CYP3A5基因多态性与肾移植受者术后早期他克莫司个体化应用的研究

目的观察CYP3A5基因多态性对肾移植受者术后早期他克莫司（tacrolimus，Tac）浓度/剂量比值（blood drug concentration/dose，C/D）的影响，探讨适合不同基因型受者的Tac起始剂量。方法按CYP3A5基因型将157例肾移植受者分为表达组（CYP3A5*1/*1型和CYP3A5*1/*3型患者，72例）、不表达组（CYP3A5*3/*3型患者，85例）。比较不同基因型患者之间术后Tac C/D比值、急性排斥反应与药物不良反应的发生率；记录不同基因型患者起始Tac剂量及达到肾移植术后早期有效目标药物浓度（7～14μg/L）的间隔时间。结果 CYP3A5表达组患者术后7、14、30天的C/D比值均低于不表达组（均P＜0.05），术后1个月组间急性排斥反应发生率差异无统计学意义（P＞0.05），而不表达组药物不良反应发生率高于表达组（P＜0.05）；表达组及不表达组患者术后起始剂量无明显差异（分别为0.129、0.132 mg/kg，P＞0.05）。但表达组患者达到目标浓度时间较不表达患者明显缩短（P＜0.05）。结论受CYP3A5基因多态性影响，*1/*1和*1/*3型患者早期要达到目标血药浓度，需提高该组患者的起始用药剂量，而*3/*3型患者则应适当降低起始剂量。根据CYP3A5基因多态性作为Tac个体化用药的依据，可以减少早期急性排斥反应及不良反应发生率，提高肾移植的临床效果。

创伤的液体治疗新进展

创伤及大手术后通常存在有效循环血容量不足，机体产生微循环、神经内分泌等一系列病理生理改变．继而出现高能量消耗、高分解代谢、高血糖、代谢性酸中毒等内环境紊乱。若未予及时处理。持续而过度的应激反应将导致机体营养供给不足，使组织细胞损害加重、伤口愈合缓慢，易伴发感染，甚至出现休克、器官功能衰竭，危及生命。液体治疗是创伤患者临床治疗的重要手段．现就创伤的液体治疗最新进展综述如下。

水溶性一氧化碳释放分子抑制供肾树突状细胞活化减轻移植后排斥反应

目的研究水溶性一氧化碳释放分子3（CORM-3）减轻小鼠肾移植后排斥反应的作用及机制。方法以C57BL／6J小鼠为供鼠，Balb／c小鼠为受鼠，采用随机数字表法将供、受鼠分为2组，制备小鼠肾移植模型。CORM-3组受鼠接受经CORM-3预处理的供肾，iCORM组受鼠接受经无CO活性的iCORM预处理的供肾。术后检测各组受鼠的血清肌酐（SCr）水平，观察各组移植肾组织的病理改变，记录各组移植肾存活时间。以C．FVB-Tg（Itgax-DTR／GFP）57Lan／J小鼠为供鼠，Balb／czb鼠为受鼠，肾移植后24h通过流式细胞仪检测移植肾内供鼠rDC的活化情况。结果术后iCORM组和CORM-3组间移植肾中位存活时间分别为40．5和70d（P〈0．05）；术后两组受鼠的SCr水平均进行性升高，但CORM-3组受鼠的SCr水平始终保持在较低的水平（P〈0．05或P〈0．01）；与正常小鼠肾组织相比，术后第4周iCORM组受鼠的移植肾间质出现弥漫性单个核细胞浸润，中度肾小管炎症，以及部分肾小球硬化；CORM-3组移植肾组织单个核细胞浸润较iCORM组明显减轻，肾小球与肾小管形态基本正常。移植后24h，iCORM组和CORM-3组移植肾内供鼠rDC表面均高表达CDS0和CD86，表明rDC处于活化状态，而CORM-3组rDC表面CD80和CD86的表达较iCORM组明显减少（P〈0．05）。结论CORM-3可显著减轻同种肾移植小鼠的排斥反应，改善移植肾功能，其机制可能是CORM-3抑制了移植后供鼠rDC的活化。

乙醛脱氢酶2介导乙醇预处理减轻肾小管上皮细胞缺血再灌注损伤的作用

目的研究乙醛脱氢酶2（ALDH2）介导乙醇预处理减轻小鼠肾小管上皮细胞（TEC）缺血再灌注（IR）损伤的作用。方法取C57BL／6J小鼠的TEC，进行原代培养。小鼠TEC经乙醇预处理3h后，建立体外模拟IR的模型，检测细胞的乳酸脱氢酶（LDH）漏出率，观察乙醇预处理减轻TEC的IR损伤的作用。采用已构建的ALDH2的小干扰RNA（ALDH2-siRNA）转染TEC，转染48h后采用蛋白质印迹法验证ALDH2蛋白的变化情况，检测ALDH酶活性的改变，然后进行乙醇预处理和模拟IR操作，最后检测TEC的LDH漏出率，分析ALDH2在乙醇预处理减轻TEC的IR损伤中的作用。结果乙醇预处理显著降低了IR后小鼠TEC的LDH漏出率，验证了乙醇预处理减轻小鼠TEC的IR损伤的作用；转染ALDH2-siRNA后，TEC的ALDH2蛋白．含量下降82．1％，ALDH酶活性下降了67．3％。在下调ALDH2表达之后，乙醇预处理减轻TEC的IR损伤的作用几乎消失。结论乙醇预处理可以减轻小鼠TEC的IR损伤，ALDH2酶在此效应中发挥了重要作用。

应用原代培养的小鼠肾小管上皮细胞建立体外模拟缺血再灌注损伤模型

目的原代培养小鼠。肾小管上皮细胞（TEC），建立小鼠TEC体外模拟缺血再灌注（IR）的模型。方法切取C57BL／6J小鼠肾脏外侧髓质，用I型胶原酶消化后进行原代培养，采用免疫组织化学法进行鉴定。将贴壁生长的TEC用石蜡油覆盖模拟缺血过程，60min后更换全培养基模拟再灌注过程。在更换培养基后不同时间点收集细胞，抽提RNA，采用实时荧光定量聚合酶链反应检测肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、白细胞介素1β（IL-1β）和IL-6mRNA的表达；在再灌注后24h收集细胞培养上清液，采用酶联免疫吸附试验检测各细胞因子蛋白的表达。结果经过原代培养的小鼠TEC呈上皮细胞特有的“铺路石”状，细胞胞浆内高表达细胞骨架蛋白18。与对照组相比，IR组TEC在更换培养基后TNF-α、IL-1β和IL-6的转录水平均明显增高。TNF-αmRNA表达量在更换培养基后0．5h达峰，约为对照组的（24．45±6．51）倍（P〈0．01），随后逐渐下降；在更换培养基后IL-113mRNA表达量呈逐渐上升的趋势，更换培养基后6h约为对照组的（15．27±4．29）倍（P〈0．05）；IL-6mRNA表达量在更换培养基后3、h达峰，约为对照组的（11．19±4．55）倍（P〈0．01）。与对照组相比，1R组TEC在更换培养基后24h，上清液中TNF-α、IL-1β和IL-6的蛋白表达均明显增高。结论小鼠肾脏外侧髓质经分离、消化后可获得高纯度的原代培养TEC；应用石蜡油可以成功建立小鼠TEC体外模拟IR的模型。