高通量测序在海洋生物活性物质开发中的应用前景

新一代测序仪以高通量、速度快、低成本为主要特征,在海洋生物活性物质基因资源挖掘中已显示出巨大潜力。高通量测序技术已成为高效、大规模和全面开发海洋生物资源的基础和重要手段。本文概述了新一代测序技术的基本原理、目前的应用现状及其优势,分析了海洋生物活性物质的研究现状和基于新一代高通量测序技术在海洋生物"组学"研究、海洋生物活性物质基因挖掘中的应用情况和应用前景。

海洋微生物次级代谢产物抗菌作用研究进展

海洋微生物次级代谢产物种类繁多,具有丰富的结构多样性和不同的抗菌功能。其中以抗菌活性物质最为突出,已经成为近年来新药筛选的重要资源,在药品开发应用中具有良好的发展前景。本文结合近年关于海洋微生物次级代谢产物的报道,分析海洋微生物次级代谢产物的结构和功能;并对海洋微生物次级代谢产物在抗菌方面的作用及其抗菌作用机制的研究进展进行总结。

eNOS/NO信号通路与心血管疾病关系的研究进展

一氧化氮(nitric oxide,NO)作为一种信号分子,在生理活动中起着重要作用,包括血压调节、血管张力维持、免疫系统调控等,尤其在心血管系统中发挥重要作用。NO产生异常是多种心血管疾病的诱因。内皮型一氧化氮合酶(endothelial nitric oxide synthase,e NOS)作为诱导合成NO的限速酶,主要在血管壁的调节中发挥重要作用,因此,其与心血管的正常生理活动密切相关。本文综述了e NOS的基本结构与功能、NO的理化性质,以及e NOS/NO信号通路与心血管系统疾病的关系。

Dextran-40对致命性水母蜇伤的保护作用

目的分析低分子右旋糖酐（Dextran-40）对致命性水母蜇伤的保护作用。方法首先,应用本课题组建立的致命性水母蜇伤综合征（acute jellyfish envenomation syndrome,AJES和delayed jellyfish envenomation syndrome,DJES）模型,在整体动物水平分别观察Dextran-40对AJES小鼠生存率的影响、AJES大鼠循环功能的影响以及DJES大鼠血生化指标的影响。然后,应用激光扫描共聚焦显微镜,在细胞水平观察Dextran-40对发形霞水母触手提取物（tentacle extract,TE）所致心肌细胞损伤的保护作用。结果整体动物水平研究结果发现,Dextran-40 0.8 g/kg能显著降低TE所致AJES小鼠死亡率;Dextran-40 0.6 g/kg能明显缓解TE所致AJES大鼠的血压下降,改善TE所致DJES大鼠的肝功能指标（ALT,AST,A/G）、心肌损伤相关酶指标（CK,LDH）。细胞水平研究结果表明,Dextran-40 5μg/m L显著抑制TE引起的心肌细胞内Ca^（2＋）增加和心肌细胞死亡。结论 Dextran-40对致命性水母蜇伤的保护作用可能与其稳定血压或者封堵水母毒素在细胞膜上形成的孔道有关。因为Dextran-40属临床常用药物,故推荐Dextran-40作为水母蜇伤的急救药。

发形霞水母丝氨酸蛋白酶家族原核表达载体的构建及其表达

目的获得发形霞水母丝氨酸蛋白酶,为深入研究发形霞水母丝氨酸蛋白酶的功能奠定基础。方法综合运用生物信息学分析发形霞水母丝氨酸蛋白酶分子的序列特征和活性功能。通过设计带有特异性酶切位点的引物,将编码发形霞水母丝氨酸蛋白酶的核苷酸序列(CcSP1,CcSP2和CcSP3)从cDNA文库中扩增出来,利用pET-24a(+)载体构建重组表达质粒(pET24a-Cc SP1、pET24a-CcSP2和pET24a-CcSP3),经过筛选和鉴定正确后转入表达菌Rosetta(DE3).plysS。重组质粒转化表达菌在IPTG诱导下表达,利用SDS-PAGE电泳和Western-blot分析表达的重组蛋白。结果 SDS-PAGE电泳结果可见重组质粒转化的表达菌分别在34、42和30kDa处有蛋白条带,Western-blot检测显示,这些蛋白可特异性与抗His抗体反应,分别与预测重组蛋白分子量一致,鉴定为正确表达的目的重组蛋白。结论本研究成功构建了发形霞水母丝氨酸蛋白酶家族原核表达载体,获得了目标蛋白,为进一步研究水母丝氨酸蛋白酶的活性和功能奠定基础。

发形霞水母触手提取物的蛋白稳定性及其溶血活性

目的探讨不同环境因素和处理方法对发形霞水母（Cyanea capillata）触手提取物（tentacle extract,TE）蛋白稳定性及其溶血活性的影响。方法结合蛋白浓度测定、溶血活性检测和SDS-PAGE分析等方法研究不同环境因素和处理方法对TE蛋白稳定性及其溶血活性的影响。结果 TE溶血活性呈明显的剂量依赖关系,其半数溶血分数HU50=226μg/ml;40℃水浴1 h,能去除TE中大量杂蛋白,但仍保持显著溶血活性;TE在4℃放置28 d,其溶血活性保持稳定,25℃下3 d内其溶血活性变化不明显;p H值对TE溶血活性的影响呈钟形曲线,在p H 6.0-11.0之间活性相对稳定,p H 8.0是TE保持溶血活性的最优p H条件;不同缓冲液对TE稳定性及其溶血活性影响显著,浓度大于26%的硫酸铵溶液对TE溶血蛋白具有良好的盐析作用。结论 40℃水浴1 h预处理可显著减少TE中非活性蛋白组分,并降低样品黏性;4℃和p H 8.0是TE保持蛋白稳定性和溶血活性的最适条件;浓度大于26%的硫酸铵盐析有利于溶血蛋白组分富集。

水母毒素生物活性多样性及其蜇伤防治的研究进展

近年来，全球海洋中水母数量呈增加趋势，在许多海域出现水母大规模聚集现象，并且频率和范围逐年增加。我国很多海域大型水母已经达到泛滥的程度，对海洋渔业、海滨旅游、沿岸工业和涉海人员安全等造成很大威胁，是继有害藻之后最大的海洋生态灾害。

发形霞水母共附生微生物的分离鉴定及其发酵液的抑菌活性研究

目的对发形霞水母(Cyanea capillata)共附生微生物进行分离鉴定并测定其抑菌活性,以期获得具有较高抑菌活性的菌株。方法利用4种分离培养基从C.capillata各部位分离共附生微生物,首先对挑选的单个菌落进行反复的划线分离,获得各菌株的纯培养;利用形态学观察、生理生化特征检测和16SrDNA序列测定和分析等手段对获得的菌株进行鉴定;以金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、枯草芽孢杆菌作为指示菌,利用滤纸片扩散法测定菌株发酵液的抑菌活性;通过正交试验方法进一步优化发酵条件,提高菌株发酵产生抑菌活性物质的能力。结果从C.capillata触手、胃囊、伞部、肌肉4个部位共分离出83株菌株,其中放线菌11株,细菌31株,真菌41株;其中菌株cmf-2经鉴定属于假单胞菌属。抑菌活性检测发现,在31株细菌中有14株对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、枯草芽孢杆菌均有较强的抑菌活性,占分离菌株的45.2%;正交试验结果显示,菌株cmf-2发酵液的最优条件为:培养温度35℃,pH 7.3,培养时间7d,蔗糖50g/L,蛋白胨10g/L。结论分离到的发形霞水母共附生微生物中含有较高比例的能产生抑制细菌生长的活性物质的细菌菌株,这些菌株具有较强的研究和开发价值。