819.35pg/ml时,sCXCR3诊断AR的敏感性为87.5%,特异度为80%。结论:肝移植术后早期,胆汁中趋化因子IP-10及sCXCR3的动态变化与移植肝急性排斥反应密切相关,有望成为AR早期诊断及抗排斥治疗效果的无创监测指标。

TNF基因转染后分泌不同水平TNF的LAK细胞克隆增殖能力和杀伤活性的比较

在逆转录病毒介导下将ＴＮＦ基因转染入小鼠ＬＡＫ细胞中，采用Ｇ４１８抗性筛选和有限稀释法，将ＬＡＫ细胞克隆化，并筛选出３株分泌不同水平ＴＮＦ的ＬＡＫ细胞克隆。结果表明，这３株ＬＡＫ细胞克隆分泌的ＴＮＦ水平、增殖能力和杀伤活性均显著高于对照组ＬＡＫ细胞。而高分泌株的ＬＡＫ细胞克隆，其增殖能力和杀伤活性最高；中分泌株次之；低分泌株相对较低。抗ＴＮＦ单抗可显著抑制此３株ＬＡＫ细胞体外杀伤活性，表明其杀伤活性升高是由基因转染后所表达的ＴＮＦ介导的，所表达ＴＮＦ水平越高，其增殖能力和杀伤活性越高。

小鼠胚胎干细胞来源的HPP-CFC体外和体内造血活性分析

小鼠的造血系统起源于胚胎发育 7d的卵黄囊胚外中胚层 ,研究表明胚胎干细胞 (Embryonicstemcells ,EScells)体外分化模型能够模拟卵黄囊造血的发生过程 ;此外 ,诱导ES细胞体外定向造血细胞分化对于建立治疗性克隆以治愈多种血液病具有重要的研究和应用价值。高增殖潜能集落形成细胞 (Highproliferativepotentialcolony form ingcells ,HPP CFC)是体外培养的最原始的多潜能造血前体细胞之一。本研究发现 :小鼠ES细胞在体外分化 5～14d形成的拟胚体中含有HPP CFC。其再生潜能与胚胎期 9d的卵黄囊来源的HPP CFC相似 ,与骨髓来源则不同。RT PCR分析表明 :ES细胞来源的HPP CFC表达与造血干细胞增殖相关的特异性转录因子和多种造血生长因子受体。但分化 12d的拟胚体细胞和HPP CFC集落细胞移植受致死剂量照射的小鼠不能产生典型的脾结节。因此 ,ES细胞来源的HPP CFC在体外和体内造血活性的差异值得更深入地研究。