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携带融合基因CTLA4-Ig重组腺病毒载体的构建及表达
被引量:
2
1
作者
朱斌
杨甲梅
+3 位作者
钱其军
崔贞福
石文芳
吴孟超
《中华实验外科杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2003年第1期46-48,I002,共4页
目的 为进行基因转移阻断T细胞共刺激通路诱导移植免疫耐受的研究 ,构建携带融合基因CTLA4 Ig的重组腺病毒载体。方法 构建含人CTLA4 Ig的重组腺病毒载体质粒pShuttle Tracker CMV CTLA4 Ig ,与腺病毒骨架质粒 pAdEasy 1 △E1、△E3...
目的 为进行基因转移阻断T细胞共刺激通路诱导移植免疫耐受的研究 ,构建携带融合基因CTLA4 Ig的重组腺病毒载体。方法 构建含人CTLA4 Ig的重组腺病毒载体质粒pShuttle Tracker CMV CTLA4 Ig ,与腺病毒骨架质粒 pAdEasy 1 △E1、△E3共转化大肠杆菌BJ5 183 ,经细菌内同源重组 ,获得重组腺病毒质粒pAd Tracker CTLA4 Ig ,转染 2 93细胞 ,制备携带CTLA4 Ig的重组腺病毒 ,体外感染L O2细胞 72h后ELISA检测其外分泌性表达。 结果 获得携带CTLA4 Ig的重组腺病毒 ,滴度为 6× 10 1 3 PFU L ;在其感染的L O2细胞培养上清中能检测到可溶性重组蛋白CTLA4 Ig的表达 (P N =4.6 ,阳性 )。结论 制备的重组腺病毒在体外能有效感染L O2细胞 ,受感染细胞能表达、分泌可溶性的融合蛋白CTLA4 Ig ;为进行体内移植免疫耐受的基因治疗研究奠定基础。
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关键词
CTLA4-IG
重组腺病毒载体
腺病毒
基因转移
基因表达
基因治疗
免疫耐受
原文传递
同种肝移植大鼠转染融合基因人CTLA4-Ig抑制急性排斥反应
被引量:
1
2
作者
朱斌
杨甲梅
+4 位作者
钱其军
王孟龙
崔贞福
李玲芳
吴孟超
《中华器官移植杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2005年第4期199-202,共4页
目的观察同种肝移植大鼠转染融合基因人CTLA4-Ig(huCTLA4-Ig)对急性排斥反应的抑制作用。方法供者为BN大鼠,受者为Lew大鼠。将受者分为三组,A组(5只):为空白对照组,供肝冷保存时不感染腺病毒;B组(4只):为阴性对照组,供肝冷保存时感染携...
目的观察同种肝移植大鼠转染融合基因人CTLA4-Ig(huCTLA4-Ig)对急性排斥反应的抑制作用。方法供者为BN大鼠,受者为Lew大鼠。将受者分为三组,A组(5只):为空白对照组,供肝冷保存时不感染腺病毒;B组(4只):为阴性对照组,供肝冷保存时感染携带报告基因GFP 的重组腺病毒;C组(5只):为基因治疗组,供肝冷保存时,先体外后体内感染携带融合基因huCT- LA4-Ig的重组腺病毒;观察该治疗基因在受者体内的表达及其对急性排斥反应的抑制作用。结果(1)A组与B组受者均在3周内死亡,A、B组平均生存时间分别为(16.6±2.5)d和(15.5±3.1)d,C 组受者均能获得长期生存(>150 d);C组与A、B组生存期比较,差异有统计学意义(P<0.01)。(2) 移植肝病理学检查发现:术后8 d,A组与B组移植肝均发生严重的细胞性排斥。C组术后8 d,可见移植肝轻、中度的汇管区炎症,但组织损伤程度显著减轻;术后150d,可发现单核细胞浸润,但胆管保存完好,无血管损伤证据。(3)术前大鼠血清白细胞介素2(IL-2)浓度为(362.09±45.84)ng/L;肝移植术后,A、B组血清IL-2的浓度即升到较高水平(约为术前的1.5-2.5倍),而C组却始终维持在一个较低水平(接近或低于术前水平);术后3、7 d,C组血清IL-2的浓度与A、B组比较,差异均有统计学意义(P<0.01)。
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关键词
急性排斥反应
同种肝移植
融合基因
CTLA4-IG
大鼠
转染
血清IL-2
重组腺病毒
血清白细胞介素
同种异体移植肝
单核细胞浸润
基因转移系统
抑制作用
病理学检查
细胞性排斥
肝移植术后
分泌性表达
免疫抑制剂
冷保存
报告基因
原文传递
题名
携带融合基因CTLA4-Ig重组腺病毒载体的构建及表达
被引量:
2
1
作者
朱斌
杨甲梅
钱其军
崔贞福
石文芳
吴孟超
机构
第二军医大学附属东方肝胆外科医院肝胆外科研究所
出处
《中华实验外科杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2003年第1期46-48,I002,共4页
基金
国家自然科学基金资助项目 (3990 0 1 38)
上海市科学技术发展基金资助项目 (0 0 4 1 1 90 1 4 )
文摘
目的 为进行基因转移阻断T细胞共刺激通路诱导移植免疫耐受的研究 ,构建携带融合基因CTLA4 Ig的重组腺病毒载体。方法 构建含人CTLA4 Ig的重组腺病毒载体质粒pShuttle Tracker CMV CTLA4 Ig ,与腺病毒骨架质粒 pAdEasy 1 △E1、△E3共转化大肠杆菌BJ5 183 ,经细菌内同源重组 ,获得重组腺病毒质粒pAd Tracker CTLA4 Ig ,转染 2 93细胞 ,制备携带CTLA4 Ig的重组腺病毒 ,体外感染L O2细胞 72h后ELISA检测其外分泌性表达。 结果 获得携带CTLA4 Ig的重组腺病毒 ,滴度为 6× 10 1 3 PFU L ;在其感染的L O2细胞培养上清中能检测到可溶性重组蛋白CTLA4 Ig的表达 (P N =4.6 ,阳性 )。结论 制备的重组腺病毒在体外能有效感染L O2细胞 ,受感染细胞能表达、分泌可溶性的融合蛋白CTLA4 Ig ;为进行体内移植免疫耐受的基因治疗研究奠定基础。
关键词
CTLA4-IG
重组腺病毒载体
腺病毒
基因转移
基因表达
基因治疗
免疫耐受
Keywords
Adenovirus
Gene transfer
Gene expression
分类号
R346 [医药卫生—基础医学]
原文传递
题名
同种肝移植大鼠转染融合基因人CTLA4-Ig抑制急性排斥反应
被引量:
1
2
作者
朱斌
杨甲梅
钱其军
王孟龙
崔贞福
李玲芳
吴孟超
机构
第二军医大学附属东方肝胆外科医院肝胆外科研究所
出处
《中华器官移植杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2005年第4期199-202,共4页
基金
国家自然科学基金资助项目(39900138)上海市科学技术发展基金资助项目(004119014)
文摘
目的观察同种肝移植大鼠转染融合基因人CTLA4-Ig(huCTLA4-Ig)对急性排斥反应的抑制作用。方法供者为BN大鼠,受者为Lew大鼠。将受者分为三组,A组(5只):为空白对照组,供肝冷保存时不感染腺病毒;B组(4只):为阴性对照组,供肝冷保存时感染携带报告基因GFP 的重组腺病毒;C组(5只):为基因治疗组,供肝冷保存时,先体外后体内感染携带融合基因huCT- LA4-Ig的重组腺病毒;观察该治疗基因在受者体内的表达及其对急性排斥反应的抑制作用。结果(1)A组与B组受者均在3周内死亡,A、B组平均生存时间分别为(16.6±2.5)d和(15.5±3.1)d,C 组受者均能获得长期生存(>150 d);C组与A、B组生存期比较,差异有统计学意义(P<0.01)。(2) 移植肝病理学检查发现:术后8 d,A组与B组移植肝均发生严重的细胞性排斥。C组术后8 d,可见移植肝轻、中度的汇管区炎症,但组织损伤程度显著减轻;术后150d,可发现单核细胞浸润,但胆管保存完好,无血管损伤证据。(3)术前大鼠血清白细胞介素2(IL-2)浓度为(362.09±45.84)ng/L;肝移植术后,A、B组血清IL-2的浓度即升到较高水平(约为术前的1.5-2.5倍),而C组却始终维持在一个较低水平(接近或低于术前水平);术后3、7 d,C组血清IL-2的浓度与A、B组比较,差异均有统计学意义(P<0.01)。
关键词
急性排斥反应
同种肝移植
融合基因
CTLA4-IG
大鼠
转染
血清IL-2
重组腺病毒
血清白细胞介素
同种异体移植肝
单核细胞浸润
基因转移系统
抑制作用
病理学检查
细胞性排斥
肝移植术后
分泌性表达
免疫抑制剂
冷保存
报告基因
Keywords
Transfection
Gene fusion
Liver transplantation
Graft rejection
分类号
R657.3 [医药卫生—外科学]
原文传递
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
携带融合基因CTLA4-Ig重组腺病毒载体的构建及表达
朱斌
杨甲梅
钱其军
崔贞福
石文芳
吴孟超
《中华实验外科杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2003
2
原文传递
2
同种肝移植大鼠转染融合基因人CTLA4-Ig抑制急性排斥反应
朱斌
杨甲梅
钱其军
王孟龙
崔贞福
李玲芳
吴孟超
《中华器官移植杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2005
1
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