生物芯片技术在Hp诊断和研究中的应用

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西安地区Hp及cagA^+亚型Hp感染的血清流行病学研究

目的 对胃癌高发区的西安地区城市及农村自然人群Hp及CasA^+HP感染状况进行血清流行病学调查,以期了解各年龄段Hp及CagA^+Hp感染状况以及与胃癌等胃疾病的关系, 方法 对胃癌高发区的西安地区城市及农村自然人群2134人及525例胃病患者进行现况调查,并使用斑点金免疫渗滤法(DIGFA)对被调查者末梢血血清行抗Hp-尿素酶IgG(抗HpU-IgG)及抗Hp-CagA-IgG检测,检测结果进行统计学处理,感染率用百分数表示,做X^2检验,P<0.05为差异有显著意义。 结果 我们首次采用DIGFA方法对胃癌高发地区的西安地区自然人群包括婴幼儿在内的大样本人群及胃病患者进行抗Hp-CagA-lgG及抗HpU-IgG的血清流行病学调查,显示了西安地区0岁～60岁Hp感染与CagA^+Hp感染年龄分布的全貌,其结果显示西安地区Hp感染的特点为:①可分为剧增期,缓增期,及平坦期,而且剧增期明显提前而且持续时间短(2岁～3岁年龄段),缓增期不明显,5岁～6岁己接近平坦期(Hp感染率达50％左右)。②西安地区Hp的平均感染率为54.1％(31.1％～65.7％),其中CagA^+Hp感染率占23.2％(12.5％～29.3％),城市及农村Hp与CagA^+Hp感染率差异无显著意义(x^2=0.01;2.85,P>0.05)。③自然人群各年龄组中CagA^+Hp感染率占Hp总感染率的比值相对固定,约为30％ ～50％。

生物芯片技术研究幽门螺杆菌的应用

分子生物学技术已越来越多的应用于幽门螺杆菌Hp的检测，检测的主要靶分子为抗Hp抗体、Hp抗原和Hp基因组。以ELISA，金标记和PCR技术为主体的分子生物学诊断技术在Hp诊断中所发挥的作用越来越大。随着分子生物技术的飞速发展，各种高新生物技术不断诞生，给Hp的分子诊断带来了新的起点和高度，现结合作者的一些研究工作，主要就生物芯片技术在Hp诊断中的应用前景做一简述。

幽门螺杆菌细胞毒素相关蛋白A与胃十二指肠溃疡关系的病例对照研究

目的本文从流行病学角度研究西安地区幽门螺杆菌细胞毒素相关蛋白 A(CagA)阳性 Hp 菌株感染与胃十二指肠溃疡发病的关系.方法采用病例对照研究方法,病例组与对照组的配比比例为1:2.病例组为本院消化科自1997-10/1998-10连续住院的患者,经内镜检查及病理检查证实为活动期胃溃疡和(或)十二指肠溃疡.对照组分为两组,对照1组为同期住院的本科及其他科住院的非胃十二指肠疾病患者,对照2组为同期普查健康人群.病例组与对照组的配比因素为性别、民族、年龄(相差5岁以内).采用问卷调查,内容涉及与胃十二指肠溃疡发病可能有关的32个因素,对所有因素进行量化,应用 SAS 软件进行处理.CagA 阳性 Hp 感染的检测结果分析采用 x^2检验.对所调查因素首先进行1:1及1:2单因素条件 Logistic 回归分析,有显著性意义的因素,计算近似相对危险度(odds ratio,OR)及其95%的可信区间(confidence interval,CI).两因素协同作用采用分层分析方法.对单因素分析时作用较大及调查结果较准确的因素,用多因素条件 Logistic 回归分析.血清中抗 CagA 抗体的检测采用斑点金免疫渗滤法(DIGFA).结果①在胃溃疡组与对照1组及对照2组的配对研究中,胃溃疡组的 CagA 阳性 Hp 感染率显著高于两个对照组,OR 分别为5.0与6.5,P 分别<0.05及<0.01.②在十二指肠溃疡组与对照1组及对照2组的配对研究中,十二指肠溃疡组的CagA 阳性 Hp 感染率显著高于两个对照组,OR 分别为9.33与11.00,P 分别<0.05及<0.01.③1:1及1:2单因素及多因素 Logistic 回归分析表明,Caga 阳性 Hp 感染、吸烟、饮酒、食酸辣食物、生活不规律、精神因素等因素与胃十二指肠溃疡发病呈正相关,而按时进餐与胃十二指肠溃疡发病呈负相关.cagA 阳性 Hp 感染与胃溃疡及十二指肠溃疡的发生具有密切的相关性(OR=16.61-84.49).④双因素分层分析中,吸烟、饮酒、生活不规律、精神因素、食酸辣食物等因素与 CagA 阳性Hp 感染之间作用相互独立,但在胃十二指肠溃疡病的发生中具有协同作用.结论消化性溃疡的发生是众多因素共同作用的结果,CagA 阳性 Hp 菌株感染是引起胃溃疡及十二指肠溃疡多因素病因学中一个非常重要的、危险的因素.重视 CagA 阳性 Hp 菌株的研究,对预防和治疗消化性溃疡具有重要的临床意义和社会意义.

胃癌及癌前病变粘膜中呈高表达6个基因片段的筛选及其临床意义

目的 筛选数个在胃癌及癌前病变粘膜中检出率高的差异表达基因片段并探讨其临床意义．方法 以筛选出的ｇｃｙｓ１ 至ｇｃｙｓ１８ 的新基因片段作为研究对象，采用定量ＲＴＰＣＲ 技术检测４８ 例胃癌、１６ 例其他肿瘤及１１０ 例活检的胃粘膜标本．结果 ①在４８ 例胃癌中，表达检出率高的６ 个片段依次为：ｇｃｙｓ１０ 为９０－５ ％ ，ｇｃｙｓ１ 为８０－９ ％ ，ｇｃｙｓ１８ 为６９－５ ％ ，ｇｃｙｓ１１为６１－９ ％ ，ｇｃｙｓ４ 为４２－８ ％ ，ｇｃｙｓ８ 为３５－７ ％ ，在癌旁组织中检出率＜ １０ ％ ；６ 个片段的检出率在胃癌及癌旁组织中存在显著性差异（ Ｐ ＜ ０－０１） ；②在１６ 例其他肿瘤中， 表达率依次为：ｇｃｙｓ１０ 为３７－５ ％ ，ｇｃｙｓ１ 为１４－３ ％ ，ｇｃｙｓ１８ 为２７－５ ％ ，ｇｃｙｓ１１为４３－７ ％ ，ｇｃｙｓ４ 为１４－３ ％ ，ｇｃｙｓ８ 为３１－３ ％ ；③３３ 例萎缩性胃炎中，表达率依次为：ｇｃｙｓ１０ 是４０－５ ％ ，ｇｃｙｓ１ 是１６－７ ％ ，ｇｃｙｓ１８ 为４４－５ ％ ，ｇｃｙｓ１１ 为４３－３ ％ ，ｇｃｙｓ４ 为３３－３ ％ ，ｇｃｙｓ８为４８－３ ％ ；２８

幽门螺杆菌细胞毒素相关蛋白A与胃癌关系的病例对照研究

目的:探讨幽门螺杆菌(Hp)细胞毒素相关蛋白A(CagA)阳性Hp感染与胃癌发病的关系。 方法:采用病例对照研究的方法,选择可能与胃癌发生有关的危险因素制定统一的调查表,胃癌组与对照组进行配比,配比比例为1:2。患者末梢血中HP-CagA抗体的检测采用斑点金免疫渗滤法。胃癌的危险因素分析采用单因素及多因素Logistic回归分析、双因素分层分析。 结果:(1)不同年龄段的胃癌患者CagA阳性Hp感染率差异较大,年龄越小感染率越高,小于50岁胃癌患者100％感染CagA阳性Hp,随着年龄增长,感染率下降,呈显著的负相关(P<0.01)。(2)CagA阳性Hp感染率在高、中、低分化腺癌中分别为8。5％,28.5％,63.0％,彼此间相比,差异有显著性(P<0.05),CagA阳性Hp感染与低分化腺癌关系最密切。(3)胃癌组与对照1组及对照2组的1:1配比的单因素Logistic回归分析中,食酸辣食物、吸烟、进食不规律、精神因素、身体状况较差、饮酒、Ⅰ级亲属共患病及CagA阳性Hp感染等因素与胃癌的发生呈正相关,其中以CagA阳性Hp感染的OR最大,关系最为密切。进食新鲜蔬菜、水果与胃癌发病呈负相关,为胃癌的保护性因素。(4)多因素Logistic回归分析中,CagA阳性Hp感染、吸烟、饮酒、进食不规律、精神因素等因素与胃癌的发生呈明显的正相关。

胶体金免疫层析法检测抗幽门螺杆菌细胞毒素相关蛋白A抗体

目的 建立一种快速、简易的检测血清中抗幽门螺杆菌（ Ｈｐ）细胞毒素相关蛋白 Ａ（ ＣａｇＡ） 抗体的胶体金免疫层析法（ＧＩＣＡ） ．方法 采用柠檬酸三钠还原法制备胶体金颗粒，标记葡萄球菌Ａ 蛋白（ＳＰＡ） ，将重组的ＣａｇＡ 抗原划线固定于硝酸纤维素膜上，制成免疫层析检测试条． 血清中ＩｇＧ 与测试条上金标记物结合后沿着硝酸纤维素膜移动，与膜上的固相抗体结合形成肉眼可见的红色线条．结果 用ＧＩＣＡ 与ＥＬＩＳＡ 试剂盒对比检测了３２６ 份血清标本中抗ＣａｇＡ 抗体，本方法的特异性为９５－８ ％ ，敏感性为９７－３ ％ ，两法符合率为９６－６ ％ ．结论 ＧＩＣＡ 检测血清中的抗ＣａｇＡ 抗体特异性强、灵敏度高、简便快速，无需特殊仪器设备，有广泛应用价值．

免疫金多元层析法快速检测乙肝五项血清学指标

目的 建立免疫多元层析试验用于快速准确检测乙肝五项血清学指标。方法 采用柠檬酸钠还原法制备金颗粒。将乙型肝炎病毒表面抗体(抗—HBs)、乙型肝炎病毒e抗体(抗—HBe)和乙型肝炎病毒表面抗原(HBsAg)，乙型肝炎病毒e抗原(HBeAg)、乙型肝炎病毒核心抗原(HBcAg)用点膜器成线状固相在硝酸纤维薄膜上，分别用来检出血清中HBsAg、HBeAg、抗—HBs、抗—HBe，抗—HBc通过金标记单抗或抗原而显色，条带清晰，结果易于判断。结果 用本法与ELISA对比检测115份标本。其中HBsAg+、HBeAg+和抗—HBc+两法阳性符合率为96．3％。HBsAg+，抗—HBe+和抗—HBc+两法阳性符合率为97．4％，五项阴性两法的符合率为100％，重复试验、中和试验证实本法检测结果准确，特异性强，且不需任何仪器设备，整个试验过程仅需5min。最长时间为15min。结论 本法具有简便、快速、准确性、特异性强等特点。有广泛的应用价值。

用分级定量RT—PCR测定中国人血清中HCV RNA

目的 利用分级定量方法建立分级测定血清中HCV RNA含量的定量方法。方法 设立3个DNA标准竞争模板(10^2cop，10^4cop，10^6cop)分别和恒量的待测RNA模板cDNA共同进行PCR扩增，最后用凝胶电泳分离待测模板和竞争模板的PCR产物，测定两者的荧光强度比值，计算待测RNA的模板初始量。结果 该方法灵敏度为1×10^1cop，对丙型肝炎患者血清HCV RNA定量，结果表明，10份HCV RNA阳性血清中，HCV RNA的血清浓度在3×10^5～6×10^8cop·L^-1之间。结论 该方法可用于HCV RNA以及其他RNA病毒的RNA定量。

如何应用常用医学生物信息学数据库

生物信息学(bioinformatics)是随着人类基因组计划(human genome project，HGP)的实施而发展起来的，是用计算机信患技术研究和分析基因组信患、蛋白质结构以及药物设计的一门新兴交叉学科。人类基因组计划是美国继原子弹工程和人类登月工程之后的又一个大型工程，其目的是要阐明人类基因组核苷酸序列，破译人类的全部遗传密码。

免疫金层析试验快速检测血清HBsAg

免疫金层析试验是20世纪90年代初在免疫渗滤技术的基础上建立的一种快速简便的免疫检测技术。我国有40％左右的人感染过乙型肝炎病毒,其中约有10％的人携带HBsAg,因而快速准确地检测和普查HBsAg,对于乙型肝炎的预防、诊断和治疗,具有极大的实用价值,为此,我们研究建立了快速检测HBsAg的免疫金层析试验(GICA),取得了较为满意的结果。 1 材料和方法 1.1 材料 氯金酸购于上海试剂一厂;免疫层析的材料由吸水玻璃纤维、吸附胶体金的玻璃纤维纸。