细胞外信号调节蛋白激酶5/凋亡调节蛋白信号途径在低温诱导心肌细胞损伤及凋亡中的调控作用

目的:探讨低温刺激诱导心肌细胞损伤及凋亡,以及细胞外信号调节蛋白激酶5(ERK5)/凋亡调节蛋白Bim途径的调控作用。方法:基于乳鼠原代心肌细胞,低温培养箱施加低温刺激;使用特异性小干扰RNA(siRNA)下调ERK5或Bim的表达;细胞凋亡使用流式细胞仪检测;各蛋白表达水平通过Western blot检测;细胞内钙离子、活性氧簇(ROS)水平、线粒体膜电位(ΔΨm)通过荧光标记及流式细胞仪检测。结果:在低温刺激下的心肌细胞中,ERK5 siRNA可加剧Bim蛋白表达;Bim siRNA不影响ERK5,但减轻p-ERK5表达;ERK5 siRNA导致更高的细胞凋亡率,Bim siRNA则可减弱ERK5 siRNA的促凋亡作用;ERK5 siRNA加重了细胞内钙离子超载、ROS激活、线粒体膜电位破坏,Bim siRNA则可对抗上述损伤性作用。结论:在低温干预下的心肌细胞中,下调ERK5可释放对Bim的表达抑制,加重凋亡、细胞内钙离子超载、ROS爆发,造成更严重的线粒体膜电位破坏,而下调Bim则产生反向的保护作用。结果显示ERK5/Bim途径在低温诱导心肌细胞损伤中的重要调控作用。

麝香保心丸对内皮祖细胞功能及分泌一氧化氮的影响

目的观察麝香保心丸(Shexiang Baoxin Pill)对人外周血内皮祖细胞(endothelial progenitor cells,EPCs)功能及分泌一氧化氮(NO)的影响。方法采用密度梯度离心法从外周血获得单个核细胞,将其接种在人纤维连接蛋白包被的培养板上,培养7天后收集贴壁细胞,加入不同浓度麝香保心丸继续培养24h;分别采用MTT比色法、Transwell小室、黏附能力测定实验、体外血管生成试剂盒和硝酸还原酶法测定EPCs的增殖、迁移、黏附、体外血管形成功能和分泌NO能力。结果与对照组比较,麝香保心丸组EPCs增殖能力提高,迁移、黏附和体外血管形成功能增强,培养上清中NO浓度增加(P<0.05),其作用随麝香保心丸浓度增加而增强。结论麝香保心丸显著改善EPCs功能,这可能是其内皮保护和促进心肌血管新生的新机制。

流动血库在大型水面舰艇血液保障中的运用与思考

目的 通过应急采供血演练,探讨流动血库在大型水面舰艇血液保障中应用的可行性以及应急采供血的运行模式。方法 预先制定应急采供血实施方案,在海上训练期间通过组织应急采供血流程实操演练,以检验应急采供血预案的可行性,并在演练中记录各个环节所用时间及存在问题。结果 从演练结果看,自广播通知采血人员到指定地点、完成血型鉴定、交叉配血,完成1人次全血采集共用时35 min。采血人员技术完备,献血人员未发生不良反应,应急采供血预案具有可操作性。结论 经过模拟演练的检验,流动血库可以作为大型水面舰艇血液保障的主要手段,但仍需要进一步优化。

晚期糖基化终产物对大鼠血管外膜成纤维细胞中烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸氧化酶p22phox亚基及活性氧表达的影响

目的:探讨晚期糖基化终产物(AGE)对大鼠血管外膜成纤维细胞(AF)中烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸(NADPH)氧化酶p22phox亚基及活性氧表达的影响。方法:用组织贴块法培养SD大鼠的血管外膜成纤维细胞,用逆转录—聚合酶链反应、蛋白质印迹检测不同浓度的糖基化人血清白蛋白(AGE-HSA,分为对照组、100μg/ml AGE-HSA组,200μg/ml AGE-HSA组、300μg/ml AGE-HSA组)对NADPH氧化酶p22phox亚基信使核糖核酸(mRNA)及蛋白的表达的影响,并观察不同干预因素[分为对照组1、200μg/ml AGE-HSA组(200μg/ml处理组1)、200μg/ml AGE-HSA+50μg/ml抗RAGE中和抗体组(抗RAGE中和抗体组1)及200μg/ml AGE-HSA+30 nmol/L坎地沙坦组(坎地沙坦组1)对AGE-HSA上调NADPH氧化酶p22phox亚基mRNA和蛋白表达的影响。用2’,7’-二氯荧光黄双乙酸盐检测不同干预因素[空白对照组、AGE-HSA 200μg/ml组(200μg/ml处理组2)、200μg/ml AGE-HSA+50μg/ml抗RAGE中和抗体组(抗RAGE中和抗体组2)、200μg/ml AGE-HSA+30μmol/L夹竹桃素组(夹竹桃组),200μg/ml AGE-HSA+30 nmol/L坎地沙坦组(坎地沙坦组2)对血管外膜成纤维细胞内活性氧表达的影响。结果:3个浓度(100μg/ml、200μg/ml和300μg/ml)的AGE-HSA组均与对照组比较,血管外膜成纤维细胞NADPH氧化酶p22phox亚基mRNA及蛋白的表达随AGE-HSA增加呈浓度依赖性上调;抗RAGE中和抗体组1、坎地沙坦组1比200μg/ml处理组1的p22phox mRNA及蛋白表达降低;抗RAGE中和抗体组2、夹竹桃素组2及坎地沙坦组2比200μg/mlAGE-HSA处理组2血管外膜成纤维细胞内活性氧相对荧光强度降低,上述比较差异均有统计学意义(P<0.05)。结论:AGE-HSA经由RAGE影响活性氧与NADPH氧化酶p22phox亚基的表达上调,活性氧的上调与NADPH氧化酶p22phox亚基表达相关。NADPH氧化酶抑制剂及坎地沙坦可通过下调NADPH氧化酶p22phox亚基的表达减少血管外膜成纤维细胞内活性氧的产生。

内皮祖细胞与支架术后再内皮化的研究进展

冠脉内支架置入术改变了冠心病的治疗格局,然而再狭窄和晚期支架内血栓形成是影响介入治疗疗效及临床应用的主要障碍。内皮祖细胞可以通过再内皮化作用有效地防止支架置入术后再狭窄与晚期血栓的发生,为冠心病的介入治疗提供广阔的应用前景。本文就近几年内皮祖细胞在再内皮化治疗方面的最新进展及存在的问题做一综述。

甲状旁腺激素相关蛋白在兔颈动脉外膜损伤致动脉粥样硬化中的作用

目的观察甲状旁腺激素相关蛋白(PTHrP)(1～34)在兔颈动脉外膜损伤致动脉粥样硬化(AS)中的作用。方法雄性新西兰大白兔给予基础饲料喂养1周、高脂喂养4周后去除左侧颈动脉外膜,随机分成4组,分别接受蒸馏水灌胃(4mL/d,对照组)、阿托伐他汀混悬液灌胃(5mg·kg-1.d-1,阿托伐他汀组)、颈动脉局部予1mLF-127凝胶(空白凝胶组)或予1mL1μmol/LPTHrP(1～34)凝胶干预(PTHrP组),右侧颈动脉以0.9%氯化钠溶液处理,不损伤外膜,作为对照侧。继续高脂喂养4周后处死,取标本,苏木精-伊红(H-E)染色检测AS斑块,测定颈动脉内膜/中膜面积比(IMR),免疫组织化学染色检测颈动脉PTHrP(1～34)的表达情况。结果各组内损伤侧动脉的IMR均显著高于对照侧(P值均<0.05)。各组间损伤侧动脉的IMR比较,PTHrP组显著高于其他3组(P值均<0.05),阿托伐他汀组显著低于其他3组(P值均<0.05)。各组颈动脉标本均可见染成棕黄色的PTHrP(1～34)阳性表达信号,主要存在于外膜和内膜粥样斑块区,肩部表达更多,中膜有少量表达。PTHrP组的PTHrP免疫组织化学阳性表达比例显著高于其他3组(P值均<0.05),阿托伐他汀组显著低于其他3组(P值均<0.05)。结论局部给予PTHrP(1～34)可促进AS的发展,阿托伐他汀可通过下调PTHrP(1～34)的表达而抑制血管外膜损伤所致AS的进展。

葡萄糖浓度波动对人外周血内皮祖细胞氧化应激的影响

目的观察葡萄糖浓度波动对人外周血内皮祖细胞(EPCs)活性氧水平的影响。方法采用密度梯度离心法分离外周血单个核细胞,培养7d后,收集贴壁细胞,进行FITC-UEA-Ⅰ、DiI-acLDL双染色鉴定,并用流式细胞术检测细胞的表面标志CD34、CD133和血管内皮生长因子受体-2。EPCs给予不同浓度波动幅度(0、10、20mmol/L)、不同浓度波动间期(3、6、12h)、不同平均浓度(20、25、30mmol/L)的葡萄糖,培养一定时间(6、12、24、48、96h)后,以氯甲基二氯二氢荧光素二乙酯染色细胞,用流式细胞术检测细胞内平均荧光强度(MFI)。结果葡萄糖浓度波动幅度越大、浓度波动间期越小、平均浓度越高,细胞内MFI越高(P<0.05)。平均浓度对MFI的影响随时间减小;而浓度波动对MFI的影响随时间增大(P<0.05)。结论葡萄糖浓度波动在葡萄糖所致人外周血EPCs慢性氧化应激中起重要作用。

一种动态检测小鼠微量血中T细胞受体重排删除环含量的方法

目的:通过检测比较外周血(颈动脉大量采血和微量隐静脉采血)、胸腺组织和脾脏组织等不同成分或组织中T细胞受体重排删除环(T cell receptor rearrangement excision circles,TREC)的含量,并建立一种通过微量外周血PCR预扩增的方法,评估胸腺输出功能。方法:采用C57BL/6小鼠作为实验对象,分成幼年组(5周龄,n=10)和成年组(15周龄,n=10)。经过隐静脉采血及颈动脉采血后处死小鼠,取小鼠胸腺器官和脾脏器官,提取基因组DNA(g DNA),隐静脉微量血g DNA通过PCR预扩增,提纯后再和颈动脉血、胸腺组织和脾脏组织g DNA一起进行实时定量PCR,分析各组织成分TREC的表达水平及差别。结果:幼年组胸腺组织及外周血中TREC的含量比成年组高,且二者趋势基本一致;而脾脏组织结果与其相反;幼年组小鼠胸腺组织中TREC的含量比脾脏组织中高,成年组小鼠结果与之相反;微量外周血经过预扩增后再进行实时定量PCR的结果与直接定量PCR结果一致,且更高效。结论:研究提供了一种新型高效的动态检测T细胞受体重排删除环和检测胸腺输出功能的方法。