大鼠心肺复苏后神经细胞线粒体通透性转换孔的变化

目的研究大鼠心肺复苏后神经细胞线粒体通透性转换孔(MPTP)的变化规律。方法建立窒息联合冰氯化钾致大鼠心搏骤停、心肺复苏(CA/CPR)的动物模型,断头后提纯大脑皮层组织内线粒体,采用分光光度法测定线粒体MPTP在不同时相的开放程度。结果心肺复苏后大鼠神经细胞线粒体功能明显受损,恢复自主循环(ROSC)后神经细胞MPTP持续处于开放状态,开放程度具有时间依赖性,具体表现为在ROSC后6h以内开放程度保持低水平,6h以后开始迅速大量开放,直至12h开放程度达到最大,但并没有一直维持这一水平,而是在ROSC后24h开放程度略有缩小,表明线粒体开始收缩,至48h开放程度再次加大,72hMPTP明显缩小,但未达到正常水平。结论CA/CPR后大鼠线粒体MPTP出现明显规律性改变,复苏后12h以内可能是改善复苏后脑功能的最佳治疗窗。

心肺复苏后大鼠脑线粒体通透性转换孔变化在细胞能量代谢障碍中的作用及机制

目的研究大鼠心跳骤停/心肺复苏后神经细胞线粒体通透性转换孔的变化在能量代谢障碍中的作用及可能机制。方法首先建立窒息联合冰氯化钾致大鼠心跳骤停、心肺复苏的动物模型,断头后提纯大脑皮质组织内线粒体,采用分光光度法测定线粒体MPTP在不同时相的开放程度,应用高效液相法测定脑细胞ATP、ADP和AMP含量。结果心跳骤停/心肺复苏后大鼠神经细胞线粒体功能明显受损,ROSC后神经细胞MPTP持续处于开放状态,开放程度并不是瞬间增至最大,而是具有时间依赖性。ROSC后6h内神经细胞MPTP开放程度保持低水平,6h以后开始迅速大量开放,12h开放程度达到最大,24h开放程度略有缩小,表明线粒体开始收缩,至48h开放程度再次加大,72h又明显缩小,但未达到正常水平(P<0.05或P<0.01)。ROSC后各组ATP含量较对照组均下降(P<0.05或P<0.01),72h较对照组略有升高,但无统计学意义,各组比较线粒体合成ATP能力在CA/CPR并ROSC后呈双相变化即在ROSC后3h和24h分别出现两个合成低谷。结论 CPR后MPTP开放是加重神经细胞能量代谢障碍的主要原因,线粒体能量代谢和氧化磷酸化功能严重受损,导致ATP产生短时内骤降;促使了MPTP的进一步开放。

心肺复苏后大鼠神经细胞Caspase-3表达与细胞凋亡关系的实验研究

目的探讨心肺复苏后大鼠脑组织Caspase-3表达与细胞凋亡的关系。方法建立窒息联合冰氯化钾致大鼠心脏骤停／心肺复苏（CA／CPR）的动物模型，于各时相点断头留取脑组织，采用免疫组化的方法观察CPR后脑组织Caspase-3蛋白的表达，TUNEL检测神经细胞凋亡。结果对照组脑组织内仅有少量TUNEL阳性细胞；ROSC后3h出现表达阳性细胞，ROSC后6h表达开始增多，ROSC后12h进一步上升（P〈0．05），其后各组均处于高水平表达。Caspase-3表达均在ROSC后24h显著增加，直至ROSC后72h，与对照组比较差异均有统计学意义（P〈0．01），Speamaa等级相关检验Caspase-3表达与细胞凋亡明显相关（r=0．909）。结论CA／CPR后大鼠脑线粒体Caspase-3蛋白高表达可能是细胞凋亡增加的原因之一。