颏下动脉带蒂皮瓣的临床应用解剖

目的 :应用颏下动脉为蒂的皮瓣 ,修复颜面部软组织缺损。方法 :对 1 4例成人男性尸体头部标本行大体及显微解剖。结果 :根据血管走行差异分 :1型 :主干经二腹肌前腹浅面到下颌骨下缘表面至皮下占 3 6% ,2型 :主干经二腹肌前腹深面到下颌骨下缘深面至皮下占 64% ;1型血管位置表浅 ,易于分离 ,且蒂较长 ,旋转度大 ,2型相比反之。结论

无细胞异种真皮与表皮细胞悬液复合移植的研究

目的 研究用无细胞异种真皮与表皮细胞悬液复合移植的效果及组织学变化。方法 将 4 2只裸鼠分为实验组及对照组 ,实验组于背部全层皮肤缺损创面移植无细胞异种真皮及人表皮细胞悬液 ,对照组单纯移植人表皮细胞悬液。于术后 2、3和 5周计算创面愈合率 ,术后 3、6和 12周计算创面收缩率 ,并取活检行组织学检测。结果 实验组创面愈合率高 ,分别为 79.1%± 4 .5 % ,89.6 %± 4 .4 % ,98.1%± 3.4 % ,收缩程度轻为 16 .3%± 5 .2 % ,2 5 .5 %±7.2 % ,32 .5 %± 7.1% ,外观平整 ,质地良好 ,胶原纤维排列整齐 ,基底细胞桥粒 -半桥粒结构及基底膜等结构重建明显 ,未见明显的急性排斥反应 ;对照组创面愈合率分别为 6 9.2 %± 4 .9% ,78.2 %± 7.6 % ,90 .6 %± 5 .0 % ,收缩率为2 0 .5 %± 6 .0 % ,31.3%± 6 .9% ,4 4 .6 %± 7.2 % ,与实验组相比 ,均有统计学意义 (P<0 .0 5 ) ,愈合后的表皮质地薄 ,易破溃 ,胶原纤维紊乱 ,表皮 -真皮连接结构重建不明显。结论 无细胞异种真皮与表皮细胞悬液复合移植修复创面 ,可改善创面愈合质量。

pcDNA3.1-Annexin A1真核表达载体对结直肠癌细胞迁移、侵袭的影响

目的探讨Annexin A1对结直肠癌细胞迁移、侵袭能力的影响。方法构建重组质粒pcDNA3.1-AnnexinA1,转染至结直肠癌细胞株SW480中,G418筛选稳定表达株,实时荧光定量PCR、蛋白质印迹检测转染前后Annexin A1mR-NA及蛋白表达;以空载体转染组及未转染SW480细胞作为对照,通过划痕修复实验和Transwell细胞侵袭实验对转染前后细胞的迁移和侵袭能力进行比较观察和分析。结果成功构建重组质粒pcDNA3.1-Annexin A1载体;实时荧光定量PCR和蛋白质印迹检测结果均显示,重组体pcDNA3.1-Annexin A1稳定转染细胞株中Annexin A1mRNA及蛋白表达均明显高于空载体转染及未转染组细胞(P<0.01),而后两者间比较差异无统计学意义(P>0.05);重组体pcDNA3.1-Annexin A1转染组SW480细胞的迁移率(0.415±0.002)明显高于空载体转染组(0.267±0.003)及未转染组细胞(0.271±0.002),差异具有统计学意义(P<0.05),而后两者间差异无统计学意义(P>0.05);与空载体转染组(162.80±12.07)及未转染组(164.25±9.50)相比,重组体pcDNA3.1-Annexin A1转染组穿膜细胞数(221.75±12.07)增多,差异具有统计学意义(P<0.05).结论人Annexin A1基因表达上调能提高结直肠癌细胞迁移和侵袭能力。

小鼠肺微血管内皮细胞磁珠分选法分离和原代培养

背景:肺组织的功能依赖于肺微血管内皮细胞的活性,因此肺微血管内皮细胞是相关研究的重要细胞模型,但目前国内多采用的组织块贴壁法培养所得的肺微血管内皮细胞常有其他细胞混杂。目的:建立一种有效分离、培养、扩增小鼠肺微血管内皮细胞的方法。方法:采用酶消化、免疫磁珠二次分选法分离纯化小鼠肺微血管内皮细胞,贴壁培养法体外扩增,CCK-8法测定细胞的生长情况,相差显微镜观察培养细胞的形态,透射电子显微镜观察细胞的超微结构,流式细胞仪对其表型进行鉴定。结果与结论:培养所得小鼠肺微血管内皮细胞具有典型的铺路石样形态学特征,含有大量内皮细胞特有的杆状细胞器Weibel-Palade小体,较稳定地表达内皮细胞特异性表面标记CD105,不表达淋巴管内皮细胞特异性表面标记血管内皮生长因子受体3。说明免疫磁珠二次分选法可成功分离纯化小鼠肺微血管内皮细胞,体外培养所获细胞纯度高、自我更新能力强,并保留了包括构成、表面抗原表达等特性。

平阳霉素对体外培养血管内皮细胞的作用

目的研究平阳霉素对人脐静脉内皮细胞的抑制作用及其原理,以揭示其治疗头颈部血管瘤的机理。方法采用人脐静脉内皮细胞系ECV-304,用MTT实验比较平阳霉素作用24小时、48小时后的细胞抑制率,通过流式细胞术测定平阳霉素作用24小时后细胞周期、凋亡、半胱氨酸蛋白酶(Caspase3)表达的变化。结果平阳霉素作用24小时和48小时其浓度和细胞抑制率存在依赖关系,24小时各浓度抑制作用均强于48小时;平阳霉素各浓度作用24小时后,G1期百分率增高,G1期前出现亚二倍体凋亡峰,S期百分率降低,G2期百分率无明显变化。平阳霉素作用后细胞凋亡百分率随药物浓度增加而增高,Caspase3表达在平阳霉素各浓度组均增强。结论平阳霉素对脐静脉内皮细胞有确切的抑制作用,这种抑制作用主要是通过细胞凋亡实现的,Caspase3参与了平阳霉素诱导血管内皮细胞凋亡的过程。

βB2晶体蛋白基因敲除小鼠模型的建立

目的:建立βB2晶体蛋白基因敲除小鼠模型。方法:采用美国iGTL实验室的技术构建打靶载体,建立基因敲除小鼠模型。采用PCR对小鼠基因型进行鉴定,Western印迹法对晶体蛋白的表达进行鉴定。结果:PCR成功检测出3种基因型;纯合子基因敲除的小鼠未检测到βB2晶体蛋白的表达。结论:成功构建了βB2晶体蛋白基因敲除的小鼠模型。

慢性哮喘肺组织组蛋白去乙酰化酶活性降低对气道平滑肌细胞表型转变的影响

目的探讨慢性哮喘病理生理过程中肺组织组蛋白去乙酰化酶(HDAC)活性变化趋势及其对气道平滑肌细胞表型及生物学性状的影响。方法构建慢性哮喘小鼠模型,检测肺组织HDAC活性。以HDAC抑制剂曲古霉素A(TSA)刺激体外培养的大鼠气管平滑肌及人原代支气管平滑肌细胞,采用蛋白质印迹、MTT、Transwell及三维凝胶收缩等方法检测抑制HDAC活性对气道平滑肌细胞表型转变的影响及其相应的细胞增殖、迁移、收缩能力的变化。结果慢性哮喘组小鼠肺组织HDAC活性为(0.371±0.054)μmol/(L·μg),较正常对照组的(0.603±0.034)μmol/(L·μg)显著降低,差异有统计学意义(P<0.01)。TSA(0.5μmol/L)作用后12～24h,体外培养的大鼠气管平滑肌环及人支气管平滑肌细胞的α-sm-actin、SM22-α表达明显增加,作用后24h及48h支气管平滑肌细胞数目分别为(1.719±0.044)×104及(1.808±0.009)×104个,明显低于空白对照组的(1.911±0.048)×104及(2.537±0.01)×104个(P<0.05)。血小板源性生长因子(PDGF)诱导的支气管平滑肌细胞迁移数也在TSA作用后显著降低(88±7.632vs52±7.5,P<0.05)。此外,TSA作用24h后的三维凝胶收缩率[(9.885±7.084)%]较空白对照组[(44.844±3.808)%]及PDGF组[(41.315±7.943)%]明显降低(P<0.05)。结论慢性哮喘小鼠肺部HDAC的活性下降,可能与气道平滑肌细胞向"收缩型"转变有关,但HDAC活性下降并不增加细胞的收缩能力。

运动饮料对大鼠负重游泳训练疲劳状态的干预效应

目的:观察灌胃给予含糖、电解质、微量元素的运动饮料对于负重游泳训练SD大鼠恢复运动疲劳的作用及机制。方法:实验于2005-02/04在解放军第二军医大学长海医院中心实验室完成。①将48只7周龄SD大鼠随机分为对照组(n=12),40g/L葡萄糖组(n=18),饮料组(n=18)。将每组大鼠在水温平均(30±1)℃,水深50cm,直径50cm的陶瓷缸中用细线绳固定5g重铅块进行负重游泳训练。②游泳前实验大鼠灌胃,每只每次4mL液体,分别为生理盐水、40g/L葡萄糖、自行设计配制的运动饮料,灌胃时间每只平均15s。③第1次负重游泳30min后取出大鼠快速进行第2次灌胃。用红外线取暖器对鼠笼保温休息20min,立即进行第2次负重游泳50min,取出后快速进行第3次灌胃。以同样方式保温休息20min,进行第3次负重游泳至力竭。④力竭判断标准为大鼠沉入水中超过10s,无法浮出水面,视为力竭,记录力竭时间。结果:实验纳入48只大鼠全部完成训练,均进入结果分析,中途无脱落。①3组大鼠负重游泳持续时间的均值分别为对照组(124.00±52.11)min、40g/L葡萄糖组(138.61±83.05)min、饮料组(204.50±75.20)min。②3组大鼠力竭时间的区间分别为对照组(59～240)min、40g/L葡萄糖组(30～316)min、饮料组(108～393)min。③3组大鼠游泳至力竭时间,对照组与40g/L葡萄糖组无统计学差异,与饮料组差异有显著性意义(P=0.016);40g/L葡萄糖组与饮料组统计学差异有显著性意义(P=0.03)。结论:①含糖、电解质、微量元素的运动饮料能够明显延长大鼠负重游泳至力竭时间。②保持运动前、中、后机体的水、电解质及能量平衡是快速消除运动疲劳的有效手段。

叔丁醇治疗SD大鼠硒性白内障的疗效观察

目的:探讨叔丁醇外用滴眼液对SD大鼠硒性白内障模型(模拟老年性白内障)的治疗作用。方法:建立SD大鼠硒性白内障模型,并将实验大鼠右眼作为药物干预组,左眼作为对照组;用自行配制的叔丁醇外用滴眼液(浓度分别为25、50、75mmol/L)按时滴眼(1滴/次,3～5次/d);每日进行肉眼观察,并于用药后第5日及第10日用裂隙灯显微镜观察大鼠双眼晶状体核性病变,每日用游标卡尺(最小刻度值0.02mm)测量大鼠双眼晶状体核性斑块最大直径的改变。另选未建模的SD大鼠,用100mmol/L的叔丁醇滴眼液滴眼(1滴/次,3～5次/d),观察药物有无毒性及其他不良反应。结果:硒性白内障大鼠用药眼晶状体核性混浊斑块直径小于对照眼(P<0.01);用药眼核性混浊斑块混浊程度低于对照眼;叔丁醇滴眼液毒性低,刺激性小。结论:叔丁醇滴眼液对SD大鼠硒性白内障有一定的治疗作用。

不同化疗耐药性卵巢癌细胞侵袭转移特性的比较

目的观察不同化疗耐药性卵巢癌细胞的侵袭转移特性,并探讨其可能机制。方法体外建立卵巢癌不同梯度顺铂(DDP)耐药细胞系模型(OVCAR-3/DDP-1、OVCAR-3/DDP-2、OVCAR-3/DDP-3);MTT法、流式细胞仪、Transwell小室观察亲本细胞和耐药细胞的增殖、细胞周期分布、细胞侵袭和迁移等生物学特性的变化;ELISA法测定细胞培养上清液中基质金属蛋白酶-2(MMP-2)、组织金属蛋白酶抑制因子-2(TIMP-2)、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)、组织金属蛋白酶抑制因子-1(TIMP-1)的浓度。结果成功建立不同梯度顺铂耐药细胞系模型,OVCAR-3/DDP-1、DDP-2、DDP-3细胞的耐药指数依次为3.87、8.39、13.42。耐药细胞均较亲本细胞增殖缓慢,G0/G1期细胞比例增加,S期细胞比例减少,其中OVCAR-3/DDP-2、DDP-3与亲本细胞比较差异有统计学意义(P<0.05)。与亲本细胞相比,耐药细胞伴随其耐药性的增加,侵袭转移能力逐渐增强,其中OVCAR-3/DDP-2、DDP-3与亲本细胞相比差异有统计学意义(P<0.05)。细胞上清液中MMP-2/TIMP-2、MMP-9/TIMP-1的比值随顺铂耐药性的增加而逐渐上升,耐药细胞与亲本细胞相比差异均有统计学意义(P<0.05)。结论对顺铂耐药性的产生和增加可促进卵巢癌细胞的侵袭和转移,可能部分与耐药细胞MMP-2/TIMP-2、MMP-9/TIMP-1比值上调有关。

中长跑运动员大强度训练后心肌功能改变及肌酸激酶的评估价值

目的:分析中长跑运动员有氧与无氧训练后出现的异常高肌酸激酶水平及对运动员心肌功能的影响。方法:于2003/03选取上海市及上海体育学院田径队中长跑组二级以上运动员为观察对象。随机分为有氧组(n=12)和无氧组(n=14)。根据个人运动专长,安排相应专项训练。12名进行有氧训练项目:先进行6000m跑耐力训练,间歇8min,进行8000m速度跑,再间歇6min后,冲刺2000m;14名进行无氧训练项目:进行6000m跑耐力训练,间歇8min,进行2000m速度跑,间歇4min,再进行两次600m跑,其间间歇2min,随后进行两次200m冲刺,成绩:男24s2～28s5,女28s7～31s6,其间间歇2min。分别在训练前及运动后即刻抽静脉血,检测肌酸激酶及其他心肌功能相关指标的改变。结果:26名运动员均完成全部训练,进入结果分析。①有氧组和无氧组运动员训练前,肌酸激酶基础值均处于较高水平[(367.75±312.53),(380.64±286.45)U/L]。②运动员训练后,所选8项指标乳酸、乳酸脱氢酶、肌酸激酶、肌酸激酶同工酶、碱性磷酸酶活性及肌红蛋白、血红蛋白、血糖水平均呈升高趋势。③8项指标在运动后的升高幅度,无氧组均大于有氧组。④两组运动员训练前后,乳酸、乳酸脱氢酶、肌酸激酶、肌酸激酶同工酶、碱性磷酸酶活性及肌红蛋白水平改变均呈显著差异。⑤训练监测过程中,有3名运动员肌酸激酶、肌酸激酶同工酶及肌红蛋白的运动前基础值及运动后升高值均呈高度异常。结论:①不同运动项目及训练方式对心肌功能相关指标的影响存在明显差异。②联合应用乳酸、肌酸激酶、肌酸激酶同工酶、活性肌红蛋白等检测,可以更有效地监控运动员心肌损伤。③对训练后出现异常高肌酸激酶水平的运动员应及时观察肌钙蛋白水平。

MAPK在葡萄糖及AngⅡ致血管平滑肌细胞增殖反应中的作用

目的:研究丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号途径在葡萄糖(GS)和/或血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)介导大鼠动脉平滑肌细胞促增殖中的作用及其可能的调控机制.方法:实验以平滑肌细胞蛋白合成速率和蛋白含量为平滑肌细胞增殖的指标,以平滑肌细胞3H-亮氨酸掺入率表示细胞蛋白质合成速率,通过3H-胸苷(3H-TdR)反映平滑肌细胞DNA的代谢及细胞增殖情况;并通过给予PD098059及高浓度葡萄糖(HG)预处理,观察它们对细胞蛋白合成、DNA代谢及细胞增殖的影响.结果:①AngⅡ(10-7mol/L)处理平滑肌细胞,3H-胸苷掺入率明显增高;HG(25×10-3mol/L)处理平滑肌细胞,3H-胸苷掺入率明显增高;AngⅡ+HG处理平滑肌细胞3H-胸苷掺入率显著增高.②AngⅡ增加3H-胸苷掺入的作用可明显被PD098059所抑制;AngⅡ+HG增高3H-胸苷掺入的作用也可被PD098059所抑制.③AngⅡ(10-7mol/L)处理平滑肌细胞,3H-亮氨酸掺入率明显增高;HG(25×10-3mol/L)处理平滑肌细胞,3H-亮氨酸掺入率增加;AngⅡ+HG处理平滑肌细胞3H-亮氨酸掺入率显著增加.④AngⅡ增加3H-亮氨酸掺入的作用可部分被PD098059所抑制;AngⅡ+HG增加3H-亮氨酸掺入的作用可显著被PD098059所抑制.结论:应用MAPK的特异性抑制剂PD098059抑制血管平滑肌细胞的增殖,证明MAPK激活在GS和/或AngⅡ导致平滑肌细胞增殖反应中有重要作用.

α-促黑素细胞激素在瘢痕疙瘩中的表达

目的:研究α-促黑素细胞激素在瘢痕疙瘩中的表达及对其成纤维细胞增殖的影响,为治疗瘢痕疙瘩提供新的途径。方法:取人的瘢痕疙瘩,常规石蜡包埋,同时利用组织块培养法进行成纤维细胞原代培养,DMEM培养液传代、扩增培养,以细胞形态学鉴定成纤维细胞。应用免疫组织化学染色方法检测瘢痕疙瘩组织中α-MSH的表达,并通过MTT法从细胞生长及增殖特性分析不同浓度的α-MSH对人瘢痕疙瘩成纤维细胞生长和增殖的影响。结果:瘢痕疙瘩组织能够表达α-MSH,1×10-6～1×10-8mmol/L质量分数的α-MSH可明显促进瘢痕疙瘩成纤维细胞生长、增殖。结论:瘢痕疙瘩组织能够表达α-MSH,α-MSH对体外培养的人瘢痕疙瘩成纤维细胞具有促生长和增殖作用,其有效质量分数为1×10-6～1×10-8mmol/L。

有氧及乏氧训练对运动员血清脂质的影响

目的:探讨有氧(aerob ic)及乏氧(anaerob ic)训练对血浆脂质代谢的影响,为健身强体及运动监控提供参考依据。方法:上海市及上海体院田径队中长跑运动员,根据个人运动专长,安排相应专项训练;12名进行有氧训练,14名进行乏氧训练(高强度快速、短距离跑),分别在训练前及运动后即刻抽静脉血,检测乳酸(LD)、葡萄糖(G lu)、总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、高密度胆固醇(HDL-C)、低密度胆固醇(LDL-C)、载脂蛋白AI(ApoAI)及载脂蛋白B(ApoB)等生化指标。结果:①乏氧及有氧组训练后LD水平均极显著升高(均P<0.01)。②两组训练均可使HDL-C及ApoAI水平升高(均为乏氧组P<0.01,有氧组P<0.05)。③有氧训练后TG水平呈下降趋势(12人中8人明显下降,4人微升高,但P>0.05)。④乏氧训练后TG水平及ApoB水平均升高(分别为P<0.01,P<0.05)。⑤训练后组间比较,乏氧组LD、G lu、TG水平明显高于有氧组(分别为P<0.01,P<0.01,P<0.05)。结论:①无论有氧或乏氧训练,适量运动均能增加机体抵抗动脉粥样硬化的能力。②有氧训练对脂质的调节作用优于乏氧训练。

大鼠老化进程中晶状体蛋白水溶性向水不溶性的转变

目的:研究大鼠老化进程中晶状体蛋白由水溶性向水不溶性的转变特性,探讨对老年性白内障形成的可能作用。方法:采用双向电泳法,分析SD大鼠在老化进程中不同阶段(出生后1,8d;2,8wk;8mo;1.5a)晶状体蛋白α,β,γ由水溶性向水不溶性的时相性转变特性。结果:各年龄组大鼠晶状体蛋白水溶性及水不溶性成分的双向电泳图谱模式有较大相似性。结构蛋白αA2,αB2,βB2随老化进程,其水溶性成分均呈升高趋势;水不溶性成分中αA2,βB2含量亦随年龄增长而升高,αB2在大鼠出生8mo后呈明显升高。晶状体蛋白自出生后8wk起,即发生明显的翻译后修饰(蛋白斑点增加),尤其伴侣蛋白αA2,αB2,同时也是结构蛋白)随老化其修饰成分增加十分明显,在水不溶性成分图谱中表现更为突出。出生后8wk前,βB2晶状体蛋白无论在水溶性或水不溶性成分中含量均极少;发育渐趋成熟该蛋白含量快速增加;出生8mo后成为晶状体蛋白中的主要成分,1.5a起成为含量最高的成分。结论:在大鼠老化进程中,不同晶状体蛋白其水溶性及水不溶性成分的变化趋势呈现不同特性。同种晶状体蛋白在不同年龄段存在量和/或质的变化。大鼠成长过程中晶状体蛋白变性显见于出生后8wk,其程度随老化而加重。

分泌型ICOS-mIg重组融合蛋白定量检测方法的建立和应用

目的: 建立双抗体夹心ELISA法,定量检测重组可诱导共刺激分子(ICOS)-mIg融合蛋白的分泌型表达,并对其灵敏度、特异性及线性检测范围进行评价.方法: 用分子生物学技术制备重组ICOS-mIg融合蛋白.以羊抗小鼠IgG 为包被抗体,HRP标记的马抗小鼠IgG为检测抗体,通过配对试验、方阵滴定试验及绘制mIgG浓度与A450值的标准曲线,建立定量检测重组ICOS-mIg融合蛋白的双抗体夹心ELISA法.结果: 建立了双抗体夹心ELISA法,检测的线性范围为7.8～500 μg/L,标准曲线的回归方程为: y=-0.7864+1.1635 log(x),R2=0.9911,P<0.0001.应用该方法可快速检测哺乳动物细胞表达的重组ICOS-mIg融合蛋白的分泌量.结论:建立了一种可快速定量检测重组ICOS-mIg融合蛋白分泌表达的双抗体夹心ELISA法.该法灵敏、准确、快速、实用性好,对优化ICOS-mIg融合蛋白表达细胞的筛选和大规模制备具有重要价值.

心血管疾病发病机制研究:细胞外信号调节激酶在血管紧张素Ⅱ引起血管平滑肌细胞增殖反应中的调节作用

目的:研究细胞外信号调节激酶(extracellularsignal-regulatedkinase,ERKs)信号途径在血管紧张素Ⅱ(angiotensinⅡ,AngⅡ)介导的大鼠血管平滑肌细胞(vascularsmoothmusclecell,VSMC)促增殖等反应中的作用及其可能的调控机制。方法:选用6周龄230g清洁级SD大鼠2只:本实验在长海医院中心实验室完成。实验依随机数字表分为正常对照组、AngⅡ诱导组、PD098059预处理组、U0126预处理组。每组均为3孔(n=3)。实验以通过3H-胸苷(3H-TdR)掺入率与3H-亮氨酸掺入率分别反映VSMC的DNA代谢与蛋白质合成代谢速率;并通过给予MAPK激酶特异性抑制剂PD098059及ERKs抑制剂UO126预处理,观察它们对细胞蛋白合成和DNA代谢及细胞增殖的影响。结果:①AngⅡ(1×10-7mmol/L)处理30minVSMC3H-胸苷掺入率和3H-亮氨酸掺入率均明显增高(增加207.2%,P<0.01);②AngⅡ增高3H-胸苷掺入的作用可明显被PD098059所抑制(增高抑制率52.3%,P<0.01)和完全被UO126所抑制(增高抑制率91.7%,P<0.01);③AngⅡ增高3H-亮氨酸掺入的作用可部分被PD098059所抑制(增加抑制率29.3%,P<0.05)和明显被UO126所抑制(增加抑制率64.6%,P<0.01)。结论:ERKs激活在血管紧张素Ⅱ导致VSMC增殖反应中具有重要作用,并可通过ERKs信号途径的特异性抑制剂的抑制效应,影响血管平?

不同p53状态的肝癌细胞系DNA损伤修复能力的比较

目的 观察不同 p5 3状态的肝癌细胞在DNA损伤因素存在下 ,探讨 p5 3在肝细胞癌发生过程中的作用。 方法 选用内源性表达野生型 p5 3、突变型 p5 3、p5 3全基因缺失的HepG2、PLC /PRF / 5、Hep3B肝癌细胞系 ,将含有 p5 3结合序列的CAT报告基因质粒分别转染各细胞 ,通过ELISA方法检测报告基因CAT活化情况 ,观察 p5 3功能状态 ;用细胞生长曲线比较不同p5 3状态的细胞生长速度的差异 ;给予一定剂量的紫外线照射 ,检测各细胞程序外DNA损伤修复 (UDS)能力 ;观察紫外线照射后细胞克隆形成情况 ,反映不同细胞系在紫外线照射后细胞存活率的不同。结果 报告基因CAT在HepG2细胞表达最强 ,而在PLC /PRF / 5、Hep3B肝癌细胞均处于较低水平 ,说明HepG2细胞具有功能性的p5 3表达 ;HepG2细胞生长速度明显慢于其他两种细胞 ;紫外线照射后 ,HepG2具有较好的DNA损伤修复能力以及较高的细胞生存率。 结论 野生型 p5 3具有抑制肝癌细胞生长、保持细胞良好的DNA损伤修复的功能。