医学细胞生物学综合性实验教学的设计与实施

在实验课教学中开展综合性实验是医学细胞生物学实验课教学改革的重要内容。介绍的综合性实验以小鼠胚胎干细胞的培养和基因转染为主线,穿插细胞的基本特征、细胞增殖动力学、细胞骨架、细胞融合及染色体的制备等教学内容,基本包括了常规医学细胞生物学实验课教学的主要内容。从课程内容、课程实施、课程小结等方面来介绍这一综合性实验课程的开展情况。

依托医学细胞生物学课程,以专业特色推进干细胞教学

干细胞研究是当今生命医学领域的前沿,由于其在生物和临床医学领域有非常强的应用潜力和理论价值受到世界各国的高度关注。以医学细胞生物学课程为依托,专业化、针对性地进行干细胞生物学的教学,使得医学院校各个专业学生快速地理解专业相关干细胞生物学基础知识和前沿进展,是培养专业人才、提高教学质量的有效途径。

著名细胞生物学家施履吉

施履吉先生是我国著名的细胞生物学家和遗传学家。1917年11月26日生于江苏仪征，6岁丧父，由母亲教养成人。1935年，他从上海惠平中学毕业，考入浙江大学园艺系，后因意识到“吃饭问题”对于当时中国的重要性，便由园艺专业改读了育种专业。

精原干细胞的生物学特征

哺乳动物生精上皮是由高度复杂而排列有序的细胞群落组成 ,其生殖细胞在有丝分裂、减数分裂及减数分裂后细胞中经历着生成精子的变化过程。目前可利用动物模型研究精原细胞分化的停止和再启动 ,以探讨精原干细胞再生和分化的控制因素。生殖细胞凋亡是精子形成过程中不可避免的环节 ,其调节机制的研究已取得显著的进展。另外 ,精原干细胞的移植今后可能有重要的实际应用。

应激状态下大鼠胃壁细胞H^+-K^+-ATP酶活性测定及电镜酶细胞化学研究

目的:探讨应激状态下大鼠胃壁细胞H+-K+-ATP酶活性及电镜酶细胞化学染色的变化。方法:将24只SD大鼠随机分为对照组、应激组和应激+奥美拉唑(OM)组,采用水浸-束缚应激(WRS)动物模型,检测胃粘膜溃疡指数(UI)和壁细胞H+-K+-ATP酶活性,观察壁细胞超微结构变化及H+-K+-ATP酶细胞化学染色结果。结果:应激组胃粘膜UI和壁细胞H+-K+-ATP酶活性明显高于对照组(P<0.01和P<0.05),而应激+OM组UI和H+-K+-ATP酶活性明显低于应激组(P<0.01);电镜下对照组壁细胞呈静息状态,应激组壁细胞内分泌小管密集呈激活状态,而应激+OM组分泌小管明显扩张,绒毛稀少;酶细胞化学染色显示对照组壁细胞的分泌小管和顶部质膜有少量黑色点状酶反应产物沉积,应激组壁细胞的分泌小管可见多量的、密集分布的黑色点状酶反应产物,而应激+OM组分泌小管上几乎无反应产物沉积。结论:应激状态下大鼠胃壁细胞H+-K+-ATP酶活性升高,且与壁细胞超微结构改变相一致,提示胃酸是应激性溃疡发生的重要因素之一。

干细胞样肝原始细胞的分离和鉴定

目的 :证实小鼠胎肝中肝干细胞的存在。方法 :小鼠胎肝细胞的分离培养和免疫细胞化学等。结果 :从小鼠胎肝组织中成功地分离得到了AFP、CD34及Albumin等特异性分子标记阳性、并呈集落样生长的细胞系。结论 :小鼠胎肝中存在具有干细胞特性的原始细胞 。

小鼠胚胎干细胞向成牙本质样细胞的诱导分化

目的探讨胚胎干细胞(ES细胞)向成牙本质样细胞诱导分化的方法。方法首先通过悬浮培养的方式,将ES细胞诱导分化形成拟胚体,然后将拟胚体细胞与牙髓成纤维细胞通过Transwell培养系统共培养,研究拟胚体细胞向成牙本质样细胞的分化情况。结果RT-PCR结果显示,拟胚体细胞与牙髓成纤维细胞共培养10d后,可检测到成牙本质细胞的特征性分子——牙本质涎磷蛋白(DSPP)的表达;共培养15d后,表达有所增强。而单独培养的拟胚体细胞,则始终未检测到DSPP的表达。结论通过与牙髓成纤维细胞共培养,可以促进胚胎干细胞向成牙本质样细胞分化。

用精原细胞介导法制备乙肝病毒X基因转基因小鼠的实验研究

目的 探讨精原细胞介导法制备乙肝病毒 X基因转基因小鼠的可行性。方法 构建乙肝病毒 X基因表达载体 pc DNA3- X;应用微量注射针将脂质体包裹的 pc DNA3- X表达载体直接注入 C57BL/ 6 N雄性小鼠睾丸的曲细精管内 ,于第一次注射后 6周 ,与雌鼠交配 ,用 PCR法和免疫组化法检测仔鼠基因组中的外源 DNA和肝组织中表达的 p X蛋白。结果 测序结果与文献报道一致 ,并且 X基因在 Hela细胞中表达 ;共产仔鼠 16只 ,其中 1只为阳性仔鼠 ,阳性率为 6 .2 5 %。结论 初步证明用精原干细胞介导法制备

通过胚胎干细胞途径获得的嵌合体小鼠中neo基因在各组织中的分布

为探讨小鼠胚胎干细胞参与早期胚胎发育的潜能 ,以neo基因作为目的基因进行了胚胎干细胞的转染 ,经G41 8的筛选 ,获得表达neo基因的单克隆细胞 ,挑取部分克隆扩大 ,进行小鼠囊胚腔注射 ,再重新植入小鼠子宫 ,共注射了 60个囊胚 ,分别回输到 5只假孕小鼠 ,在子代中得到了携带有neo基因的嵌合体小鼠。通过对嵌合体小鼠各组织PCR分析发现 ,neo基因可以在皮肤、肝脏。

绿色荧光蛋白标记的D氨基酸氧化酶基因在人宫颈癌细胞中的表达研究(英文)

为了探讨绿色荧光蛋白标记的红色酵母D 氨基酸氧化酶 (DAAO)基因在人宫颈癌细胞 (HeLa细胞 )中的表达及其功能 ,采用基因重组技术构建了含有CMV启动子和EGFP、DAAO基因开放阅读框 (ORF)的真核表达载体 pIRES DAAO。脂质体法转染HeLa细胞 ,荧光显微镜下观察转染细胞中绿色荧光蛋白的表达 ,流式细胞术分析转染效率并筛选荧光阳性细胞 ,命名为HeLa D。以不同浓度的前药D Ala处理HeLa D细胞 ,MTT法检测细胞存活率。结果显示 ,荧光显微镜下可见绿色荧光蛋白在HeLa D细胞中表达 ,流式细胞术成功筛选出HeLa D细胞。前药D Ala能明显杀伤HeLa D细胞。结果表明 ,EGFP可作为报告基因快速筛选DAAO表达载体转染的细胞 ,DAAO/D

胚胎干细胞的基因转录调控

胚胎干细胞作为一种具有多潜能性和自我更新能力的细胞,在人类等高等生物发育中占有重要地位;基于这一特性,胚胎干细胞在临床上具有极其广阔的应用前景。转录因子OCT4、SOX2和NANOG通过调节胚胎干细胞的基因转录,对其多潜能性和自我更新能力具有关键性的调控作用。对这一作用机制的研究,将对人类早期发育的了解和胚胎干细胞的临床应用具有积极意义。

一种新型肿瘤干细胞标记物CD133

CD133蛋白是在人类造血干/祖细胞上发现的一种跨膜糖蛋白,最初被认定为造血干细胞的特异性标志,但后来发现CD133蛋白在神经干细胞、表皮干细胞、内皮祖细胞等多种干/祖细胞中都有表达。近年的研究发现,CD133在白血病干细胞以及脑肿瘤干细胞、大肠癌干细胞、前列腺癌干细胞、肝癌干细胞等多种实体肿瘤干细胞中均有表达,提示CD133可能是肿瘤干细胞的一种广谱标志物,在肿瘤干细胞的分选和鉴定中具有一定的参考价值。

乙肝病毒X蛋白诱导HeLa细胞和转基因小鼠肝细胞凋亡的研究

背景与目的:探讨乙型肝炎病毒X蛋白在细胞凋亡中的作用。材料与方法:采用基因重组技术构建乙型肝炎病毒x基因的真核表达载体pcDNA3-HBx。脂质体FuGE NE6转染HeLa细胞,并用蛋白印迹检测pcDNA3-HBx在HeLa细胞中的表达。流式细胞术检测细胞凋亡率。结果:成功构建了可在真核细胞中稳定表达X蛋白的HBx基因真核表达载体pcDNA3-HBx。稳定转染pcDNA3-HBx DNA的HeLa-Xs细胞的凋亡率为9.8%,较空白HeLa细胞的凋亡率(0.4%)以及对照细胞HeLa-Vs细胞的凋亡率(1.3%)高;两只转基因小鼠肝细胞的细胞凋亡率分别为54.4%和40.4%,较正常小鼠肝细胞的细胞凋亡率(6.8%)明显增高。结论:X蛋白可在体外和体内诱导细胞凋亡。

Caspase与细胞凋亡

细胞凋亡是细胞生长、发育过程中一个重要的生命现象 ,而目前发现的一组caspase的蛋白酶参与了凋亡的各个时期。其中 ,死亡受体和线粒体是对外来有害刺激或死亡信号进行加工处理 ,并决定是否启动凋亡通路的关键部位。

关于人胚胎干细胞的几个问题

８０ 年代初分离培养成功的小鼠胚胎干细胞已被广泛应用于发育生物学的研究、基因功能的鉴定和人类疾病动物模型的建立等许多领域。最近又成功地分离培养了人胚胎干细胞，这种细胞同样具有高表达的端粒酶活性、正常的染色体组型及其它哺乳动物胚胎干细胞表面标志等全能细胞的基本特征。经过四至五个月的体外连续培养仍能保持其全能性，并能发育成滋养层和内中外三个胚层。人胚胎干细胞对于人类本身的生长发育、器官移植、基因治疗和药物评价等方面可能有重要意义。

显微注射法和精原干细胞介导法制备乙肝病毒X基因转基因小鼠的方法学比较

目的 探讨经济简便有效的制备转基因小鼠的方法。方法 分别将线形和环状乙肝病毒 X基因表达载体 pc DNA3- X按常规显微注射入小鼠受精卵 ,导入假孕雌鼠 ,同时应用微量注射针将脂质体包裹的 pc DNA3-X表达载体直接注入 C57BL/ 6 N小鼠雄性小鼠睾丸的曲细精管内 ,运用 PCR法和免疫组化法对所有转基因仔鼠进行鉴定 ,比较这两种方法的优缺点。结果 显微注射法繁琐 ,技术要求高 ,阳性率相对较高 ,达 16 .6 %。精原干细胞介导法技术简便 ,阳性率为 6 .2 5 %。结论 初步证明用精原干细胞介导法是一种经济简便有效的制备

pdx-1基因克隆及其在人肝癌细胞系SMMC-7721中的表达

背景与目的克隆小鼠胰十二指肠同源框-12(PEGFP-C1pdx-1)基因,并构建pdx-1的表达载体。材料与方法通过RT-PCR方法从小鼠胰腺总RNA中克隆pdx-1基因,并将该基因构建到pEGFP-C1和pcDNA3.0中获得pdx-1的表达载体。通过观察荧光和RT-PCR方法检测表达载体转染SMMC-7721后pdx-1基因在细胞中的表达。结果克隆了883bp的pdx-1全长cDNA,成功构建了pEGFP-C1pdx-1和pcDNA3pdx-1两种表达载体。pEGFP-C1pdx-1转染SMMC-7721后,可观察到绿色荧光仅局限于细胞核中;通过RT-PCR方法在转染后的细胞中都检测到了pdx-1基因的转录。结论pdx-1表达载体的构建为进一步研究pdx-1基因在胰腺发育和肝干细胞增殖与分化方面的作用奠定了基础。

狗牙髓血管内皮细胞白细胞介素-8的免疫组化表达在自身修复过程中的可能意义

目的:研究白细胞介素-8(IL-8)在狗颌面部火器伤间接损伤牙髓中的表达情况。方法:采用直径5.80mm制式枪弹致伤狗下颌部的模型,并利用免疫组化染色及定量分析方法检测颌面部火器伤后不同时间、下颌不同牙齿的牙髓组织中IL-8的动态变化。结果:IL-8在伤后牙髓组织中有阳性表达,并随时间的改变,呈动态变化过程。结论:狗牙髓的血管内皮细胞能分泌合成IL-8,可能参与火器性牙髓炎症发生、发展,并与牙髓损伤、修复有关。