白念珠菌钙调蛋白定点突变重组菌株的构建和鉴定

目的 :构建白念珠菌钙调蛋白 (Cm d1)定点突变重组菌株 ,为进一步探讨钙调蛋白基因突变对真菌生长周期及致病性的影响奠定基础。 方法 :将含白念珠菌钙调蛋白基因 (CMD1)定点突变的重组质粒转染 CMD1缺陷 HIS3+重组单倍体菌株 ,用 His/ Trp省却培养基和 His/ Trp/ U ra省却培养基联合选择培养筛选到 Cmd1定点突变酵母菌株。结果 :经选择培养筛选得到能在 His/ Trp省却培养基上生长而不能在 His/ Trp/ Ura省却培养基生长的菌株 4株。结论 :成功构建了 4株 Cm d1定点突变重组菌株 ,为进一步探讨 Cmd1定点突变对白念珠菌生物学特性及致病性的影响奠定基础。

白念珠菌钙调蛋白基因单点突变重组质粒的构建和鉴定

目的 :构建白念珠菌钙调蛋白基因 (CMD1)单点突变重组质粒 ,为进一步探讨 CMD1突变对真菌生长周期及致病性的影响奠定基础。方法 :采用 PCR定点突变法 ,将 CMD1编码 C端 3个苯丙氨酸 (F89、F92和 F141)的碱基分别定点突变成编码丙氨酸的碱基 ,构建 CMD1单点突变重组表达质粒 ,并进行序列测定。结果 :测序结果证实 ,所构建的 3个重组质粒均含有相应的 CMD1定点突变后的序列 ,F89+:TTC→ GCT;F92 +:TTT→ GCC;F141+:TTT→ GCC。 结论 :成功构建了 3个CMD1单点突变重组表达质粒 ,为后续研究奠定了基础。

白念珠菌钙调蛋白定点突变对重组菌株形态与生长的影响

目的 :研究白念珠菌钙调蛋白 (Cm d1)定点突变对重组菌株生长状态的影响。 方法 :以不同的培养温度培养 Cmd1定点突变重组菌株 ,分析其温度敏感性 ,在光镜下观察 Cmd1定点突变后重组菌株形态发生和生长速度的变化。结果 :重组菌株 B(F92 +)和 E(F89+F141+)菌株具有温敏性 ,在适当温度下才能生长 ,而重组 A(F89+)和 C(F141+)菌株无温敏性。光镜观察发现对照组、重组菌株 A和 C细胞芽体呈圆形或椭圆形 ,芽颈较短 ;而 B和 E菌株可见多数为细长的芽体 ,但也可见少许为圆形和椭圆形的芽体。 B和 E菌株培养早期的菌体总数明显少于对照组、A和 C菌株的菌体总数 (P<0 .0 5 )。结论 :Cmd1F92 +和 F89+F141+定点突变导致重组菌株具有温度敏感性 。