9.1C3分子抑制杀伤性细胞的细胞毒作用及其机制

探讨 9 1C3分子对杀伤细胞功能的影响。方法 :以新鲜分离的PBMC或混合淋巴细胞培养活化的淋巴细胞为效应细胞 ,采用重导向杀伤实验 (Redirectedkillingassay ,RKA)观察 9 1C3抗体对效应细胞杀伤P815细胞作用及其杀伤过程中TNF 浕分泌的影响?峁?:9 1C3抗体能显著抑制杀伤细胞对靶细胞的细胞毒作用 ,并使效应细胞分泌TNF 浕水平降低。结论 :9 1C3分子是一种抑制型杀伤细胞受体。

血小板生成素诱导胎肝CD34^+造血干/祖细胞增殖分化与周期蛋白表达的关系

为了解胚胎时期巨核细胞增殖分化特有的内在机制 ,本研究观察了在体外培养体系中 ,胎肝源CD3 4 +造血干 /祖细胞在血小板生成素 (thrombopoietin ,TPO)作用下增殖分化特征与相关周期蛋白B1、D1和D3表达及细胞内水平变化的关系。结果发现 :( 1)经 12d培养后 ,TPO使胎肝源CD3 4 +细胞数从 1× 0 5个细胞 /ml增加到 13 12± 4 0 6× 10 5个细胞 /ml,CD4 1+细胞增加到了 95 % ,CD3 4 +细胞下降到了 3 % ,大部分细胞的DNA倍性为 2N ,少数为 4N ,无大于 4N巨核细胞 ,TPO对MegaCultTm C胶原半固体培养体系中胎肝源CD3 4 +细胞形成CFU Mk集落产率的影响呈明显的剂量效应关系 ;( 2 )在整个培养期间 ,周期蛋白B1表达逐渐增加 ,并保持在一个高水平上 ,培养后期 ,高水平的周期蛋白B1出现在G1期细胞上 ;( 3 )周期蛋白D1和D3表达先增加 ,培养后期细胞内水平下降 ,且以G2期细胞为主。该结果提示 :( 1)TPO通过上调周期蛋白B1和在所有细胞周期时限上调周期蛋白D1和D3表达 ,促进巨核细胞祖细胞的增殖分化 ;( 2 )周期蛋白B1在G2 +M期的持续高水平和周期蛋白D1和D3在G2 +M期的水平下降 ,可能导致胎肝源巨核细胞核内有丝分裂延迟或阻滞。

GnRH受体与TRAIL在前列腺肿瘤中表达的研究

目的 研究促性腺激素释放激素受体 (GnRH R)和凋亡相关蛋白 (TRAIL)在前列腺肿瘤中的表达及临床意义。方法 采用SABC免疫组化法及原位定量法 ,对前列腺肿瘤和前列腺增生患者中GnRH R和TRAIL的表达进行检测及半定量分析。结果 在前列腺癌组织高分化的 11例 ,中分化的 4例以及低分化的 5例中 ,各种不同分化的癌组织均显示不同程度的GnRH R和TRAIL阳性免疫反应 ,原位定量显示GnRH R与TRAIL的表达均分别随着组织分化程度增高而增高 (P <0 0 5 ) ,并且TRAIL较GnRH R阳性免疫反应强。结论 GnRH R和TRAIL表达量可能与前列腺恶性肿瘤的发生与发展有关。

治疗用鼠抗人单克隆抗体WuTac功能及药效作用

目的 研究鼠源性抗人白细胞介素 2受体单克隆抗体WuTac的功能和药效作用。方法 采用间接免疫荧光法检测WuTac对白细胞介素 2的阻断作用 ;采用同位素法检测WuTac对活化的T细胞增殖的影响 ,并且通过移植物抗宿主的反应 (GVHR)对WuTac体内的药效作用进行评价。结果 WuTac可以明显地抑制人白细胞介素 2的作用 ,并且可以明显地抑制移植物抗宿主的反应。结论 WuTac可以作为一种较为理想的免疫抑制剂 。

活化T细胞抗原p140在肝移植患者T淋巴细胞的表达

目的:观察一种新的活化T细胞膜分子p140在肝移植围手术期患者T淋巴细胞的表达。方法:用免疫荧光染色和流式细胞术观察p140的表达,并用移植肝病理检查证实急性排斥反应。结果:p140在肝移植患者淋巴细胞亚群及活化T细胞有弱表达,急性排斥反应时表达增强。结论:p140为一种新的移植抗原诱导的T细胞活化分子。有可能成为特异的移植物排斥反应的判别指标。

转录因子对B细胞发育的调控作用

B细胞同其他血细胞一样，也是由多能造血干细胞发育为祖细胞。再发育成终未成熟细胞的。发育过程中，向B细胞发育的前体细胞逐渐失去向其他谱系发育的潜能，B细胞谱系特征性基因开始表达。近来的研究表明；B细胞发育过程中有多种转录因子参与，它们调节多种重要基因的转录，保证B细胞的正常发育。本文综述了与B细胞发育相关转录因子的最新研究进展。

CD226和9.1C3特异性抗体对NK-92细胞杀伤作用的影响

目的 :探讨NK细胞活化型受体CD2 2 6和NK细胞抑制型受体 9 1C3分子特异性抗体对活化NK细胞系NK 92杀伤的调节作用。方法 :通过间接免疫荧光染色和FCM分析 ,鉴定CD2 2 6和 9 1C3分子在NK 92细胞的表达 ,采用51 Cr释放实验和重导向杀伤实验观察CD2 2 6mAb和 9 1C3mAb对NK 92杀伤作用的影响。结果 :NK 92细胞为CD2 2 6阳性 ,9 1C3弱阳性。CD2 2 6mAb和 9 1C3mAb对NK 92自然杀伤作用没有明显的调节作用。在重导向杀伤实验中 ,CD2 2 6mAb能增强NK 92对P815细胞的杀伤作用 ,而 9 1C3mAb对NK 92的自然杀伤以及CD2 2 6mAb诱导的杀伤均没有抑制作用。结论 :NK细胞活化型受体CD2 2 6分子可能参与NK 92细胞杀伤作用的正向调节 ,而NK细胞抑制受体 9 1C3分子对NK 92细胞杀伤功能的影响不大。

造血系统基因治疗的研究进展

造血系统的许多疾病是由于基因的缺陷或突变造成的,其严重后果直接威胁患者的生命,而且造血系统具有极其特殊的组织学特征和自我更新特点。基于上述三个原因,造血系统的基因治疗尤其受到国内外学者的青睐,其范围包括:酶的缺失、造血因子基因转染、血红蛋白异常、血友病、肿瘤等。本文就目前国内外针对造血系统进行的基因治疗试验加以综述。

TLSF_(JM)联合小剂量FK506促进大鼠小肠移植耐受

目的探讨TLSFJM(JM急性T淋巴细胞白血病细胞分泌的抑制因子)作为抑制因子对小肠移植急性排斥反应的抑制效应及其机理,并与FK506的抑制效应特点和副作用进行比较分析。方法雄性BN和LEW大鼠分别作为供、受体行小肠移植,共分5组:小肠移植组(SBT组)、大剂量FK506〔0.5mg/(kg.d)〕组、小剂量FK506〔0.25mg/(kg.d)〕组、TLSFJM〔10U/(kg.d)〕组和FK506〔0.25mg/(kg.d)〕+TLSFJM〔10U/(kg.d)〕组。FK506和TLSFJM分别以肌肉或腹腔注射方式给药。在不同时间段分别观察各组动物体重、生存时间及肝、肾功能,组织病理学检查排斥反应发生情况。结果TLSFJM应用7d,对移植大鼠肝、肾功能无损害。TLSFJM+小剂量FK506不但避免了大剂量FK506对肝功能的损害,而且显著延长了受体的生存时间。但单独应用TLSFJM仍有一定程度排斥反应出现,不能明显延长受体的生存时间。结论TLSFJM作为一种有效的移植免疫抑制因子,联合小剂量FK506应用能延长宿主和移植肠的生存时间,延缓排斥反应的发生,减轻排斥反应的强度,避免大剂量FK506治疗带来的并发症。TLSFJM有望成为一种新型、高效、低毒的免疫抑制剂。

血清sPTA1在判别肝移植术后急性排斥反应的作用

目的:观察肝移植患者围手术期及急性排斥反应时血清可溶性血小板T细胞活化抗原1(sPTA1,CD226)水平与排斥反应的相关性。方法:用夹心ELISA法测定肝移植患者血清sPTA1水平。结果:25例尸体肝移植患者中经病理证实的排斥反应发生时sPTA1显著升高,经加强免疫抑制剂治疗后,血清sPTA1下降,且sPTA1水平的变化早于临床症状表现。结论:PTA1是一项较为可靠的判别和监测急性排斥反应的指标,与病理检查的结果有较好的一致性,可以作为移植物急性排斥反应的监测和预警指标。

9.1C3胞内抗体基因的克隆及其对9.1C3分子表达的抑制作用

目的 获得 9 1C3胞内抗体基因的真核表达载体 ,观察胞内抗体对 9 1C3分子表达的抑制作用 ,为进一步研究 9 1C3分子对NK细胞功能的影响打下基础。方法 设计引物 ,以 9 1C3ScFv基因为模板进行PCR扩增 ,引入蛋白质内质网定位所需的信号肽、KDEL以及作为表达检测标记的E tag序列。回收纯化PCR产物 ,酶切后连接到pUC19载体上 ,并进行序列测定。序列正确后切下胞内抗体基因片段 ,重组到真核表达载体pRc/CMV中 ,酶切鉴定后用DEAE dextran方法瞬时转染真核细胞COS7,用胞内染色和Westernblot方法检测胞内抗体的表达。接着用Lipofectamine把胞内抗体基因转入 9 1C3阳性的Jurkat细胞 ,用FCM观察胞内抗体对 9 1C3分子表达的影响。结果 DNA序列测定证明 ,通过PCR成功地为 9 1C3ScFv引入了内质网定位所需的信号肽、KDEL及E tag序列 ,成功地构建了胞内抗体真核表达载体 ,通过胞内染色方法和Westernblot证明胞内抗体在COS7中得到表达。转入Jurkat细胞后发现胞内抗体能下调 9 1C3分子的表达水平。结论 以 9 1C3ScFv基因为模板PCR扩增得到 9 1C3胞内抗体基因 ,并构建了真核表达载体。

胆汁可溶型抑制性受体LAIR-1以及白介素-2受体监测在肝移植急性排斥反应中的意义

目的 探讨胆汁中sLAIR-1及IL-2R的表达在肝移植排斥反应中的意义.方法 连续3周应用双单克隆抗体夹心ELISA方法检测55例肝移植受者术后胆汁sLAIR-1及sIL2R水平.结果 在22例移植肝功能正常的受体中（对照组）,胆汁sIL-2R在（23.1±3.5）～（55.1±6.1）ng/L范围之内呈较低水平的波动,sLAIR-1则波动于（3.2±1.1）～（6.1±1.4）ng/L范围之内,亦呈低水平表达.在急性排斥反应（AR）组,胆汁sIL-2R水平在排斥反应确诊前2 d为（116.1±10.3）ng/L,确诊前1 d则为（136.8±12.7）ng/L,均显著高于对照组（P＜0.01）.在经激素冲击治疗3 d时则下降至（74.2±6.2）ng/L,明显低于确诊前1、2 d水平.在对照组,胆汁sLAIR-1在（3.2±1.1）～（6.1±1.4）ng/L范围之内呈较低水平的波动;在AR组确诊前3 d为（18.1±2.2）ng/L,确诊前2 d为（25.1±3.5）ng/L,确诊前1 d则为（31.1±5.5）ng/L,均显著高于对照组（P＜0.01）;经激素冲击治疗3 d时,胆汁sLAIR-1水平下降至（8.1±2.5）ng/L,接近对照组水平,且sLAIR-1的下降早于sIL2R.结论 胆汁sLAIR-1在发生移植肝急性排斥反应的病人血清中有较高水平的表达,其波动较sIL-2R大,将二者联合进行监测,可望成为早期预测移植物排斥反应发生及转归的诊断指标.