用非同位素原位杂交组化在光镜和电镜水平观察前阿黑皮素mRNA在垂体的分布

用地高辛标记反意前阿黑皮素(pro-opiomelanocortin,POMC)cRNA探针原位杂交组化在光镜和电镜水平观察了POMC mRNA在大鼠垂体的分布,并比较了碱性磷酸酶(AKP)显色系统和辣根过氧化酶(HRP)显色系统在光镜水平上的敏感性.结果:POMC mRNA广泛地分布于垂体的中间叶和前叶.中间叶全部细胞均为POMC mRNA阳性.前叶中除前叶的腹侧缘和前叶与中间叶交界处阳性细胞较少外,都有较多的POMC mRNA阳性细胞分布.AKP显色系统比HRP显色系统敏感.在电镜水平,POMC mRNA主要分布于粗面内质网,少数分泌颗粒可能呈阳性反应,胞核未见阳性反应沉淀.文内还就阳性分泌颗粒在调节细胞合成功能方面可能起的作用进行了讨论.

应用半定量原位杂交组化和免疫组化观察老年大鼠下丘脑室周核生长抑素神经元

应用半定量原位杂交组化和免疫组化观察了老年大鼠下丘脑室周核生长抑素神经元的变化.结果表明:老年大鼠下丘脑室周核生长抑素mRNA阳性神经元明显减少(P<0.001).每一神经元的mRNA的相对含量变化不显著;生长抑素免疫反应阳性神经元数目也明显下降(P<0.05).正中隆起处生长抑素免疫反应阳性神经纤维变化不明显.提示老年大鼠下丘脑室周核生长抑素神经元功能活动低下,细胞丢失,合成分泌生长抑素的功能紊乱.

介绍一种对中枢肽类神经元光、电镜免疫组织化学的改进方法

本实验对大鼠下丘脑生长抑素神经元染色,以5%丙烯醛固定,1 mm组织块浸泡2.5小时,入30%蔗糖过夜,冰冻或振荡切片机切片50μm后分别用高碘酸钠、氢硼化钠处理,以去除多余的固定剂,后常规漂浮PAP染色。电镜标本用振荡切片机切片,采用平板包理技术,LKB超薄切片,H-800电镜观察。本实验同时对比了Bouin和多聚甲醛固定剂灌注后PAP染色,并进一步观察了三种条件下对LHRH和NT的PAP染色,结果表明,丙烯醛明显优越于其它二种固定剂,它能很好的显示下丘脑各区的阳性细胞和纤维,尤其是细的纤维,并且背底浅淡。

原位杂交组织化学与免疫组织化学结合法的研究

介绍一种用原位杂交组织化学与免疫组织化学结合法在同一切片中显示生长抑素mRNA和相对应的生长抑素.同时还比较了六种不同固定液对原位杂交组织化学和原位杂交组织化学与免疫组织化学结合法的影响.结果表明Zamboni氏固定液用于原位杂交组织化学与免疫组织化学结合法最佳,而4%多聚甲醛磷酸缓冲液用单纯原位杂交最佳.原位杂交组织化学与免疫组织化学结合法显示的下丘脑室周核生长抑素免疫反应阳性神经元均含有相应生长抑素mRNA,而且多数神经元生长抑素基因的转录量与生长抑素的翻译量成正比.

原位杂交组织化学的进展

原位杂交组织化学(in situ hybridization histoche-mistry ISHH)是应用已知碱基顺序并带有标记物的核酸探针与组织细胞中待测的核酸按碱基配对的原则进行特异性结合,形成杂交体,然后再应用与标记物相应的检测系统,通过组织化学或免疫组织化学方法在核酸原有的位置上把它显示出来,这一技术即原位杂交组织化学.

同一切片中免疫组化PAP-DAB终产物金银加强法及免疫组化PAP法显示不同组织抗原技术

1、在形态学研究中,常需对含有不同神经肽的神经元的相互关系,共同分布进行研究.我们在同一切片上连续运用免疫组化PAP-DAB终产物金银加强法(SGI)

烫伤或外伤性骨折对下丘脑神经内分泌细胞的影响——Gomori方法、免疫组化和免疫电镜观察

为了从形态学角度进一步探讨VP、OT在应激中的作用,我们利用Gomori染色、免疫组化和免疫电镜观察,发现无论是烫伤或骨折后,大鼠下丘脑室旁核VP神经元的机能状态有明显的改变,合成、储存和分泌VP的功能均亢进,而OT神经元和视上核VP、OT神经元的机能状态无明显改变。我们推测下丘脑室旁核VP神经元的反应是损伤性应激时的变化。

^(60)COγ线照射后大鼠肝内硷性磷酸酶和葡萄糖-6-磷酸酶变化的组织化学和细胞化学观察

用体重250~300g雄性大鼠,研究^(60)Coγ线20 Gy(2000 rad)一次全身照射后,肝内AKPase与G-6-p ase的变化。在照射1、2、3天内将动物断头杀死,取材、恒冷箱切片,用组织化学和细胞化学方法处理。对照组AKPase反应物主要集中于毛细胆管附近,肝小叶周围较小叶中央酶活性显著。G-6-p aseR应物分布于粗面、光面内质网的囊池内和核周间隙内。照射2~3天后AKP ase活性明显增强。照射1天后G-6-p ase的活性略高,2~3天后活性略低。电镜观察与光镜结果基本一致,对上述结果进行了讨论。

自发性高血压大鼠胸主动脉的结构重建及力学特性

选取自发性高血压大鼠 SHR在高血压形成前后的不同时相点 ,采用组织形态学方法结合计算机图像分析 ,对 SHR大鼠胸主动脉几何形态及纤维结构进行了形态定量学研究 ,测定了 SHR胸主动脉零应力状态张开角的变化及压力 -直径关系。结果表明 ,随着血压增高 ,SHR主动脉几何形态及各种显微结构指标均显著增大 ;高血压形成和发展阶段 ,SHR主动脉零应力状态张开角增大 ;高血压主动脉结构重建例如管壁增厚 ,胶原纤维不成比例地增加可能导致主动脉可扩张性降低 ;

心理应激对中枢多巴胺能神经元的影响及酪氨酸的干预作用

目的观察反复心理应激对中枢多巴胺(DA)系统的影响及酪氨酸(Tyr)的干预作用。方法用CommunicationBox模型对大鼠进行连续14天、每天30min的心理应激,并经饲料给予250、500、1000mg/kg三个剂量Tyr的干预。应激后对含中脑腹侧被盖区(VTA)、伏隔核(Nac)及前额皮质(mPFC)的脑组织切片进行酪氨酸羟化酶(TH)和Fos蛋白免疫组化染色。结果心理应激组在前囟后5·1mm处VTA部位TH阳性神经元数比正常对照组下降显著(P<0·01);在5·1、5·4、5·7mm处VTA部位,Tyr干预500、1000mg/kg组TH阳性神经元数升高。Fos蛋白在VTA、Nac、mPFC等三个部位均有较强的表达,且心理应激组较对照组明显升高,1000mg/kgTyr干预组较心理应激组明显降低。结论反复心理应激能够损害中枢DA神经元,导致TH阳性神经元数目减少,Fos蛋白表达增加,多巴胺前体物质Tyr的干预能够降低此种损害。

大鼠下丘脑视交叉上核及视上核内加压素神经元心理应激后的变化

为探讨心理因素对下丘脑精酸加压素(AVP)神经元的影响,采用心理应激动物模型,以免疫组织化学及微机图像分析等方法,检测大鼠下丘脑的视交叉上核(SCN)及视上核(SON)等AVP阳性细胞的总面积,将闪光间期长短不均加电刺激组(A组)和光、电刺激与A组相同但闪光间期衡定组(B组)及仅给同量闪光的对照组(C组)的AVP阳性物互相比较.结果,在SCN,A组>B组>C组的;在SON,则B组>A组>C组的.观测正中隆起(ME)外带的阳性纤维,A组的呈色深且面积大,B组和C组的呈色均较浅且面积小.此外,不论A组或B组,同一组的SCN及SON内AVP阳性物总面积的变化皆呈现负相关的增长关系,其相关系数(r)分别为-0.8024和-0.7679,t检验表明,其相关性有显著意义,据此,著者认为:SON及SCN的AVP神经元都与心理应激反应有关,但变化方向有所不同,其意义有待研究.

蛋白酪氨酸磷酸酶SHP-2在乳腺癌细胞移动及粘附中的作用

探讨蛋白酪氨酸磷酸酶SHP 2在乳腺癌细胞MCF 7的移动及粘附中的作用 .利用基因重组技术分别将野生型SHP 2与突变型SHP 2与绿色荧光蛋白GFP的基因片段构成重组质粒 (SHP 2 GFP、SHP 2C >S GFP) .脂质体转染法分别转入MCF 7中 ,表达成功后筛选并建立SHP 2 GFP和SHP 2C >S GFP细胞株 .荧光显微镜观察细胞移动情况 ,免疫印迹法检测粘附分子E 钙粘蛋白和金属蛋白酶MMP 1及MMP 9的表达 .实验后建立SHP 2 GFP及SHP 2C >S GFP细胞株 ,同时观察到SHP 2C >S GFP细胞的形态发生明显改变 :从梭形状态变成圆形状态 .荧光显微镜发现 ,MCF 7细胞和SHP 2 GFP、SHP 2C >S GFP转染的细胞在 3h、6h、9h的移动情况分别是MCF 7为 10 %、2 3%、5 4% ,SHP 2 GFP为 15 %、4 9%、98% ,SHP 2C >S GFP为 4 %、11%、30 % .免疫印迹结果表明 ,SHP 2C >S GFP细胞的E 钙粘蛋白表达比SHP 2 GFP细胞明显升高 (P <0 0 5 ) .MMP 1及MMP 9的表达量在SHP 2 GFP细胞中有所增强 (P <0 0 5 ) .实验表明 ,SHP 2可能通过调节粘附分子和基质金属磷酸酶而在细胞移动。

心理应激对大鼠下丘脑室周核生长抑素mRNA神经元的影响

目的：探讨心理应激因素对下丘脑室周核生长抑素ｍＲＮＡ阳性神经元的影响。材料和方法：采用心理应激大鼠模型，以原位杂交组织化学及图像分析技术，检测下丘脑室周核生长抑素ｍＲＮＡ阳性神经元的表达程度和神经元体积密度（Ｖｖ）及单位体积细胞数密度（Ｎｖ）的变化。结果：在生长抑素ｍＲＮＡ的表达程度和Ｖｖ及Ｎｖ等方面，三组相比，结果为闪光间期长短不均加电刺激组（Ａ组）＞闪光间期衡定加电刺激组（Ｂ组）＞单纯闪光间期长短不均组（Ｃ组）。结论：结果表明，心理应激明显增加大鼠下丘脑室周核生长抑素的合成和分泌。

生长抑素mRNA在大鼠前脑中的分布

实验应用地高辛标记反意生长抑素cRNA探针原位杂交技术显示了生长抑素mRNA阳性神经元在大鼠前脑中的分布。结果表明:生长抑素mRNA阳性神经元广泛地分布于大鼠前脑的各个核区。其中以下丘脑和大脑皮质中阳性神经元最多。生长抑素mRNA神经元在大脑新皮质各区的分布及数目存在明显差异,中央前回和纹状皮质中阳性神经元的分布有明显的分层,其它区域阳性神经元的分布无明显分层,密度也比中央前回或纹状皮质的低,提示中央前回中生长抑素神经元的生理功能很活跃。许多核区显示的生长抑素mRNA阳性神经元有突起,说明神经元的树突不仅可以储存而且可以合成生长抑素多肽。

下丘脑生长抑素神经元的发生

实验用免疫组化PAP漂浮法研究了下丘脑生长抑素免疫反应阳性神经元的发生发育规律.结果表明生长抑素免疫反应阳性神经元的发生发育规律可归为三种模式:(1)生长抑素阳性神经元或纤维逐渐增至成年大鼠水平,代表核区为室周核和正中隆起;(2)阳性神经元或纤维数目很快增至峰值,然后又降至成年大鼠水平,该模式最普遍,大多数核区阳性神经元或纤维的发生都属于该模式;(3)阳性纤维密度很快增至峰值,然后突然消失,其代表核区只有视交叉中的生长抑素免疫反应阳性纤维.生长抑素免疫反应阳性神经无数目在发育过程中逐渐减少的原因是由于多数生长抑素免疫反应阳性神经元中生长抑素多肽减少而不是由于基因表达的停止所致.

老年大鼠下丘脑视上核和弓状核的超微结构变化

观察老年大鼠下丘脑视上核腹侧大细胞神经元和弓状核神经元的超微结构,结果显示:老年大鼠视上核腹侧血管加压素(VP)神经元的胞体较成年鼠大,胞质结构比较致密,内含许多核糖体颗粒,粗面内质网分散成小泡状,神经分泌颗粒增多,溶酶体、线粒体、高尔基氏复合体数量都较多.而弓状核内的暗细胞和亮细胞的核糖体减少,高尔基氏复合体和线粒体都变化,还有少数神经元固缩,细胞质内胞器明显减少,呈现变性现象.结果提示:老年期下丘脑视上核VP神经元机能增强;而弓状核内两种细胞都显示机能减弱的征象.老年时下丘脑各核团神经元的这种不协调性变化,可能是动物衰老的一种重要表现.

黑质纹状体多巴胺系统损伤后对大鼠纹状体SOM墓因转录神经元的影响

本实验用原位杂交组化和免疫组化方法研究了黑质纹状体多巴胺系统被６－羟基多巴胺损伤后对前脑ＳＯＭ神经元的影响。结果为损伤侧纹状体中ＳＯＭ神经元基因表达水平下降，但多肽合量无明显变化。结果提示黑质纹状体多巴胺神经系统在基因转录水平调节着纹状体中ＳＯＭ神经元的功能活动。

丙烯醛固定，PAP与胶体金免疫电镜双标记技术在神经细胞内抗原标记的应用

本实验采用了PAP和胶体金免疫电镜双标记技术,对下丘脑室旁核神经元內进行标记,证实了室旁核内有血管加压素与生长抑素共存的神经元.为了加强抗原的固定效果,提高免疫反应的敏感性,我们采用了丙烯醛固定的方法,对比了浸泡固定和灌流固定的效果,在电镜水平证实了丙烯醛浸泡固定同灌流固定一样,均能获得良好的神经组织的超微结构和阳性反应。同时,我们分别采用了包埋前PAP与胶体金双标记和包埋前PAP结合包埋后胶体金双标记两种方法。结果表明,包埋后胶体金染色比包埋前较易发现阳性标记。

急性颅脑伤后大鼠下丘脑β-内啡肽神经元变化的免疫细胞化学观察

实验应用免疫细胞化学和图像分析仪对急性颅脑伤即刻、1、3、6小时后大鼠下丘脑中β-内啡肽进行观察。结果发现:损伤即刻、1小时后β-内啡肽神经元在数目、阳性反应面积及灰度均明显减少(P<0.01),且胞体内阳性颗粒变形和破损。而3、6小时后,β-内啡肽含量有所增加(P>0.05),且胞体内阳性反应物重新出现于膜被颗粒中。故从伤后β-内啡肽神经元的形态学变化,可推测下丘脑中β-内啡肽参与了急性颅脑伤的病理生理过程。

心理应激对下丘脑OT和AVP神经元的影响

采用心理应激大鼠模型，免疫组化和图像分析系统，检测下丘脑精氨酸加压素（ＡＶＰ）和催产素（ＯＴ）神经元的变化。结果表明：下丘脑ＡＶＰ神经元，尤其室旁核（ＰＶＮ）和视上核（ＳＯＮ）的ＡＶＰ神经元，是参与或调控心理应激的主要神经元；在此时，下丘脑的ＯＴ反应皆较弱，但ＰＶＮ的ＯＴ阳性神经元数目已增多。还对心理应激后正中隆起（ＭＥ）的外带处ＯＴ阳性纤维不增加而ＡＶＰ增多。