板层角膜切除术联合那他霉素治疗真菌性角膜溃疡的临床及病理研究

目的:研究板层角膜切除术联合那他霉素治疗真菌性角膜溃疡的临床疗效及组织病理学基础。方法:选取2009-12/2011-11真菌性角膜溃疡患者32例32眼,角膜病变未累及内皮层,行角膜板层切除联合那他霉素滴眼治疗,观察记录治疗前后视力、角膜情况、病程、并发症及致病菌种类,对切除组织行组织病理学检查。结果:治疗前视力≤0.05者20眼,～0.3者11眼,>0.3者1眼。板层切除术后联合那他霉素治疗痊愈28例(87.5%),治愈时间7～32(平均13.2±8.5)d,痊愈时视力≤0.05者5眼,～0.3者8眼,>0.3者15眼。病情控制不良改行角膜移植术者4例。31例真菌培养阳性(96.9%),其中镰刀菌18例,曲霉菌属8例,链格孢霉3例,未知菌属2例。病理学检查显示溃疡灶中有多量中性粒细胞浸润,过碘酸-希夫(PAS)染色显示角膜组织中菌丝多数位于角膜浅层,并呈与板层胶原纤维平行方向生长,但也有少数呈斜形或垂直生长方式,侵及切除组织全层。不同菌属之间菌丝在角膜中生长方式无明显差异。结论:对于病变未累及全层的真菌性角膜溃疡患者,及时行板层角膜切除术可大大提高那他霉素药物治疗有效性,缩短病程,恢复视力。

SBK与LASIK治疗高度近视眼患者的临床对比研究

目的比较前弹力层下准分子激光原位角膜磨镶术(sub-Bowman keratomileusis,SBK)和传统准分子激光原位角膜磨镶术(laser in situ keratomileusis,LASIK)治疗高度近视眼患者的有效性和安全性。方法随机使用SBK和LASIK2种方法治疗近视度数大于-6.00D的近视眼患者95例(95眼),术中测量角膜基质床厚度及角膜瓣厚度并进行比较,术后1个月、3个月、6个月、12个月检查并记录裸眼视力、屈光状态、角膜情况等并进行比较。结果 SBK组角膜瓣平均厚度为(108.23±11.63)μm,LASIK组为(143.89±21.65)μm,2组比较差异有显著统计学意义(t=-13.321,P=0.000)。术后1个月、3个月、6个月、12个月,裸眼视力≥1.0者SBK组分别占95.9%、93.9%、91.8%和91.8%,LASIK组分别占91.3%、93.5%、87.0%和84.8%;屈光度在±0.50D之间者SBK组分别占69.4%、73.5%、79.6%和83.7%,LASIK组分别占63.0%、67.4%、69.6%和67.4%,差异均无统计学意义(χ2=0.428、0.422、1.263、3.428,P=0.513、0.516、0.261、0.064)。SBK组1例出现轻微角膜上皮下混浊,LASIK组2例出现屈光回退。SBK组泪膜破裂时间术后3个月恢复至术前水平,LASIK组6个月恢复至术前水平。SBK组角膜基质床厚度平均为(323.27±20.57)μm,LASIK组平均为(295.74±14.58)μm,2组比较差异有统计学意义(t=7.480,P=0.038)。术后12个月时角膜后表面Diff值SBK组为(0.037±0.011)mm,LASIK组为(0.050±0.012)mm,2组比较差异无统计学意义(t=-5.242,P=0.390)。结论 SBK组治疗高度近视的安全性和有效性与LASIK组相同,SBK组术后早期的裸眼视力及12个月时屈光状态优于LASIK组,而治疗后保留的角膜基质更多,干眼恢复更快,生物力学稳定性更好。

眼球筋膜囊修补联合结膜瓣覆盖治疗角膜溃疡穿孔

目的:探讨眼球筋膜囊修补联合结膜瓣覆盖治疗角膜溃疡穿孔的治疗效果。方法:对18例18眼不同病因导致的角膜溃疡穿孔,应用自体眼球筋膜囊对角膜穿孔区进行修补,并行结膜瓣覆盖手术治疗。术后观察溃疡愈合情况、外露的角膜情况、术后炎症反应、前房形成情况及并发症如继发青光眼、虹膜粘连等。结果:溃疡愈合17例(94%),成功保住眼球,并且角膜外露部分透明度良好。所有病例术后均未发生严重感染,前房形成。2例(11%)术后继发青光眼,经局部药物治疗眼压控制在正常范围。7例(39%)虹膜粘连,1例(6%)角膜再次穿孔且继发角膜葡萄肿行球内容物剜除术。结论:在供体角膜缺乏时,眼球筋膜囊修补联合结膜瓣覆盖治疗角膜溃疡安全有效,是一种实用的治疗方法。

甘油长期冷冻保存兔角膜用于穿透性角膜移植效果观察

目的探索不同条件下甘油长期冷冻保存的角膜应用于穿透性角膜移植的可靠性和可行性。方法25只兔眼随机分为4个保存组和1个对照组,保存组按不同方法置于无水甘油中-25℃保存2月,最终全部行同种异体PKP术,术后以裂隙灯显微镜、A超以及锥蓝-茜素红活性染色等测得各组的植片透明率、厚度及角膜内皮细胞(CEC)存活率等指标并进行比较。结果术后各组植片均可见大量活性CEC存在,植片CEC与植床CEC分界清楚,形态不同。角膜片保存组术后的植片透明率、厚度以及CEC存活率均显著好于眼球保存组,角膜片内皮面添加透明质酸钠保存又优于角膜片直接保存。结论甘油冷冻保存法可以长期保存CEC活性,其中以角膜片内皮面添加透明质酸钠后保存最为可靠,这一改良方法可以满足穿透性角膜移植术的需要。

无血清器官培养法保存大鼠角膜内皮细胞的活性

目的:研究两种新型培养基-内皮细胞培养基(endothelial cell medium,ECM)和无动物成分培养基(animal compoundfree medium,ACF)在无血清器官培养法保存角膜内皮细胞活性方面的应用效果。方法:将大鼠角膜密闭保存于ECM和ACF培养基中4wk,再经葡聚糖T500脱水2d。以含低浓度牛血清的MEM基础培养基作为对照。计数保存前后角膜内皮细胞密度,检测保存结束大鼠角膜内皮层中胞质紧密粘连蛋白1(zonula occludens-1,ZO-1)的表达水平,评估内皮细胞层的屏障功能。结果:保存结束后,MEM+20mL/L FBS对照组大鼠的角膜内皮细胞密度值最低,ECM+20mL/L FBS组则高达2250±202个/mm2,ECM和ACF组结果与ECM+20mL/LFBS组接近,细胞死亡率也较低,组间差异有统计学意义(F=28.965,P=0.000)。冰冻切片显示ZO-1在保存后大鼠角膜内皮层成功表达。RT-PCR检测表明ZO-1mRNA在各组的表达趋势与内皮细胞密度结果一致(F=592.751,P=0.000)。结论:无血清ECM和ACF培养基可以很好地保持器官培养法保存角膜内皮细胞的活性和紧密连接的屏障功能。

前弹力层下角膜磨镶术治疗近视的视觉质量观察

目的探讨前弹力层下角膜磨镶术（sub-Bowman＇s keratomileusis,SBK）治疗近视散光患者术后的高阶像差、对比敏感度。方法采用随机对照临床研究,将自愿接受激光治疗的近视散光患者分为2组。A组71例（71眼）患者接受SBK,B组67例（67眼）患者接受常规LASIK。所有患者均取右眼进行分析,并将结果进行比较。术前及术后检测高阶像差、对比敏感度,进行视觉质量主观满意度调查问卷等。随诊时间为术后1周、1个月、3个月、6个月、12个月。结果术前2组各项指标比较,差异无统计学意义（均为P〉0.05）。术后12个月,SBK组平均高阶像差为（0.416±0.067）μm,LASIK组为（0.614±0.098）μm,2者差异有统计学意义（t=-13.922,P=0.001）;SBK组对比敏感度术后3~6个月恢复至术前水平,LASIK组术后6~12个月恢复至术前水平,术后12个月,在明亮及昏暗状态下,SBK组各空间频率对比敏感度优于LASIK组,其中明亮状态下低、中空间频率差异均有统计学意义;昏暗状态下低、中、高空间频率差异均有统计学意义。SBK组的患者主观满意率为95.8%,LASIK组为89.6%。结论与常规LASIK相比,SBK可减少手术诱导的高阶像差,更快地恢复低、中、高空间频率的对比敏感度,患者的满意度更高。

接合黏附分子-1在大鼠角膜中的表达研究

背景接合黏附分子-1（JAM-1）是新发现的跨膜蛋白，参与细胞紧密连接的结构组成和功能发挥。在眼组织方面，紧密连接对维持角膜的透明性十分重要，但是目前就JAM-1在角膜紧密连接结构和功能方面的研究较少。目的确定JAM-1在大鼠角膜上皮层、基质层和内皮层的构成。方法选取4只SPF级Wistar大鼠，2只用于MM-J基因在角膜组织中表达的逆转录聚合酶链反应（RT—PCR）检测，另2只用于免疫组织化学检测。动物过量麻醉处死后获得角膜组织并制备角膜上皮、基质和内皮标本，RT—PCR法检测角膜标本中JAM-1、occludin和claudin-1mRNA的表达。反应产物行质量分数1．5％琼脂糖凝胶电泳并用凝胶成像系统进行分析。用兔抗鼠JAM-1单克隆抗体对角膜石蜡切片、上皮及内皮铺片行免疫组织化学检测，评估JAM-1蛋白在大鼠角膜组织各层的表达部位和表达强度。结果在大鼠角膜各层均可检测到JAM-1、occludin和claudin-1mRNA的表达，PCR熔解曲线为清晰的单峰。角膜组织各层中JAM-1mRNA表达水平与occludinmRNA相似，均高于claudin-1mRNA。3种黏附分子均在上皮层表达最强，角膜基质层表达较弱。免疫组织化学检测显示，JAM-1蛋白在角膜各层均有明确的阳性染色，角膜上皮基底层的表达强于基质层和内皮层。角膜上皮、内皮铺片检测显示，JAM-1蛋白主要表达于上皮细胞和内皮细胞的连接部位，而角膜内皮中JAM-1蛋白的阳性染色广泛而弥散。结论JAM．1作为细胞连接的构成成分，在角膜上皮层、内皮层和基质层均有表达，但其表达的形态和水平因组织层次的不同而不同。

角膜弹性半球定律指导下的穿透角膜移植屈光控制

目的评价角膜弹性半球定律指导下的角膜屈光控制技术对穿透性角膜移植术（PKP）后屈光控制的效果。方法对角膜病患者68例（85眼）按光学移植要求行PKP术。根据角膜弹性半球定律选择性拆线,1、3、6、12个月及拆线后36、个月行视力、角膜曲率、角膜地形图及屈光检查。结果术后15个月裸眼视力≥0.5者59眼,其中20眼视力≥1.0,0.3~0.5者21眼。拆线前角膜屈折力（37.35±3.64）D,拆线后最终角膜屈折力（43.52±2.25）D,差异有统计学意义（P〈0.05）。首次拆线前平均角膜散光（4.83±4.16）D,术后15个月（1.97±2.69）D,差异有统计学意义（P〈0.01）。等效球镜术后1个月与36、、12、15个月差异有统计学意义（P〈0.05）,术后15、18个月之间差异无统计学意义（P〉0.05）。结论在角膜弹性半球定律指导下,选择性拆线结合其他技术可以控制和改善角膜移植术后屈光状态。

三种角膜测厚仪测量近视患者中央角膜厚度的对比

目的：利用LenstarLS900,OrbscanⅡ系统及A超角膜测厚仪测量近视眼患者中央角膜厚度（central corneal thickness,CCT）,探讨三种测量方法的差异,并对结果进行相关性和一致性评价,为临床应用提供理论依据。方法：随机选取角膜屈光手术术前近视眼患者35例70眼分别用Lenstar LS900,OrbscanⅡ及A超角膜测厚仪依次重复测量CCT3次,取其平均值进行统计学分析。不同方法测量CCT之间采用随机区组方差分析,组内两两比较采用LSD-t检验,三种测量方法之间的相关性采用直线相关分析,一致性检验采用Bland-Altman分析。以P〈0.05为差异有统计学意义。结果：Lenstar LS900,OrbscanⅡ及A超角膜测厚仪测得的近视眼患者CCT均数分别为542.75±40.06,528.74±39.59,538.54±40.93μm。Lenstar LS900的测量值较A超角膜测厚仪的测量值大4.21±8.78μm,较OrbscanⅡ测量值大14.01±13.39μm,OrbscanⅡ测量值较A超角膜测厚仪小9.8±10.57μm,差异均有统计学意义（P〈0.05）。3种不同仪器测量结果均具有显著相关性,Lenstar LS900和A超角膜测厚仪、OrbscanⅡ测量值呈正相关：r=0.977（P〈0.05）,r=0.944（P〈0.05）。Bland-Altman方法分析：Lenstar LS900和A超角膜测厚仪95%一致性区间上下值为-13.0～21.4μm,1.4%的点在95%的一致性界限以外,OrbscanⅡ与A超角膜测厚仪95%一致性区间上下值为-30.5～10.9μm,7.1%的点在95%一致性界限以外,LenstarLS900和A超角膜测厚仪一致性更好。结论：LS900与A超角膜测厚仪和OrbscanⅡ系统测量CCT一致性及相关性好,Lenstar LS900可以作为近视患者CCT的非接触式测量工具。

甘油冷冻保存角膜远程投送包装系统的温度控制

目的:研究甘油冷冻保存角膜远程投送包装系统的温度变化和保存角膜的安全性及远程投送的可行性。方法:常温下将-21℃冰盒与盛有-21℃冷冻甘油的保存瓶置于保温箱内,并用海绵填充箱体。实验组按照保存介质(甘油)体积分组,采用双通道温度记录仪,记录不同组别的瓶内瓶外温度变化曲线,观察该包装能否满足甘油冷冻保存-20℃以下的温度要求,及该温度范围的维持时间,并在各分组间进行两两比较分析。结果:常温下实验各组保存介质冷冻甘油24h温度几何均数均低于-20℃,而对照组24h温度均高于-17℃。保存介质体积≤300mL可以维持温度-20℃以下达17h以上,保存介质体积400mL可维持有效温度6h以上,各实验组与对照组比较,差异有显著性。结论:常温下该包装系统能有效控制温度于-20℃以下达20h以上,可以满足国内国际大部分地区远程投送的时间要求。

穿透角膜移植术各屈光变量及其相互关系

目的研究穿透性角膜移植(penertrating keratoplasty,PKP)术后各屈光变量间的数量关系,探讨PKP引起眼球屈光状态变化的规律。方法32只新西兰大白兔随机分为A、B、C、D四组分别行PKP术,植孔大小均为7 mm,植片直径依次为7、7.25、7.5和8.0 mm,将屈光变量植片差值、角膜屈折力、角膜厚度、前房深度、晶状体厚度依次设为自变量X1、X2、X3、X4、X5,眼轴长度为应变量Y,分别在术前、术后1周、2周、1月、2月、3月进行观察测量并建立Y与各自变量间的数学模型。结果术前各屈光变量在各组间无显著差异(P>0.05)。综合各时间点的参数获得了屈光变量间的回归方程,如:术后3月Y=15.238+0.199X1+0.544X2-0.060X3+0.129X4-0.094X5。结论PKP术中应用不同植片/植孔大小差值可以引起眼球屈光状态的改变。所建立的回归方程数学模型对PKP术后屈光状态的控制具有一定指导作用。

甘油冷冻保存角膜深板层移植治疗真菌性角膜溃疡的临床研究

目的探讨甘油冷冻保存的供体角膜行深板层角膜移植术治疗浅、中层真菌性角膜溃疡的手术适应证及临床效果。方法57例(57眼)经综合抗真菌措施治疗无效的浅、中层真菌性角膜溃疡施行深板层角膜移植术,随访8～24月,观察术后复发率、视力恢复、植片透明及并发症发生情况。结果57例中,52例治愈,成功率91.23%;5例复发,复发率8.77%。矫正视力0.1～0.2者20眼,0.3～0.5者24眼,>0.5者13眼。17例出现新生血管;13例发生排斥反应,均得到有效控制。植片全部透明。结论使用甘油冷冻保存的角膜供体行深板层角膜移植术既能及时去除病变组织,达到治疗目的,又有一定的增视效果,对药物治疗无效的浅、中层真菌性角膜溃疡是有效的手术方式。

两种新型无血清培养基器官培养保存兔角膜内皮细胞活性的实验研究

目的研究两种新型培养基-内皮细胞培养基（ECM）和无动物成分培养基（ACF）在无血清器官培养法保存角膜内皮细胞活性方面的效果。方法将64枚兔角膜平均分为4份，分别密闭保存于ECM＋2％胎牛血清（FBS）、ECM和ACF等4种不同的培养基中4周，再以葡聚糖巧oo脱水2d。伊格尔最低基础培养基（MEM）作对照组。检测保存前后角膜内皮细胞密度、角膜厚度、内皮层中肌动蛋白微丝（F-actin）的表达和透射电镜下内皮细胞超微结构的变化。结果保存结束后，ECM＋2％FBS组的兔角膜内皮细胞密度最高（21234-240）个／mm^2，ECM和ACF组结果与其接近，内皮细胞死亡率也较低，对照组内皮细胞密度最低（1732±144）个／mm^2，3个实验组与对照组间差异有统计学意义（F=23．180，P=0．000）。免疫组织化学染色显示F-actin在兔角膜内皮层成功表达。WB半定量检测表明F-actin蛋白在各组角膜内皮层的表达趋势与内皮细胞密度计数结果一致，3个实验组与对照组间差异有统计学意义（F=159．876，P：0．000）。3个实验组内皮细胞的超微结构与正常角膜区别较小。结论在器官培养法保存过程中，无血清的ECM和ACF培养基可以较传统MEM培养基更好地保持角膜内皮细胞的活性和屏障功能，在无血清器官培养保存角膜方面具有应用前景。