MHC DQA基因的分子进化研究——Ⅱ.基于核苷酸替换和SCU偏移的系统发育的分析

根据23个等位基因不同外显子(EN)的核苷酸(NT)替换及同义密码子使用谱(SCU)偏移研究了哺乳类7种动物MHC DQA座位的系谱发育关系。发现:(1)在大时间尺度内,MHC DQA基因进化速率(1.0×10^(-9),其中EN2为1.3×10^(-9)9NT/位点/年)与一般核基因相似;鼠类DQA基因的NT替换速率大致是其他哺乳类的2倍;(2)证实DQA等位基因多态性是在哺乳动物分化以后才逐渐形成的;推测牛类也存在与绵羊DQA2即OLA-DQA(c17-2)对等的具有最近共同祖先的DQA2基因座位有待发现;HLA-DQA2系谱与HLA-DQA1祖先的分化年代在20～12Mya(百万年前),HLA-DQA1各等位基因分化时间在24Mya至1Mya以内,因此产生HLA-DQA2座位的基因重组发生在HLA-DQA1产生少数几个等位基因之后;(3)基于SCU分化度的进化树从一个新的角度体现了DQA基因的系统发育关系,并显示HLA-DQA2具有特殊的SCU,提示在DQA基因的进化中产生了SCU的分化,SCU系统树在进化上有重要价值和特殊意义。改进了基因的SCU分化度和SCU相似系数的估算方法。

参与细胞周期调控的多功能分子p27

ｐ２７是细胞周期素依赖激酶抑制剂的一种，属于ｐ２１家族的非特异性多功能分子。本文主要阐述Ｐ２７的发现，基因、蛋白结构特征，参与细胞周期调控及其与肿瘤的关系，并提出了问题和展望。

P16^(ink4)cDNA的克隆及序列分析

Ｐ１６ｉｎｋ４ｃＤＮＡ的克隆及序列分析黄长晖邓炜傅继梁（第二军医大学生物教研室，医学分子遗传学开放实验室上海２００４３３）（复旦大学遗传学研究所上海２００４３３）Ｐ１６ｉｎｋ４是ＣＤＫ（ＣｙｃｌｉｎＤｅｐｅｎｄｅｎｔＫｉｎａｓｅ）抑制蛋白家族中的...

Hela细胞P16^(ink4)cDNA的克隆及序列分析

P16^(ink4)是CDK抑制蛋白,参与调控细胞G1期至S期的转换。目前发现P16`(ink4)基因损伤与多种肿瘤的发生、发展有关,可能是功能上非常重要的抑癌基因。为了研究该基因的功能,以及突变对该基因功能的影响,本文应用RT-PCR方法,从Hela细胞中克隆了P16^(ink4)cDNA。扩增得到556bp片段(包括引物两端酶切位点的16bp)克隆于M13载体,测定了其DNA序列。该序列包括了P16^(ink4)cDNA编码区全部471bp,以及3’端69bp序列。表明P16^(ink4)cDNA已成功地得到克隆。

P48L和D74N突变对P16基因功能影响的初步研究

P16基因(CDKN2,P16INK4a,MTS1)是新发现的肿瘤抑制基因。目前对P16基因是否存在突变热点,以及突变与肿瘤的病程和预后间的关系,都还处于研究之中。为了研究突变对P16功能的影响,探讨P16结构与功能的关系,以进一步认识P16基因的功能,我们应用体外定点诱变方法,构建了在原发性恶性肿瘤中存在的P48L和D74NP16突变体,并在缺失P16基因的肿瘤细胞株H460中表达。

YAC克隆的筛选及鉴定分析技术

人工酵母染色体（ＹＡＣ）技术是人类基因组分析及疾病相关基因的分离、克隆中的关键技术。在基因组ＹＡＣ文库基础上特定目的基因的分离克隆涉及ＹＡＣ克隆的筛选，嵌合体、缺失体和共转染克隆的检测与处理，插入片段的分离及其结构特征的分析，亚克隆的快速构建等等。近年来，有关技术取得了重要进展，已趋于成熟。