TROP2、p-ERK1/2和Cyclin D1在胆囊癌组织中的表达及临床意义

目的探讨胆囊癌组织中人滋养层细胞表面抗原(TROP)2、磷酸化细胞外信号调节激酶(p-ERK)1/2和细胞周期蛋白D1(Cyclin D1)的表达及其与临床病理参数之间的关系,并分析其与胆囊癌患者预后的关系。方法搜集第二军医大学附属长征医院2005年6月-2010年6月确诊并获取病理标本的胆囊癌患者88例,采用免疫组化法检测88例胆囊癌组织及15例癌旁组织中TROP2、p-ERK1/2和Cyclin D1蛋白的表达。计数资料采用χ~2检验,Spearman检验法分析TROP2、p-ERK1/2和Cyclin D1间相关性;单因素和多因素Cox回归分析胆囊癌患者预后的影响因素;Kaplan-Meier法绘制患者的生存曲线。结果 TROP2、p-ERK1/2和Cyclin D1蛋白在胆囊癌组织中的阳性表达率分别为74.30%、58.40%和55.30%,明显高于癌旁组织中的表达(5.42%、35.67%和39.87%)(P值均<0.05)。TROP2、p-ERK1/2和Cyclin D1蛋白的表达与胆囊结石、肿瘤直径、分化程度、血管神经侵犯、淋巴结转移、手术方式及TNM分期相关(χ~2=4.300~53.315,P值均<0.05)。TROP2与p-ERK1/2、Cyclin D1的表达呈正相关(rs值分别为0.402、0.742,P值均<0.001),且p-ERK1/2与Cyclin D1的表达也呈正相关(rs=0.242,P=0.023)。多因素生存分析提示,TROP2的阳性表达是患者3年生存率的独立危险因素(相对危险度=2.412,95%可信区间:1.186~5.126,P=0.010)。结论 TROP2的高表达可能是胆囊癌恶性进展的重要原因,高表达的TROP2可能介导p-ERK1/2和Cyclin D1的高表达,导致胆囊癌恶性进展。TROP2是判断胆囊癌患者预后的独立危险因素,有可能是临床干预的有效靶点。

滋养层细胞表面抗原2与肿瘤的研究现状

人滋养层细胞表面抗原2（human trophoblast cell-surface antigen 2,TROP2）又称GA733-1和EGP-1,是一种单次跨膜表面糖蛋白,属于GA733基因家族的一员。TROP2其名源于其在胚胎滋养层细胞和绒毛膜癌中的高表达。研究证实TROP2在许多实体肿瘤中高表达,而在正常上皮或癌旁组织中低表达或不表达,参与多种肿瘤的恶性进展。本文综述近年来关于TROP2与肿瘤的研究进展。

胆囊癌组织中TROP2、PTEN和p-AKT的表达及其临床意义

目的探讨人滋养层细胞表面抗原-2(human trophoblast cell-surface antigen 2,TROP2)、磷酸酶与张力蛋白同源物(phosphatase and tensin homolog,PTEN)、磷酸化蛋白激酶B(phosphorylated protein kinase B,p-AKT)在胆囊癌组织中的表达情况、相互关系及临床意义。方法收集我院2003年1月至2009年12月期间确诊并手术的胆囊癌患者71例,获得胆囊癌组织标本71例及癌旁组织15例。采用免疫组织化学法检测TROP2、PTEN和p-AKT的表达,χ~2检验分析TROP2、PTEN和p-AKT蛋白表达水平与临床病理参数之间的关系,Spearman检验法分析TROP2、PTEN和p-AKT间两两相关性。结果 (1)与癌旁组织比,TROP2和p-AKT蛋白在胆囊癌组织中的阳性表达率明显升高(P<0.05),而PTEN蛋白在胆囊癌组织中的阳性表达率明显降低(P<0.05);(2)TROP2、PTEN和p-AKT三种蛋白的表达与胆囊癌患者的性别、年龄均无关(P>0.05),但与胆囊结石、分化程度、其他脏器侵犯、浸润深度及TNM分期相关(P<0.05);(3)TROP2与p-AKT呈正相关(P<0.05),但两者与PTEN呈负相关(P<0.05)。结论 TROP2/PTEN/p-AKT信号通路异常激活可能是胆囊癌恶性进展的重要原因,其机制可能涉及TROP2对PTEN及p-AKT的调控作用,这为临床上靶向干预胆囊癌研究提供理论基础。

Ad5-CCL20联合热疗对结肠癌CT-26细胞小鼠移植瘤生长的抑制作用

目的:探讨重组腺病毒Ad5-CCL20联合热疗对结肠癌CT-26细胞小鼠移植瘤的抑制作用。方法:将Ad5-CCL20转染CT-26细胞,采用ELISA法和趋化实验分别检测CT-26细胞中CCL20的表达及其对DC的趋化作用。Western blotting检测热激结肠癌CT-26细胞中HSP70、GP96的表达。用热激后细胞蛋白(Heat组)对DC进行诱导,并设对照组(Control组)和阴性对照组(Unheat组),流式细胞术检测DC的表型。建立CT-26细胞移植瘤模型,设Ad5-CCL20/Heat、Heat、Ad5-CCL20、Ad5-GFP和Control组,观察各组荷瘤小鼠肿瘤生长和生存时间;采用ELISAPOT法和LDH法分别检测脾组织T淋巴细胞分泌IFN-γ的能力和对CT-26细胞的CTL杀伤活性,免疫组化法检测肿瘤组织DC浸润情况。结果:Ad5-CCL20转染CT-26细胞后可高表达CCL20,且对i DC、m DC都具有趋化活性,对i DC更为明显(P<0.05)。CT-26细胞热激后可高表达诱导型HSP70和GP96。与Control、Unheat组相比,Heat组细胞蛋白诱导后DC的CD80、CD86、CCR6和MHC-Ⅱ的表达率明显升高(均P<0.01)。与Control、Ad5-GFP、Ad5-CCL20组和Heat组相比,联合治疗组荷瘤小鼠的肿瘤抑制最为明显(均P<0.01),生存时间明显延长(均P<0.05)。联合治疗后的荷瘤小鼠脾组织T淋巴细胞的CTL活性要明显高于另外四组(均P<0.05),其瘤组织中CD11c^+ DC的阳性率也明显增高(均P<0.05)。结论:重组腺病毒Ad5-CCL20联合热疗可召募并促进DC成熟和抗原提呈,明显抑制肿瘤生长,并延长荷瘤小鼠的生存期,提示其对结肠癌有潜在的治疗作用。

重组腺病毒载体Ad5-CCL20的构建及其表达

目的:构建表达趋化因子CCL20的重组腺病毒载体Ad5-CCL20,检测体外转染小鼠结肠癌细胞CT-26后的产物表达。方法:通过EcoR I/Sal I双酶切CCL20质粒和pDC316质粒,将获取编码CCL20的基因片段连接到pDC316重组穿梭质粒。将测序正确的穿梭质粒pDC316-CCL20与骨架质粒pBHGlox_E1,3Cre共同转染293T细胞,构建重组腺病毒载体Ad5-CCL20。予Ad5-CCL20体外转染结肠癌细胞CT-26,Western blotting和Elisa检测转染后不同时间段CCL20的表达情况,并以含CCL20的上清分别对mDC、iDC进行趋化实验。结果:成功构建表达趋化因子CCL20的重组腺病毒载体Ad5-CCL20;Western blotting和Elisa均检测到CCL20表达,且CCL20表达量随病毒转染CT-26细胞的时间延长而逐渐增加;趋化实验表明,趋化因子CCL20对iDC、mDC都有趋化作用,但对iDC的趋化作用更加明显(P<0.05)。结论:重组腺病毒载体Ad5-CCL20的构建及获取为后续开展肿瘤的免疫治疗提供实验基础。

伤寒沙门菌感染与胆囊癌研究进展

胆囊癌是胆道最常见的恶性病变,占消化道肿瘤的第5~6位,其早期诊断率及手术切除率低,预后差,迫使人们深入研究其发病的分子机制,来开发更有效的早期诊断和治疗手段。目前研究发现伤寒带菌状态与胆囊癌密切相关。全球每年有2 100万伤寒感染病例,且其中约5%患者发展为伤寒带菌状态。本文复习相关文献,对伤寒沙门菌感染和胆囊癌的相关研究进行综述,并对胆囊癌的诊断、预防、治疗提出展望。

三种猪源性细胞外基质体内降解规律的实验研究

目的：研究本实验以小鼠腹壁缺损为模型,通过对三种猪源性细胞外基质（ECM）—猪脱细胞小肠粘膜下层（P-SIS）、猪脱细胞心包（P-PC）以及猪脱细胞真皮（P-ADM）,进行体内弹性纤维和葡糖氨基聚糖类（GAGs）的含量测定,然后通过三组材料中弹性纤维和GAGs在术后第4周、第8周时再生或降解的数量,来对比研究三种生物材料植入体内后的降解规律,从而为寻找性能优良的生物补片提供理论依据,为生物补片的临床应用以及避免术后并发症方面提供指导方向。方法：BALB/c小鼠60只,体重18～20 g,手术造成1 cm×1 cm的腹壁全层缺损,随机分为3组（n=20）,分别以等面积的P-ADM、P-PC以及P-SIS进行修复,于术后4周、8周进行取材评估。结果：术后P-SIS组的腹腔内粘连评分均低于同时期内的其余两组。术后4、8周比较：P-ADM组,GAGs含量减少（P〈0.01）；P-PC组,弹性纤维（P〈0.01）、GAGs（P〈0.05）含量均有所增加；P-SIS组,弹性纤维（P〈0.001）、GAGs（P〈0.05）含量均增加。结论：P-SIS材料中,弹性纤维和GAGs的再生状况优于其他两组,且P-SIS材料不易引起腹腔内粘连,故P-SIS能够更好的应用于组织缺损的治疗,P-SIS在组织工程学领域相对而言是更加理想的修复材料。

不同分期结直肠癌患者的预后分析:一项基于SEER数据库的回顾性研究

目的探讨不同分期结直肠癌患者的预后,并分析临床病理参数的预后预测价值。方法通过美国SEER*Stat软件搜集2004至2009年病理明确诊断为结直肠癌并接受肠癌根治手术的患者共87 885例。单因素和多因素Cox回归分析结直肠癌患者预后的影响因素;Kaplan-Meier法绘制患者的生存曲线;Log-rank检验分析比较生存率的差别。结果 87 885例结直肠癌患者的5年总体生存率为60.4%,中位生存时间为98个月,平均生存时间为(76.71±0.16)月。Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ期的五年生存率分别81.2%、71.7%、58.4%、14.4%;总体生存率比较的关系(由长时间到短时间)为:Ⅰ期>Ⅱ期>Ⅲ期>Ⅳ期,差异有统计学意义(χ2=26 063.383;P<0.001)。但是,Ⅱ期的总体生存率介于ⅢA与ⅢB之间。具体如下:ⅢA期的5年生存率(78.7%)与ⅠB期(79%)相当(χ2=0.040;P=0.841),明显优于ⅡA(73.6%)(χ2=39.409;P<0.001)、ⅡB(60.1%)(χ2=212.271;P<0.001)和ⅡC期(54.6%)(χ2=307.720;P<0.001),总体生存率比较的关系为:ⅢA期约等于ⅠB期,优于ⅡA、ⅡB、ⅡC任何一期。ⅢB期的5年生存率(61.5%)优于ⅡB(60.1%)(χ2=4.366;P=0.037)和ⅡC期(54.6%)(χ2=33.047;P<0.001),但差于ⅡA(73.6%)(χ2=692.563;P<0.001),总体生存率比较的关系为:ⅢB期差于ⅡA期,优于ⅡB、ⅡC。单因素分析显示,性别(χ2=5.662;P=0.017)、诊断年份(χ2=100.476;P<0.001)、人种(χ2=227.960;P<0.001)、肿瘤部位(χ2=457.809;P<0.001)、分化程度(χ2=2 364.001;P<0.001)、邻近器官有无受累(χ2=3 475.630;P<0.001)、浸润深度(χ2=8 281.813;P<0.001)、阳性淋巴结数(χ2=12 034.484;P<0.001)、检出淋巴结数(χ2=362.497;P<0.001)及有无远处转移(χ2=23 960.974;P<0.001)与预后相关。多因素Cox回归分析显示,性别(95%CI:0.958~0.997;P=0.025)、诊断年份(95%CI:0.967~0.992;P=0.001)、人种(95%CI:0.912~0.942;P<0.001)、肿瘤部位(95%CI:0.896~0.912;P<0.001)、分化程度(95%CI:1.162~1.204;P<0.001)、邻近器官有无受累(95%CI:0.758~0.832;P<0.001)、浸润深度(95%CI:1.360~1.407;P<0.001)、阳性淋巴结数(95%CI:1.302~1.329;P<0.001)、检出淋巴结数(95%CI:0.667~0.696;P<0.001)及是否远处转移(95%CI:3.055~3.211;P<0.001)是影响结直肠癌患者生存预后的独立因素。结论随着Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ期TNM分期的增加,结直肠癌并接受肠癌根治手术的患者的总体生存率逐渐降低。然而,ⅡA、ⅡB、ⅡC期与ⅢA、ⅢB的预后相比,原发肿瘤浸润深度(T分级)在预后价值预测中或许较阳性淋巴结(N分级)占有更重要的比重。此外,性别、诊断年份、人种、肿瘤部位、分化程度、邻近器官有无受累、浸润深度、阳性淋巴结数、检出淋巴结数、是否远处转移等参数是评估结直肠癌并接受肠癌根治手术的患者生存预后的独立指标,这为临床上不同分期结直肠癌患者预后的分析提供参考。

肝细胞核因子4α在直肠癌中的临床意义及其与预后的关系

目的：探讨肝细胞核因子4α（HNF4α）在直肠癌中的临床意义及其与预后的关系。方法应用实时PCR法检测HNF4α在直肠癌中mRNA的表达水平，采用免疫组织化学法检测HNF4α蛋白表达水平，结合临床资料分析HNF4α与临床病理特征之间的关系，运用Kaplan-Meier法进行单因素生存分析，应用Cox回归模型进行多因素生存分析。结果在直肠癌组织中，HNF4α的mRNA（t＝6．092， P＜0．001）和蛋白（χ2＝15．230，P＜0．001）表达水平均低于癌旁组织，其蛋白表达与肿瘤临床分期（χ2＝48．311，P＜0．001）、浸润深度（χ2＝23．911，P＜0．001）、分化程度（χ2＝20．787，P＜0．001）、淋巴结转移（χ2＝39．064，P＜0．001）以及远处转移（χ2＝5．146，P＝0．04）相关，与性别和年龄无关。HNF4α低表达组患者术后3年生存率（43．8％）低于高表达组（95．5％），差异具有统计学意义（P＜0．001）。单因素生存分析表明，患者的预后与HNF4α表达（χ2＝28．778，P＜0．001）、分化程度（χ2＝26．680，P＜0．001）、临床分期（χ2＝32．702，P＜0．001）、肿瘤浸润深度（χ2＝6．226，P＝0．013）、淋巴结转移（χ2＝15．270，P＜0．001）以及远处转移（χ2＝21．817，P＜0．001）相关，而与性别及年龄无关。多因素生存分析表明， HNF4α低表达（RR＝6．084，P＝0．028）是直肠癌患者预后评价的独立因素。结论 HNF4α参与直肠癌的发生、进展，是判断其预后的独立因子，可能成为直肠癌治疗的有效靶点。

直肠癌术后吻合口漏的风险因素评估

目的对直肠前切除术后发生吻合口漏风险进行评估。方法选取2005年3月至2009年8月在第二军医大学附属长征医院普外科接受直肠前切除的338名直肠癌患者为研究对象,所有患者均接受直肠全系膜切除,评估相关因素与吻合口漏的相关性。结果本研究的吻合口漏发生率为9.2%。通过单因素分析与多因素分析法发现年龄(OR:3.380,95%CI:1.346～8.489)、BMI(OR:11.828,95%CI:4.123～33.858)、肿瘤位置(OR:6.304,95%CI:162～18.382)、肠梗阻(OR:6.675,95%CI:2.164～20.594)是影响吻合口漏的独立因素。结论直肠前切除术后发生吻合口漏与患者的性别、年龄、BMI指数、肿瘤位置、肠梗阻等因素相关。对于男性、高龄、肥胖、低位直肠癌、合并肠梗阻等危险因素的患者而言,术后发生吻合口漏的风险将增高。

肝细胞核因子4α在消化系统肿瘤中的研究

肝细胞核因子4α是一种细胞核激素受体超家族的转录因子,在消化系统分化发育及极性调控方面具有十分重要的作用,被认为是一种抑癌基因,在肝癌、结肠癌、胃癌等消化系统肿瘤的发生、侵袭及转移过程中发挥了十分重要的调控作用,并与上皮间质转化、细胞增殖调控及Wnt信号通路密切相关.肝细胞核因子4α在消化系统肿瘤中的表达及其作用机制是目前研究的热点.