肝癌组织中神经节苷脂谱改变的机理研究

目的：检测肝癌组织中唾液酸酶的活性，探讨肝癌组织中神经节苷脂谱改变（ＧＤ３含量增加）的机理。方法：以蓖麻凝集素Ⅱ与乳糖基的特异结合为基础，用神经节苷脂ＧＭ３作为水解底物包被于９６孔板，在唾液酸酶的作用下，糖链末端的唾液酸被切除而暴露出乳糖残基，用生物素标记的蓖麻凝集素与后者结合，再用ＡＢＣ法测定结合量即可检测唾液酸酶活性。结果：肝癌组织中不管是可溶性的还是膜结合性的唾液酸酶，其活性都明显低于其癌旁组织。结论：肝癌组织中神经节苷脂ＧＤ３增加的原因不仅与ＧＤ３合成酶活性的增高有关，还与其水解酶唾液酸酶活性的降低相关。

可溶性CD44－免疫球蛋白融合蛋白抑制肿瘤的体内生长

目的：确定是否可通过阻断透明质酸的细胞表面受体ＣＤ４４Ｈ与它的配体的结合而抑制肿瘤生长。方法：观察ＣＤ４４Ｈ和免疫球蛋白的可溶性融合蛋白（ＣＤ４４Ｒｇ）对转染并稳定表达ＣＤ４４Ｈ的人Ｎａｍａｌｗａ淋巴瘤细胞生长的影响。结果：ＣＤ４４Ｒｇ可抑制Ｎａｍａｌｗａ肿瘤细胞在裸鼠体内形成肿瘤的能力，但对该细胞的体外生长则无影响。结论：破坏ＣＤ４４Ｈ与其生理学配体之间的作用，可能成为控制肿瘤在体内生长的一种新的手段。

应用双重原位杂交技术定位检测肝细胞癌中乙型、丙型肝炎病毒

探索乙型肝炎病毒（ＨＢＶ）和丙型肝炎病毒（ＨＣＶ）是否可同时感染同一宿主细胞。方法：联合应用地高辛标记探针和生物素标记探针的双标记方法，成功建立起非放射性双重原位杂交技术，并应用这一技术检测了１０例肝细胞性肝癌及癌周组织细胞内乙型肝炎病毒和丙型肝炎病毒的感染情况。结果：发现ＨＢＶ、ＨＣＶ可同时感染同一宿主细胞这一独特的生物学现象。结论：认为ＨＢＶ、ＨＣＶ双重病毒感染可能并不遵循＂病毒干扰＂原则，这为了解此两种病毒在肝细胞癌发生中可能存在着的协同作用提供了新的线索。

CD44分子十六酰化干扰人T淋巴细胞CD3介导的信号传递的研究

证实细胞表面ＣＤ４４分子的十六酰化可能参与淋巴细胞的信号传递。方法：利用不同类型的ＣＤ４４单克隆抗体（Ｐ３Ｈ９、Ｂｕ５２、ＩＭ．７和ＧＫＷ．Ａ３），观察它们对ＣＤ２或ＣＤ３抗体刺激正常人外周血淋巴细胞增生的作用以及对ＣＤ４４分子十六酰化的影响。结果：所有这４种ＣＤ４４单克隆抗体与ＣＤ２单克隆抗体在刺激正常人外周血淋巴细胞和Ｙ．Ｊ．８Ｔ细胞增生方面有协同作用。ＧＫＷ．Ａ３和ＩＭ．７（而非Ｐ３Ｈ９或Ｂｕ５２）能够抑制ＣＤ３抗体刺激引起的细胞增生；同样，也只有ＧＫＷ．Ａ３和ＩＭ．７能够刺激细胞表面ＣＤ４４分子的十六酰化；而ＧＫＷ．Ａ３对ＣＤ３抗体刺激引起的细胞增生的抑制效应可被一种蛋白十六酰化的抑制剂变蓝菌素所逆转。结论：ＣＤ４４分子的十六酰化可干扰ＣＤ３抗体介导的信号传递。这些结果为细胞表面受体的十六酰化可能参与Ｔ细胞受体之间相互作用及信号传导作用的假说提供了实验依据。

分泌抗人原发性肝癌单克隆抗体杂交瘤的制备及专一性分析

目的：研制抗人原发性肝癌（ＰＨＣ）特异性单抗（ＭｃＡｂ），为肝癌的导向诊断与治疗奠定基础。方法：用人ＰＨＣ细胞系ＨｅｐＧ２免疫ＢＡＬＢ／ｃ小鼠，取其脾细胞与同源骨髓瘤细胞ＳＰ２／０融合，经间接免疫荧光染色加流式细胞仪筛选及专一性鉴定，单抗经ＰｒｏｔｅｉｎＡ法纯化，用ＳＤＳ聚丙烯酰胺凝胶电泳进行纯度测定。结果：筛选出３株能分泌抗人ＰＨＣ细胞膜单抗的杂交瘤，这些杂交瘤经３次亚克隆后仍能稳定地分泌单克隆抗体。专一性分析显示３株杂交瘤分泌的单抗均可特异性地识别人ＰＨＣ细胞。纯化的单抗属小鼠ＩｇＧｌ亚类。结论：ＭｃＡｂ与肝癌细胞具有较高的亲和力，具有潜在的导向显像和导向治疗的应用价值。