来氟米特对HaCaT细胞分泌α-肿瘤坏死因子、白介素-6和8的影响

目的:研究来氟米特活性代谢产物A771726对角质形成细胞分泌α-肿瘤坏死因子TNF-α,白介素IL-6及IL-8的影响。方法:以体外培养的角质形成细胞株HaCaT为对象,以不同浓度A771726处理正常及TNF-α刺激后细胞,用生物活性法及ELISA方法测定培养上清中TNF-α、IL-6及IL-8的分泌变化情况。结果:正常情况下,HaCaT细胞可自发分泌TNF-α、IL-6和IL-8;药物作用后分泌水平下降;TNF-α诱导下,HaCaT细胞IL-6及IL-8表达量均增加,加入来氟米特后则表达量均受到抑制。结论:来氟米特可抑制角质形成细胞分泌TNF-α、IL-6及IL-8。

人破骨细胞形成抑制因子活性域片段在大肠杆菌中的融合表达

目的 在大肠杆菌中高效融合表达人破骨细胞形成抑制因子 (Osteoclastogenesisinhibitoryfactor,OCIF)活性域片段。方法 从中国人正常肝细胞系LO2中提取总RNA ,利用RT PCR得到OCIF活性域编码基因cDNA ,将其与pMD18 T连接 ,转化大肠杆菌K80 2 ,筛选得到阳性重组克隆载体pMD18 OCIFAD ,经双酶切得到OCIF活性域编码片段 ,将其插入pMAL c2载体中 ,转化大肠杆菌TB1。筛选得到阳性重组表达子后进行诱导表达。结果 所获得的OCIF活性结构域编码序列片段经测序与GenBank报道的完全一致。所表达的产物经SDS PAGE分析可见在相对分子质量 6 0 0 0 0处出现一条特殊条带 ,与预期的相对分子质量一致。Westernblot证实了表达产物能与抗人OCIF单抗发生特异性反应。结论 已成功地获得了人OCIF活性结构域编码片段的克隆 ,并实现了其在大肠杆菌中的融合表达。表达产物对体外培养破骨细胞的骨吸收功能有明显的抑制作用。