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抗Granulysin多克隆抗体的制备及鉴定
1
作者
钱王争
陈孙孝
+5 位作者
周晔
谷明莉
陈燕
孔宪涛
邓安梅
仲人前
《中国现代医学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2007年第11期1320-1323,共4页
目的构建人颗粒溶素(granulysin,GNLY)质粒并在大肠杆菌中表达,纯化得到9kD目的蛋白片段,免疫新西兰大白兔制备兔抗颗粒溶素多克隆抗体。方法采用RT-PCR的方法获得编码人颗粒溶素的cDNA序列,将测序正确的片段克隆入pET-28a(+),构建pET28...
目的构建人颗粒溶素(granulysin,GNLY)质粒并在大肠杆菌中表达,纯化得到9kD目的蛋白片段,免疫新西兰大白兔制备兔抗颗粒溶素多克隆抗体。方法采用RT-PCR的方法获得编码人颗粒溶素的cDNA序列,将测序正确的片段克隆入pET-28a(+),构建pET28a(+)-GNLY表达载体。在大肠杆菌BL21(DE3)plysS中IPTG诱导下表达6×His-融合蛋白,纯化后免疫新西兰兔,制备兔抗人颗粒溶素血清,以Western Blotting和ELISA方法分析其特异性和效价。结果6×His融合蛋白免疫新西兰兔成功获得多克隆抗体,Western Blotting结果显示制备的抗体具有较高的特异性,ELISA显示效价为1∶6000。结论获得了纯化的颗粒溶素9kD蛋白和anti-GNLY多抗血清,为今后对疾病中CTL和NK细胞活性的研究打下了基础。
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关键词
颗粒溶素
融合表达
抗体制备
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职称材料
题名
抗Granulysin多克隆抗体的制备及鉴定
1
作者
钱王争
陈孙孝
周晔
谷明莉
陈燕
孔宪涛
邓安梅
仲人前
机构
第二军医大学长征医院
(
全军
临床
免疫
中心
)
实验
诊断
科
出处
《中国现代医学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2007年第11期1320-1323,共4页
基金
国家自然科学基金(30471616)
上海市重大科技攻关基金(04DZ19116)
+2 种基金
上海市重点科研支撑条件项目(051409012)
上海市重点基础研究项目(05JC14052)
上海市青年科技启明星计划(QMX01423)。
文摘
目的构建人颗粒溶素(granulysin,GNLY)质粒并在大肠杆菌中表达,纯化得到9kD目的蛋白片段,免疫新西兰大白兔制备兔抗颗粒溶素多克隆抗体。方法采用RT-PCR的方法获得编码人颗粒溶素的cDNA序列,将测序正确的片段克隆入pET-28a(+),构建pET28a(+)-GNLY表达载体。在大肠杆菌BL21(DE3)plysS中IPTG诱导下表达6×His-融合蛋白,纯化后免疫新西兰兔,制备兔抗人颗粒溶素血清,以Western Blotting和ELISA方法分析其特异性和效价。结果6×His融合蛋白免疫新西兰兔成功获得多克隆抗体,Western Blotting结果显示制备的抗体具有较高的特异性,ELISA显示效价为1∶6000。结论获得了纯化的颗粒溶素9kD蛋白和anti-GNLY多抗血清,为今后对疾病中CTL和NK细胞活性的研究打下了基础。
关键词
颗粒溶素
融合表达
抗体制备
Keywords
granulysin
fusion expression
antibody preparation
分类号
R446.6 [医药卫生—诊断学]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
抗Granulysin多克隆抗体的制备及鉴定
钱王争
陈孙孝
周晔
谷明莉
陈燕
孔宪涛
邓安梅
仲人前
《中国现代医学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2007
0
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