现代教育技术在医学遗传学教学中的应用

利用现代教育技术，完善了医学遗传学教学内容，把网络教学、PBL教学模式引入医学遗传学教学中，改变了医学遗传学教学旧有的教学模式，提高了教学效果，推进了医学遗传学的教学改革。

运用现代教育技术,提高医学遗传学课堂教学质量

以加强硬件和软件建设为基础,搭建现代教育技术平台。将电化媒体技术(幻灯、投影、录音、电视、多媒体)、网络教学、PBL教学模式引入医学遗传学教学中,使教师-教材-学生有机融合为一体。授课内容以文字、图形、声音等形式呈现出来,加强与学生的互动,吸引学生注意力并增加学生的学习兴趣,以提高教学效果。

医学遗传学专业研究生科研素质能力培养初探

研究生教育是医学教育结构中的最高层次。对于医学研究生来说,科研素质能力的培养是最重要的培养内容之一,也是区别于本科教育的主要方面之一。作为医学遗传学专业的研究生,由于学科的特点,其科研素质能力的培养具有一定的特殊性。结合教研室多年的研究生培养经验,从科研作风、科研动机、科研思维、科研技能、科研制度五个方面探讨如何提高医学遗传学专业研究生的科研素质能力。

八年制医学生临床遗传学教学中应用翻转课堂的可行性探讨

介绍了"翻转课堂"的背景知识,针对八年制医学生临床遗传学教学现状,分析了临床遗传学教学中实施"翻转课堂"的可行性和需要注意的问题,以提高八年制医学生遗传学知识的应用能力;分析了翻转课堂在临床遗传学教学中应用的局限性和应对策略。

临床遗传学实验教学体系的改革与实践

为培养具有基础思维能力与临床实践能力的遗传学创新型人才,根据遗传学的学科特点与学生实际情况,将遗传病分析与遗传实验教学相结合,从改进教学方法、开放实验室平台、构建多元化考核方法等方面,对临床遗传学教学体系进行了改革与实践,以提高教学效果。

PBL教学法在临床遗传学教学中的应用与思考

作为医科院校的遗传学教学工作者,如何教好临床遗传学,将遗传学原理和方法与临床实践相结合,是当前所面临的实际问题之一。PBL教学法是一种以问题为基础的教学法,近年来在教育界受到广泛的关注。将PBL教学法引入临床遗传学的教学中,通过与传统教学法的教学效果进行对比,并探讨了PBL教学法的应用在充分发挥学生学习主体作用、促进基础理论与临床实践结合等方面的意义。

临床遗传学新增二级学科研究生培养体系的设置与探讨

随着营养性和传染性疾病的明显减少,人们对人类疾病中遗传因素的决定作用愈加重视,社会对临床遗传医疗服务有着迫切的需求。通过近年来临床遗传学学科在国内外发展状况分析,阐述了该学科设置的意义与研究价值,同时介绍了临床遗传学的学科内涵与主要研究内容,并探讨了临床遗传学学科研究生培养目标及学位与课程体系的设置。

基于胎源遗传物质的唐氏综合征无创性产前诊断研究进展

唐氏综合征是常见且严重的染色体异常类出生缺陷,迄今无有效治疗方法,在产前进行筛查与诊断,减少和避免患儿出生是唯一预防措施。目前常用的侵入性诊断方式因存在诸多弊端而被部分孕妇拒绝接受,因此寻找并建立准确且无创的唐氏综合征产前诊断方法是亟待解决的重要临床问题。利用存在于母体外周血中的胎儿遗传物质是近年来开展的无创性产前诊断新途径,本文就利用母血中的胎儿游离核酸进行唐氏综合征的产前诊断作一综述。

八年制临床遗传学课程整合建设的改革探索

为深化教学模式改革,优化课程体系建设,提高人才培养质量,第二军医大学自2011年起开展了以"器官-系统-疾病"为纽带的八年制医学课程整合建设。医学遗传学教研室在八年制临床遗传学课程整合改革中,以遗传病为中心开展理论教学,并综合应用遗传实验、模拟遗传门诊、临床见习等教学方法,为培养理论知识、实践能力、个人素质全面发展的医学生奠定了坚实的基础。

孕妇血样采集后体外存放对血浆中胎儿游离DNA水平的影响

目的:探讨孕妇血样采集后体外存放过程中血浆游离DNA水平的影响因素。方法:采集孕妇血样,体外4℃存放6、36h后,实时定量PCR检测孕妇外周游离DNA水平,Annexin Ⅴ/PI双染色法流式分析血样白细胞死亡情况,速率法检测血浆乳酸脱氢酶(LDH)活性,单相酶扩散法测定血浆DNA酶活性。结果:血样体外存放36h后,血浆中β-globin基因的拷贝数较存放6h的样品显著增加,而SRY基因拷贝数明显减少;4℃存放条件下,妊娠晚期孕妇外周血中胎儿DNA占总DNA百分比从6h的(10.3±5.6)%下降到36h的(3.0±2.1)%,差异有统计学意义(P<0.05)。体外存放6h的血样中基本未检出死亡细胞,而存放36h的血样中分别检出了坏死和凋亡的白细胞;36h样品血浆中LDH活性较6h样品显著升高(P<0.05)。单相酶扩散法结果表明,血浆DNA酶在4℃时虽然活性显著减弱,但仍然保持降解DNA的能力。结论:血样采集后体外存放时间过长会导致血浆总游离DNA增多,而胎儿DNA减少,这种变化可能与血样体外存放过程中白细胞死亡和血浆DNA酶对胎儿DNA的降解作用有关;胎儿DNA抽提应在血样采集后尽早(6h内)进行。

原发性肝细胞癌患者血清N-糖组的表达分析

目的:通过对厚发性肝细胞癌(HCC)与正常人血清N-糖组图谱比较分析,寻找异常峰,为寻求新的HCC肿瘤标志物奠定基础。方法:收集乙型肝炎病毒(HBV)感染的HCC患者(n=100)及健康献血员(n=130)血清,采用基于DNA测序仪的毛细管电泳技术,检测每份标本中荧光标记的N-糖组分。结果:每份血清均得到具有11个峰的图谱,峰值经校正后量化,HCC组较对照组峰1、2、9、11升高,蜂6、8、10降低(P<0.05);且部分峰值变化与肿瘤标志物甲胎蛋白、HBV DNA载量、临床肝功能指标存在相关性。结论:HCC组血清N-糖组图谱较正常对照存在明显的差异,这种变化有望为临床疾病诊断提供依据。

孕妇外周血中胎儿游离DNA在产前诊断中的应用

孕妇外周血中胎儿游离DNA的发现,为无创性产前诊断开辟了一条新途径。检测孕妇血浆中特异的胎儿DNA序列已被用于胎儿性连锁疾病鉴定、RhD血型检查和多种单基因遗传病的产前诊断;游离DNA水平的变化还可被用作某些妊娠相关疾病如先兆子、早产和胎儿染色体疾病的临床诊断新指标。本文对母体外周血中胎儿游离DNA的生化特征及其临床应用研究,进行了总结和分析。

叶酸缺乏与肿瘤发生

叶酸又称蝶酰谷氨酸、维生素M,是蔬菜和水果的重要营养成分之一。叶酸的生物活性形式为5-甲基四氢叶酸,它是体内一碳单位代谢的载体,参与体内许多生物学过程,包括核酸和蛋白质的合成及其表观遗传修饰。表观遗传修饰在肿瘤的发生中起着很重要的作用。流行病学研究资料表明,叶酸缺乏可能与人类肿瘤的发生有关。叶酸的缺乏可导致基因组DNA的低甲基化及核苷酸内部特定位点的高甲基化从而引起肿瘤的发生。本文主要简述叶酸摄入不足与肿瘤发生之间的关系。

泛素-结核抗原融合基因DNA疫苗诱导小鼠较强的细胞免疫应答

目的:构建结核杆菌ESAT6抗原DNA疫苗(pE)和泛素基因与ESAT6抗原基因融合的DNA疫苗(pUE)。方法:分别将构建的DNA疫苗肌内注射免疫BALB/c雌性小鼠,检测小鼠的血清抗体(IgGI、gG1、IgG2a)、细胞因子(IFN-γI、L-4)和细胞毒性T淋巴细胞反应(CTL),比较融合基因DNA疫苗和单基因DNA疫苗诱生免疫应答的强度。结果:pE组小鼠血清IgG水平高于pUE组(P<0.01),但IgG2a/IgG1比值低于pUE组[(2.28±0.40)vs(3.87±0.60),P<0.05]。与pE组相比,pUE组小鼠IFN-γ分泌水平增高(P<0.01),IL-4分泌水平下降(P<0.01);pUE增强了CTL活性。提示融合基因DNA疫苗诱生的抗原特异的体液免疫应答不及单基因DNA疫苗,但其能诱导更强的细胞免疫应答。结论:泛素-ESAT6融合基因DNA疫苗对于防治结核病可能比单基因DNA疫苗更为有效。

庆大霉素诱导LLC-PK1细胞凋亡与p27^(Kip1)表达关系的研究

目的 观察庆大霉素对体外培养的肾小管上皮细胞凋亡的诱导作用 ;研究细胞周期调节蛋白 p2 7Kip1蛋白和mRNA表达在凋亡过程中的变化 ;并探讨细胞凋亡与p2 7Kip1之间的关系。方法 对体外培养的猪肾近端小管上皮细胞株 (LLC PK1细胞 )予以不同浓度的庆大霉素溶液分别作用 2 4～ 96h ,以MTT法测定庆大霉素对LLC PK1细胞增殖的抑制率 ,抽提细胞DNA进行琼脂糖凝胶电泳观察细胞凋亡条带 ,流式细胞术测定细胞凋亡率和细胞增殖动力学 ,WesternBlot法检测细胞内p2 7Kip1的蛋白表达 ,RT PCR法检测细胞p2 7Kip1mRNA表达的变化。结果 庆大霉素对LLC PK1细胞增殖有抑制作用 ,具诱导LLC PK1细胞凋亡的作用 ,凋亡率呈药物浓度和作用时间依赖性 ;庆大霉素致细胞周期停滞于G1期。p2 7Kip1蛋白在细胞内的表达随着干预的庆大霉素浓度增加而逐渐上调 ,蛋白水平与凋亡率之间呈正相关 ,其mRNA表达趋势与其蛋白表达一致。结论 庆大霉素诱导的LLC PK1细胞凋亡与细胞周期蛋白p2 7Kip1表达密切相关。

MiR-122稳定转染细胞系的建立及其脂代谢特征

目的:利用稳定表达人miR-122前体的表达载体,转染低表达miR-122的人肝癌细胞系HepG2细胞,获得过量表达miR-122的稳定转染细胞系,探讨miR-122对肝脏细胞脂代谢的影响及其机制。方法:对已构建完成的表达质粒pEZX-hsa-mir-122和对照质粒pEZX-mir-control进行酶切鉴定,对酶切正确的克隆进行DNA测序,测序正确的克隆应用脂质体试剂转染,绿色荧光蛋白表达监测转染效率,应用嘌呤霉素筛选稳定转染细胞系,实时定量PCR在RNA水平鉴定miR-122的表达,蛋白质印迹法从靶分子水平验证miR-122的抑制功能,尼罗红染色观察细胞内脂质。结果:pEZX-hsa-mir-122质粒成功转染HepG2细胞,质粒携带的miR-122前体序列整合到细胞基因组中,获得过量表达miR-122的HepG2细胞株,细胞内成熟体miR-122可抑制靶基因的翻译,细胞内脂质明显增加。结论:人miR-122前体序列可整合在HepG2细胞基因组中,过量表达miR-122的HepG2细胞出现脂质代谢异常。

膜联蛋白A7与IGFBP2结合抑制肝癌细胞增殖

目的分析膜联蛋白A7(ANXA7)与肝癌发生的相关性及筛选、鉴定ANXA7的相互作用分子,探讨ANXA7在肝癌发生中的机制。方法通过实时定量PCR法检测48对肝癌与癌旁组织以及多种肝和肝癌细胞株中ANXA7表达量的差异,并通过肝癌细胞ANXA7过表达及特异性干扰抑制分析其对肝癌细胞增殖的影响。采用免疫共沉淀法筛选与ANXA7发生结合的蛋白,并以点突变法分析蛋白质相互作用的关键位点;用蛋白免疫印迹法分析了ANXA7对肝癌相关的重要信号通路中ERK1/2磷酸化水平的影响。结果 ANXA7在肝癌组织与肝癌细胞中均呈下调表达。胰岛素样生长因子结合蛋白2(insulin-like growth factor binding protein 2,IGFBP2)能与ANXA7蛋白发生特异性结合,且IGFBP2上的RGD序列是两者结合的关键位点。肝癌细胞中ANXA7表达上调能抑制肿瘤细胞增殖(P<0.05),并能使IGFBP2介导的ERK1/2的磷酸化水平降低。下调ANXA7的表达可促进肝癌细胞增殖(P<0.01),磷酸化ERK1/2的水平升高。结论 ANXA7可能作为一种抑癌基因,通过介导IGFBP2对ERK1/2磷酸化水平的影响参与对肝癌增殖的调控。

结核杆菌抗原Ag85A基因的克隆及在大肠杆菌中的表达

目的:将结核分枝杆菌Ag85A抗原基因克隆并在大肠杆菌中表达。方法:用PCR方法从结核分枝杆菌基因组中扩增Ag85A抗原基因,然后将其插入到原核表达载体pGEX5T中,构建成pGEX5T-Ag85A重组质粒。经IPTG诱导使该基因在E.coli k802菌中表达,亲和层析法纯化蛋白,Western印迹法验证表达蛋白的抗原性。结果:扩增出了约0.9kb的单一条带,并成功地构建了pGEX5T-Ag85A重组子;经IPTG诱导后,Ag85A蛋白在k802菌中获得了表达,表达的蛋白条带大小约58000,与预期结果相符;纯化后获得了较单一的蛋白条带。蛋白纯化前后均可被结核病患者血清特异地识别。结论:成功地克隆了Ag85A抗原基因,并将其在大肠杆菌中进行了表达、纯化,为将其应用于结核病诊断和防治的研究奠定了基础。