STAT3反义寡核苷酸对人肺腺癌放射治疗的增效作用

目的:评价STAT3反义寡核苷酸对人肺腺癌细胞A549增殖抑制作用及辐射增敏作用,探讨新的肺癌分子靶向治疗药物。方法:2003-10/2004-11于解放军第二军医大学放射医学教研室,应用阳离子脂质体介导STAT3反义寡核苷酸转染人肺腺癌A549细胞,westernblot检测STAT3总蛋白和p-STAT3蛋白的表达;MTT法检测细胞增殖状态;流式细胞术检测细胞周期;用克隆形成分析和SF2研究人肺腺癌细胞A549辐射敏感性的变化。结果:STAT3反义寡核苷酸转染人肺腺癌A549后STAT3蛋白的表达和磷酸化水平下降,细胞增殖受抑制,出现G1阻滞;照射后12d,反义寡核苷酸组测定SF2值是(46.78%±3.25%),较对照组(61.52%±2.74%)明显降低(P<0.01)。结论:STAT3反义寡核苷酸可以抑制STAT3蛋白表达和细胞增殖,对人肺腺癌细胞A549有辐射增敏作用。

RNA干扰抑制胰腺癌细胞DNA-PKcs基因表达对放射敏感性的影响

目的探讨稳定表达的siRNA抑制DNA-PKcs基因表达对胰腺癌细胞BxPC-3放射敏感性的影响。方法以人胰腺癌细胞BxPC-3为研究对象,将预先设计的siRNA与质粒连接。构建质粒与阴性对照质粒分别转化大肠杆菌,经克隆、扩增、纯化后转染BxPC-3细胞,潮霉素筛选,以半定量Westernblot检测靶蛋白表达变化,用细胞克隆计数实验检测放射敏感性变化。结果成功构建以DNA-PKcs基因mRNA为靶序列的pSilencer2.1质粒,经潮霉素筛选出稳定的整合目的质粒的BxPC-3细胞,DNA-PKcs蛋白被抑制最大达到83%,实验组D0、Dq及SF2(1.284±0.017、4.006±0.023和0.567±0.045)均明显低于阴性对照组(1.458±0.026、4.840±0.019和0.833±0.076)(P<0.001)。SER为1.47。结论针对DNA-PKcs基因的siRNA表达载体稳定转染人胰腺癌细胞BxPC-3,能够引发DNA-PKcs表达抑制,进而产生放射增敏作用。

STAT3反义核酸对A549细胞增殖和凋亡的影响

背景与目的:研究表明,STAT3(signal transducer and activator of transcription 3)蛋白在多种肿瘤组织或细胞中高表达,STAT3蛋白可能参与了肿瘤的发生与发展。本研究拟设计筛选出针对STAT3的高效反义核酸,研究STAT3反义核酸对人肺腺癌细胞A549增殖及凋亡的影响。方法:用RNAStructure4.2软件和STAT3 mRNA全长序列设计出10组反义STAT3序列,并分别转染A549细胞;Cell Count Kit(CCK-8)检测细胞增殖变化,倒置相差显微镜观察细胞增殖和凋亡的变化;Hoechst33258染色观察细胞凋亡形态变化,AnnexinⅤ/PI复染检测细胞早期凋亡,Western blot检测STAT3蛋白表达和磷酸化,及其下游Bcl-xL蛋白表达的变化,用碘化丙啶(propidium iodide,PI)单染结合流式细胞仪检测细胞周期变化。结果:设计出的10条反义序列对A549细胞增殖有明显抑制作用,AS10对细胞的增殖抑制率达到75.46%;反义核酸浓度越高,对A549细胞的增殖抑制效应越强(P<0.01)。反义转染后,胞膜皱缩和核固缩形态的典型细胞凋亡明显增多,AnnexinV/PI双标流式细胞仪检测发现,反义转染后能够促进细胞的早期凋亡(P<0.01),早期凋亡率达11.51%;而正常对照组细胞的早期凋亡率为5.18%。STAT3蛋白及其下游Bcl-xL蛋白表达变化明显下降,STAT3蛋白磷酸化水平也降低。PI单染结合流式细胞仪检测发现,正常对照组的S期细胞为44.47%,G1期的细胞则为48.49%;反义转染后的S期细胞明显减少(23.70%),G1期细胞明显增多(63.96%)。结论:通过计算机辅助设计筛选得到的高效STAT3反义序列对A549细胞有强烈的增殖抑制作用,能有效促进A549细胞的凋亡,其机理与反义STAT3抑制STAT3蛋白表达、降低磷酸化水平、下调Bcl-xL基因以及使细胞发生G1期阻滞有关。

羧酸富勒烯C_3的合成及其保护辐射损伤效应

通过Bingle环加成反应,利用富勒烯与丙二酸二乙酯催化合成羧酸富勒烯C3,经1H-NMR,13C-NMR以及MS-ESI确认其结构和分子量。通过芬顿体系检测了C3清除自由基的能力。利用CCK-8法和Annexin-V/PI染色和流式细胞分析法,分别检测C3对γ射线照射后AHH-1、HIEC细胞存活率,细胞凋亡和细胞周期变化的影响。结果表明,C3具有良好的清除自由基的能力,当芬顿体系中C3终浓度为1000mg/L时,清除效率高达93%左右。对1-12Gyγ射线照射的细胞,C3具有良好的辐射保护作用,表现为照后细胞存活率明显升高,细胞凋亡率显著降低;且对于较高剂量的照射,辐射防护效果较好。说明C3对γ射线照射的细胞具有较好的辐射防护作用,其机理可能主要与其清除自由基的作用有关。

紫外光照射下富勒醇对细胞的防护作用

为了解紫外辐射下富勒烯衍生物富勒醇对细胞的生物效应,利用四唑盐比色实验(MTT)法研究了富勒醇对紫外辐照细胞的存活率影响,紫外辐照细胞时富勒醇对细胞超氧化物岐化酶(SOD)和氧化产物丙二醛(MDA)的影响,同时比较了C60?PVP对紫外辐照细胞的辐射生物效应。结果表明,富勒醇能够有效的防护紫外辐射对细胞造成的损伤,其机理可能是富勒醇能够吸收紫外辐照产生的自由基,使细胞膜不被紫外辐照损伤。

血卟啉单乙醚铜钠盐对^(60)Co辐射及正常小鼠造血系统的作用

目的探讨血卟啉单乙醚铜钠盐（HECu）对60Co辐射小鼠骨髓造血系统的影响，以期寻找再生障碍性贫血治疗药物。方法将昆明种正常小鼠，用60Coγ射线7.0Gy一次性全身照射为动物模型，通过对外周血血象的观察及骨髓造血干细胞的检测，研究HECu对60Co辐射小鼠及正常小鼠的血液系统的影响。结果HECu能升高60Co辐射小鼠的外周血白细胞计数，促进60Co辐射小鼠和正常小鼠的造血干细胞向红系转化。结论HECu对60Co辐射及正常小鼠的造血促进作用优于促粒细胞生长因子（G-CSF），以HECu为先导化合物值得进一步研究。

甘氨双唑钠冻干注射剂的制备及其含量测定

甘氨双唑钠冻干注射剂的制备及其含量测定钱方朱勤１宣建钢２孟祥顺１肖振宇３（上海２００００３第二军医大学长征医院药材科；１上海２００４３３第二军医大学放射医学教研室；２上海２００４３３上海医药工业研究院；３第二军医大学药学院９４届实习生）甘氨双唑钠为新...

富勒烯衍生物的生物学应用

富勒烯家族,尤其C60,其结构独特,因此具备许多独特的性质。对其研究涉及物理、化学、生物学、材料科学等各个领域。该文重点介绍了富勒烯及其衍生物的生物学利用。

电磁波在含各向异性材料和磁光材料一维光子晶体中的传输

为研究在含各向异性材料和磁光材料一维光子晶体电磁波传输极化态的变化,把磁光材料作为缺陷层,设计一维光子晶体。利用4×4传输矩阵算法,计算该结构的传输谱。发现在特定的共振波长,输入线性极化电磁波同样输出线性极化电磁波,但输出极化的方向与输入极化方向不同。输出极化的方向决定于输入极化方向,既可以随输入极化同方向变化,也可以反方向变化。研究结果为实现光控制光提供了新的手段。

富勒烯赖氨酸衍生物对AHH-1细胞防护效应研究

本文研究了富勒烯赖氨酸衍生物C60-Lys对AHH-1细胞的辐射防护作用,并对其防护机理进行了初步研究。发现800mg/LC60-lys能提高辐照后AHH-1细胞存活率,在8Gy照射剂量时,给药组与对照组AHH-1细胞存活率分别为64.6%和41.3%。荧光凋亡实验发现,当C60-lys浓度为1200mg/L时,凋亡率为16.3%,这明显低于单纯辐照组的39.2%。在800mg/LC60-lys和4Gy辐照剂量时,给药时间对细胞存活率有显著影响,辐照前给药,AHH-1细胞平均存活率是85.6%,而辐照后给药则是64.1%。C60-lys降低4Gy辐射引起的AHH-1细胞的G2期阻滞及辐射对AHH-1细胞DNA损伤,尤其是减少8-羟基-2'脱氧鸟嘌呤核苷(8-OHdG)含量。

辛伐他汀对人脐静脉内皮细胞血管内皮生长因子表达的影响

采用逆转录聚合酶链反应和WesternBlot方法 ,观察促炎症因子肿瘤坏死因子α和白细胞介素 1β对体外培养人脐静脉内皮细胞血管内皮生长因子及其受体表达的影响 ,并以辛伐他汀干预 ,观察其对上述过程的影响。结果发现 ,肿瘤坏死因子α和白细胞介素 1β显著促进人脐静脉内皮细胞中血管内皮生长因子及其受体的表达 ,在不同水平辛伐他汀对促炎症因子的上述作用具有一定的抑制效应 ,由此推断辛伐他汀可能具有一定的抗炎症反应及抗动脉粥样硬化的作用。

新生隐球菌共孵育后血管内皮细胞的蛋白质组学研究

目的研究新生隐球菌共孵育后血管内皮细胞与正常细胞的差异蛋白质谱,推测蛋白质表达改变在孵育过程中的作用。方法利用二维凝胶电泳获得新生隐球菌孵育后血管内皮细胞与正常细胞的差异表达蛋白点,对部分差异蛋白点进行质谱鉴定分析,并以实时荧光定量PCR对其mRNA表达进行定量比较。结果Peroxiredoxin Ⅰ及Calpactin Ⅰ light chain等13个蛋白的表达水平发生明显改变,Peroxiredoxin Ⅰ及Calpactin Ⅰlight chain的mRNA表达明显改变,其mRNA含量的改变趋势与相应的蛋白质的变化趋势相同。结论Peroxiredoxin Ⅰ及Calpactin Ⅰ light chain等蛋白表达量的改变可能与新生隐球菌侵袭血管内皮细胞屏障有关。

利用蛋白质组学技术筛选隐球菌作用血管内皮细胞后差异表达蛋白

目的筛选新生隐球菌孵育后血管内皮细胞与正常细胞的差异蛋白质谱。方法利用二维凝胶电泳获得新生隐球菌孵育后血管内皮细胞与正常细胞差异表达蛋白质点,并对部分差异蛋白点进行质谱鉴定分析。结果Peroxiredoxin1及Calpactin I light chain等13个蛋白的表达水平在两组细胞间发生明显改变。结论Peroxiredoxin1及Calpactin I lightchain等蛋白可能参与了新生隐球菌对血管内皮细胞屏障的侵袭过程。

电离辐射生物剂量研究现状

生物剂量计有物理剂量计不可替代的优势,其重要性和科学意义已为世界各国放射生物学家所重视。合理正确使用生物剂量计应建立在对其特性充分了解的基础上。本文简述近年来生物剂量计研究和应用的现状。

新的与辐射诱导恶性转化相关全长基因Lcrp369克隆及生物信息学分析

背景与目的:辐射诱导细胞恶性转化过程中涉及到众多基因,其中包括大量未知的新基因,克隆新的辐射诱导相关全长基因,从基因水平认识细胞恶性转化过程中生长、分化、再生和癌变的分子机理,对于研究辐射致癌的发生、发展规律具有重要意义。对此,本文旨在克隆新的与辐射致癌相关的全长基因。方法:应用SMARTRACE方法扩增T54EST片段的全长序列,测序后进行拼接及RT-PCR验证。并应用生物信息学方法对得到的新的mRNA序列进行生物信息学分析。结果:克隆了一条新的全长基因Lcrp369。经对其进行初步的生物信息学分析发现该基因是位于染色体14p22号臂上的一条功能尚不清楚的基因。其编码区域由7个外显子和6个内含子组成,mRNA全长1 038 bp,编码一244个氨基酸的蛋白,合成的蛋白位于细胞核内,具有DNA结合位点及N-糖基化位点、依赖于cAMP/cGMP的蛋白激酶磷酸化作用位点、酪蛋白激酶磷酸化位点。该蛋白二级结构推测为含有α螺旋结构为主的蛋白,其分子量为28 000,等电点为6.19。数字化组织表达谱系分析结果发现,该基因表达广泛,可在多个组织中表达及在多种肿瘤中表达。该基因全长已经登录到GENBANK上,ID号DQ525179。结论:成功地利用SMART RACE技术克隆了一条新的全长基因Lcrp369,生物信息学分析结果提示其与辐射致癌有关,其具体作用及功能尚有待进一步的实验学研究。

P44/42MAPK在辐射诱发会厌癌中的表达

探讨P44/42MAPK在X射线诱发会厌癌的表达及其作用。从X射线诱发的会厌癌中得到肿瘤组织及相应的癌旁正常组织,分离总蛋白及mRNA,应用蛋白印迹法分析两组P44/42MAPK的表达及磷酸化水平,应用逆转录-聚合酶链反应(Reversetranscription-polymerasechainreaction,RT?PCR)半定量方法得到两组P42MAPK的mRNA变化。结果表明,会厌癌P44/42MAPK的蛋白表达及磷酸化水平均显著高于癌旁正常组织,P42MAPK的mRNA在会厌癌中的表达也明显升高。结果显示,P44/42MAPK在X射线诱发会厌癌有异常表达且磷酸化水平显著增高,此信号转导途径可能在X射线诱发会厌癌发挥一定的作用。

恶性B细胞淋巴瘤CKIs抑制途径的改变

G1/S限制位点是控制细胞生长决定细胞命运的关键和限速阶段。它主要受到周期蛋白激酶抑制剂(CKIs)的负性调控。失活的CKIs可以看成是高度恶性转移淋巴瘤的标志物 ,CKIs途径失活的肿瘤细胞增殖快 ,出现药物抗性和转移。细胞周期G1/S转换主要受p16 INK4 Rb ,p14 ARF p5 3,p2 7KIP1三条与CKIs有关的途径抑制 。