抗震救灾部队官兵皮肤病发病率及其影响因素分析

目的:调查汶川映秀镇抗震救灾部队官兵皮肤病的发病情况,分析其影响因素,并对营区内杀虫措施效果进行评价。方法:2008年6月15日至6月20日,以映秀镇的两支抗震救灾部队为研究对象,回顾性调查部队官兵在震后1个月内的皮肤病发病情况、帐篷卫生条件和杀虫措施实施情况等内容,采用χ2检验确定差异显著性。结果:映秀镇抗震救灾部队官兵在震后1个月的皮肤病发病率为42.20%,其中虫咬性皮炎和毛囊炎的构成比分别为82.05%和15.38%;震后1、2、4周的皮肤病发病率水平明显高于震前水平(P<0.05),震后4周发病率的升高与在山上过夜相关;采用2.5%溴氰菊酯等杀虫剂对帐篷内外环境进行杀虫,皮肤病发病率由震后2周的26.61%降低至震后3周的0.92%(P<0.05)。结论:抗震救灾部队官兵在震后皮肤病的发病率明显升高,震后恶劣的卫生环境、蚊虫叮咬是官兵皮肤病的主要因素,定期杀虫能有效降低皮肤病的发病率。

肿瘤坏死因子家族新成员——TRAIL

肿瘤坏死因子相关的凋亡诱导配体（ＴＲＡＩＬ）或称凋亡素２配体（Ａｐｏ２ｌｉｇａｎｄ，Ａｐｏ２Ｌ），是ＴＮＦ家族的新成员．它是从表达序列标签库（ｅｘｐｒｅｓｓｅｄｓｅｑｕｅｎｃｅｄｔａｇ，ＥＳＴ）中寻找ＴＮＦ的同源分子时发现的．ＴＲＡＩＬ是一种分子质量为３２５ｋｕ的Ⅱ型跨膜糖蛋白，活性形式呈同源三聚体．ＴＲＡＩＬ和可溶性的ＴＲＡＩＬ强烈诱导肿瘤细胞株凋亡．新近发现的ＴＲＡＩＬ受体ＤＲ４和ＤＲ５及ＴＲＩＤ说明了ＴＲＡＩＬ与ＴＮＦ和Ｆａｓ／Ａｐｏ１配体的作用途径是不同的．随着对ＴＲＡＩＬ的受体及作用机理研究的深入，ＴＲＡＩＬ很可能成为新一代抗肿瘤制剂．

LPS、rh-TNFα刺激PBL诱导TRAIL表达的初步研究

选择人ＰＢＬ作为人ＴＲＡＩＬ基因的来源，抽提细胞在ＬＰＳ和ｒｈ－ＴＮＦα刺激２、１０、１８ｈ的总ＲＮＡ，通过ＲＴ－ＰＣＲ观察ＴＲＡＩＬ基因转录ｍＲＮＡ的水平，然后用ＰＣＲ扩增ＴＲＡＩＬ基因，并用免疫印迹法分析ＴＲＡＩＬｍＲＮＡ翻译蛋白的水平。结果发现：在ＬＰＳ和ｒｈ－ＴＮＦα刺激细胞并进一步诱导细胞凋亡可能与诱导表达ＴＲＡＩＬ有关。本实验得到了ＴＲＡＩＬ基因，为重组表达ＴＲＡＩＬ打下了基础。

原发性肝癌患者血清中庚型肝炎病毒基因的检测

用逆转录－聚合酶链反应法（ＰＴ－ＰＣＲ）检测了６７例原发性肝癌（ＰＬＣ）患者血清中的庚型肝炎病毒（ＨＧＶ）ＲＮＡ，以ＰＣＲ－双脱氧末端终止法分析了ＰＣＲ产物的核苷酸序列。结果显示，ＨＧＶＲＮＡ的检出率为１９．４％（１３／６７），其在ＨＢｓＡｇ阳性组和ＨＢｓＡｇ／抗ＨＣＶ阴性组中的阳性率分别是１２．２％（６／４９）和５０％（７／１４）；５’非编码区（５’－ＮＣＲ）扩增片段的核苷酸序列与美国株ＧＢＶ－Ｃ的同源性为９１．７％，提示在我国ＰＬＣ患者中存在ＨＧＶ感染。

丙肝病毒ns3基因转基因小鼠的产生

通过受精卵原核显微注射的途径，产生带有可诱导型丙肝病毒非结构蛋白３基因（ｎｏｎｓｔｒｕｃｔｕｒａｌ３ｇｅｎｅ）的重组载体的转基因小鼠。采用ＰＣＲ和基因组Ｓｏｕｔｈｅｒｎｂｌｏｔ杂交方法，在２１只新生鼠中筛选到３只建立者小鼠。其中２只与非转基因小鼠进行交配，分别得到８只和６只Ｆ１代小鼠。进而对其基因组ＤＮＡ进行检测，发现其中４只为转基因阳性个体。这些小鼠的获得，为ｎｓ３转基因品系的建立和ＮＳ３蛋白的生物学作用研究准备了条件。

LPS、TNFα刺激PBL诱导TRAIL表达的初步研究

近来的实验显示从 EST来源的 TRAIL在体外能特异性地诱导肿瘤细胞凋亡。我们选择人PBL作为人 TRAIL基因的来源 ,抽提细胞在 LPS和 rh- TNFα刺激 2、1 0、1 8h的总 RNA,通过RT- PCR观察 TRAIL基因转录 m RNA的水平 ,然后用 PCR扩增 TRAIL基因 ,并用免疫印迹法分析 TRAIL m RNA翻译蛋白的水平。结果发现 :在 LPS和 rh- TNFα的刺激下可以从 1 0 6 ～ 1 0 7个人 PBL中扩增出 TRAIL基因。提示 LPS和 rh- TNFα刺激细胞并进一步诱导细胞凋亡可能与诱导表达 TRAIL有关。本实验得到了 TRAIL基因 ,为重组表达 TRAIL打下了基础。

地震灾后常见的病原体与疫病防控

大地震后常发生疫病流行,灾后常流行的疫病主要是:肠道传染病(痢疾、伤寒和副伤寒、霍乱、手足口病、甲肝和戊肝等)、虫媒传染病(疟疾、黑热病、乙脑等)、动物源性疾病(鼠疫、肾综合征出血热、炭疽等)、土壤和疫水传播的疾病(破伤风、气性坏疽、钩端螺旋体病等)、呼吸道疾病(麻疹、风疹和流感等)以及食源性疾病(细菌或细菌毒素引起的食物中毒等)。本文就灾后疫病的主要病原体及所致疫病的综合防控原则与方法做一介绍。

二十一世纪热带军事医学

热带医学是根据地理空间位置界定的,它是集基础医学、临床医学和预防医学为一体,研究发生于热带或亚热带地区各种疾病的诊断、治疗、预防和控制的一门科学;而热带军事医学是热带医学与军事医学交叉的一门新兴前沿学科。随着我国及世界经济的发展、卫生条件的改善及人类健康水平的提高,以往的一些热带传染病逐渐得到控制。然而,目前愈发频繁的国际交流、过度生产活动引起的全球气候剧变等一系列因素将导致世界范围内疾病分布发生改变,并对军队的战略方针及战术方式等产生深远的影响。本文旨在对热带军事医学的研究概况作一回顾与展望。

IgA亲和体随机组合噬菌体文库的构建和体外分子进化

目的构建IgA亲和体随机组合文库并进行体外分子进化,研究IgA亲和体分子结构与功能的关系。方法基因合成两个IgA亲和体片段。3′端引入3个随机连接肽序列随机连接,克隆于噬菌粒展示载体pCANTAB5S,构建噬菌体展示随机组合分子文库。以人IgA为靶分子对该文库进行4轮亲和筛选。制备阳性筛选克隆的单克隆噬菌体,用ELISA鉴定IgA结合活性。结果成功构建噬菌体展示IgA亲和体随机组合分子文库,库容量为3.4×107,滴度为1.6×1012TU/L,阳性克隆占79%以上,序列分析IgA亲和体随机连接,随机连接肽序列呈随机分布。在人IgA分子诱导的分子进化过程中,展示多个IgA亲和体串联体的噬菌体比例明显增加,获得3种新型IgA亲和体组合分子结构形式:IgA亲和体二联体、三联体和四联体。ELISA结合实验表明IgA亲和体三联体和四联体的IgA结合能力远大于单体和二联体。结论通过构建IgA亲和体噬菌体展示随机组合文库和体外分子进化的方法,获得多种新型组合分子,其中IgA亲和体三联体和四联体的IgA结合能力明显增加,提示通过有效的分子进化成功地获得了高亲和力的IgA结合分子。

四川茂县土门乡低血压现况调查及影响因素分析

目的:了解茂县农村居民低血压患病情况,探讨低血压的危险因素。方法:利用在茂县抽样调查的人群资料,进行低血压的横断面研究。10～14岁儿童低血压标准为:收缩压(SBP)≤80mmHg(1mmHg=0.133kPa)或者舒张压(DBP)≤50mmHg,15岁以上低血压标准为:SBP≤90mmHg或者DBP≤60mmHg。结果:男性和女性的低血压患病率分别为8.2%和12.2%。从低年龄组到高年龄组(10岁～、20岁～、40岁～、60岁～),低血压的患病率分别为17.3%、12.3%、4.8%、5.5%。Logistic回归分析显示,年龄(OR=0.566,95%CI0.406～0.789)、性别(OR=1.999,95%CI1.171～3.411)和民族(OR=6.967,95%CI2.322～20.905)与低血压状态相关。结论:低年龄组人群是低血压的高发人群,女性和非羌族人群在当地可能是易患人群,这为进一步探索低血压的病因提供了线索。

抗人CD38单克隆抗体抗原识别表位的初步研究

目的:确定抗人CD38分子单克隆抗体(mAb)1C6识别的抗原表位所在区域。方法:分别构建缺失人CD38不同表位的重组质粒,用IPTG诱导表达融合蛋白。对表达产物进行SDS-PAGE蛋白电泳及Westernblot分析。结果:1C6不能识别缺失第220～241位氨基酸的D4片段,而对其他的缺失突变体均可识别。结论:mAb1C6抗体识别的抗原表位位于CD38分子胞外段第220～241位氨基酸。

人胚胎原始生殖细胞的定位与体外分离培养的初步研究

目的：对不同发育阶段的人胚胎原始生殖细胞进行定位并比较其体外培养的差异，探讨不同分离方法对人胚胎生殖系细胞体外培养的影响。方法：取4～8周发育阶段的人胚胎，利用组织化学法通过检测原始生殖细胞内碱性磷酸酶及其定位。体外分离人胚胎生殖嵴和肠系膜组织培养，第一次传代后，用碱性磷酸酶标记。

B族Ⅰ型清道夫受体在丙型肝炎病毒入侵细胞中的作用

丙型肝炎病毒(hepatitis C virus,HCV)入侵宿主细胞是由多种受体分子介导的多步骤过程,其中B族Ⅰ型清道夫受体(SR-BⅠ/SCARB1)被认为是最先与HCV作用的受体。SR-BⅠ能够与HCV包膜糖蛋白E2相结合,在此过程中位于E2蛋白氨基末端的高变区1(hypervariable region 1,HVR1)起关键作用。SR-BⅠ与HCV的相互作用不仅能够介导HCV的细胞入侵,还能降低抗体对HCV的中和作用,有助于HCV的免疫逃避。因此,深入研究SR-BⅠ在HCV入侵细胞过程中的作用机制,有望发现在HCV感染的初始环节能够高效地阻断HCV入侵细胞的靶分子,从而预防和治疗HCV的感染。本文就SR-BⅠ的生物学特性、SR-BⅠ与HCV的相互作用对病毒入侵细胞的影响及机制等方面的最新进展作一综述。

丙型肝炎病毒丝氨酸蛋白酶的研究进展

丙型肝炎病毒(HCV)非结构3区(NS3)编码的丝氨酸蛋白酶是HCV复制过程中的重要蛋白酶,负责对NS3、NS4及N55进行加工。NS4a是HCV丝氨酸蛋白酶作用的辅因子,并具有多种活性。HCV丝氨酸蛋白酶有相对特异的底物,其活性不能被一般的丝氨酸蛋白酶抑制剂所抑制。丝氨酸蛋白酶是抗HCV药物设计的靶目标之一,对其结构与功能的研究有着重要意义。

血管生长抑制素的研究进展

血管生成抑制剂的研究是目前肿瘤研究的热点。其中 ,血管生长抑制素在控制肿瘤的生长和转移过程中发挥重要作用 ,它是人体内源蛋白的一部分 ,具有生理毒性小、不会产生耐药性等特点 ,有较好的抗癌前景。最近 ,世界各国对血管生长抑制素的研究已全面展开 ,本文就血管生长抑制素的产生、结构。

HIV-1 HXB2株蛋白酶的原核表达、纯化及其Gag蛋白CAP2NC的切割活性分析

目的:原核表达、纯化HIV-1型HXB2株蛋白酶(protease,PR),用于对HIV-1 Gag P2/NC蛋白酶切割位点序列随机突变的噬菌体展示文库的切割筛选及构建新的蛋白酶抑制剂(protease inhibitor,PI)类药物体外筛选模型。方法:根据HIV-1 HXB2株PR DNA序列设计引物,在PR序列上游添加自切割位点MGTVSFNF 8个氨基酸编码获得PR107 DNA编码序列,将PR107 DNA克隆至原核表达载体pET-32a,序列测定后转化大肠杆菌BL21 DE3进行诱导表达。表达产物经用Ni-NTA亲和柱纯化,经复性后,进行靶蛋白CAP2NC切割试验,SDS-PAGE检测切割结果。结果:成功合成了使用大肠杆菌偏好密码子的HIV-1 PRl07的DNA编码序列,序列测定显示其编码氨基酸序列与原始序列完全一致;成功构建了HIV-1 PR原核表达质粒pETa2a—PR107,转化大肠杆菌BL21 DE3经IPTG诱导后,表达出相对分子质量为30 000的HIV-1 PR融合蛋白,纯化的目的蛋白浓度为2.54 mg/ml;纯化蛋白经复性后具有对底物蛋白CAP2NC的切割活性,该作用能被PI药物抑制。结论:成功构建大肠杆菌偏好密码子带自切割位点的HIV-1 PR原核表达载体pET32a—PR107,在大肠杆菌中表达,经纯化复性获得了具有切割活性的HIV-1 PR融合蛋白。

含CpG免疫刺激序列的质粒增强HBsAg诱导的免疫应答

目的探讨以含有多拷贝CpG寡脱氧核苷酸(CpG ODN)的质粒作为治疗性乙肝疫苗佐剂的可行性。方法构建含有6个拷贝D型CpG ODN的质粒pKO-CG6,将该质粒以及载体pKO分别刺激健康人及HBV感染者的外周血单核细胞(PBMC),检测PBMC的增殖及分泌的细胞因子IFN-γ、IL-12,进一步将重组HBsAg分别联合这两种质粒免疫小鼠,检测小鼠的细胞和体液免疫应答。结果质粒pKO-CG6与载体pKO在体外均能有效激活健康人及HBV感染者PBMC增殖反应,并促进IFN-γ、IL-12的产生,其中pKO-CG6的免疫刺激活性强于载体pKO。小鼠体内试验表明,虽然载体pKO也具有免疫佐剂作用,但pKO-CG6更能显著增强HBsAg诱导的免疫应答,尤其是细胞免疫应答。结论含有多拷贝D型CpG ODN的质粒能有效激活HBV感染者的PBMC,并增强HBsAg在小鼠体内的免疫原性。

丙型肝炎患者血清中丙型肝炎病毒交叉中和抗体的检测

目的分析HCV感染者血清中是否存在交叉反应性中和抗体。方法以分泌表达HCV包膜E2蛋白真核表达质粒转染的293T细胞培养上清液中的HCVE2蛋白作为检测抗原,建立检测HCVE2抗体的ELISA方法,检测32份HCV抗体阳性的慢性丙肝患者血清,然后用免疫荧光分析血清与HCV全长包膜蛋白表达质粒转染的293T细胞的结合反应,再用5株HCV假病毒(HCVpp)及两株细胞培养产生的HCV(HCVcc)为模型分析血清的病毒中和活性。结果 32份HCV抗体阳性血清中,26份血清可检测出E2抗体,阳性率81.3%。其中HCV RNA阳性的12份血清均为E2抗体阳性,E2抗体水平与HCV RNA水平负相关。HCVE2抗体阳性血清对5株HCVpp以及两株HCVcc的感染性均有不同程度的中和作用,中和活性与E2抗体水平相平行。结论 HCV感染可诱导保护性体液免疫应答,丙肝患者血清中存在交叉中和抗体,提示开发能诱导广泛交叉中和抗体的丙肝疫苗具有可行性。

细胞极性与丙型肝炎病毒受体介导的细胞入侵

丙型肝炎病毒(hepatitis C virus,HCV)的细胞入侵过程由多因素介导,包括多种受体及触发病毒内吞入胞的细胞因素。新发现的受体分子occludin已被证明与SR-B1、CD81、claudin同介导HCV细胞入侵,occludin和claudin同为组成细胞间紧密连接的整合蛋白,引起了研究者们对紧密连接及细胞极性对HCV入侵影响的广泛关注。对细胞极性及紧密连接的研究,有助于发现新的HCV治疗药物的作用靶点,从而干预其细胞入侵及细胞间蔓延。本文从肝细胞极性特点、紧密连接及主要整合蛋白claudin和occludin、极性细胞模型及与HCV入侵的关系等几个方面综述了近来的最新进展。