胃粘膜异型增生微观辨证分型与细胞核DNA含量变化及随访研究

目的 :探讨胃粘膜异型增生中医微观辨证分型与细胞核DNA含量及临床随访结果的关系。方法 :应用中医脏腑辨证理论与图象分析的方法对 12 0例胃粘膜异型增生进行内镜下微观辨证分型与细胞核DNA含量及倍体定量分析 ,同时进行临床随访研究。结果 :胃络瘀滞型与胃络灼伤型胃粘膜DNA含量、超 2倍体、超 4倍体细胞百分数及核平均面积、周长、体积均较胃热型与胃寒型明显增高 ,有显著意义 (P <0 .0 5 ～ 0 .0 1) ,DNA含量直方图非整倍体型组中胃络瘀滞型粘膜(2 6 / 47)明显高于整倍体型组 (8/ 37) (P <0 .0 1)。对其中 6 3例进行了 6～ 72个月 (平均 2 4个月 )的随访 ,癌变组中胃络瘀滞型粘膜 (2 3/ 30 )明显高于未癌变组 (9/ 33) ,差异有显著意义 (P <0 .0 1)。结论 :胃络瘀滞型胃粘膜异型增生与癌变关系密切 ,在辨证施治中应给予重视。

反义端粒酶RNA对人胃癌细胞端粒长度及端粒酶活性调控的研究

目的 探讨反义端粒酶RNA(hTR)对人胃癌细胞端粒长度 (TRF)及端粒酶活性的调控作用。方法 应用反义hTR真核表达载体经脂质体介导转染胃癌细胞SGC790 1,通过分子杂交及端粒重复扩增PCR方法检测hTR表达及端粒、端粒酶活性变化。结果 经HYR筛选 ,转染细胞形成稳定克隆 ,反义hTR表达增强、正义hTR表达下调 ,平均TRF缩短、端粒酶活性受抑。结论 反义hTR对胃癌细胞TRF及端粒酶活性的调控可能是通过其对hTR模板的“封闭”而发挥作用的 ,反义hTR可以作为胃癌基因治疗的一种新靶点。

胃粘膜异型增生的微观辨证分型与核仁组成区嗜银蛋白含量变化及随访研究

目的 探讨胃粘膜异型增生中医微观辨证分型与细胞核仁组成区嗜银蛋白（ＡｇＮＯＲ）含量及临床随访结果的关系。方法 应用中医脏腑辨证理论与图象分析的方法对１２０例胃粘膜异型增生进行内镜下微观辨证分型与ＡｇＮＯＲ定量分析，同时进行临床随访研究。结果 胃络瘀滞型与胃络灼伤型胃粘膜的ＡｇＮＯＲ每核颗粒均数与大颗粒均数均较胃热型与胃寒型明显增高，有显著意义（Ｐ＜０．０１）。对其中６３例进行６～７２个月（平均２４个月）的随访，癌变组中胃络瘀滞型粘膜（２３／３０）明显高于未癌变组（９／３３），差异有显著意义（Ｐ＜０．０１）。结论 胃络瘀滞型胃粘膜异型增生与癌变关系密切，在辨证施治中应给予重视。

P16基因甲基化与消化系统恶性肿瘤

P16基因又称多肿瘤抑制因子1(MTS1)、CDK4抑制因子(NK4)，是1993年发现并克隆出的一个参与细胞周期调控的抑癌基因。由于其作用和重要性不亚于P53基因，因而成为近年来研究的热点。

胃癌组织p21基因表达及基因改变的研究

目的研究胃癌组织P21蛋白表达和p21基因改变的意义．方法32例胃癌石蜡标本，其中乳头状腺癌6例，管状腺癌9例，粘液腺癌8例，低分化腺癌7例，未分化癌2例，存在淋巴结转移的标本23例，32例癌旁正常胃粘膜组织作对照．应用ABC免疫组化方法检测P21蛋白表达，单链构象多态性分析（SSCP）检测p21基因改变．参照文献确定p21蛋白表达的阳性标准及SSCCP检测p21基因异常标准，并对结果进行统计学分析．结果胃癌组织P21蛋白表达阳性率56．3％（18／32），其中管状腺癌77．8％（7／9），乳头状腺癌83．3％（5／6），粘液腺癌37．5％（3／8），低分化腺癌42．9％（3／7），未分化癌0％（0／2），存在淋巴结转移组为43．5％（10／23），无淋巴结转移组为88．9％（8／9），癌旁组织为90．6％（29／32）．P21蛋白表达阳性率胃癌组织较癌旁组织明显降低（P＜0．05），与胃癌伴淋巴结转移呈负相关（P＜0．05），不同病理类型间未见差异显著（P＞0．05）．PCR－SSCR分析18．8％（6／32）胃癌组织存在p21基因改变．结论p21基因以异常表达及基因改变的方式参与胃癌发生、发展．

大肠癌组织中的端粒酶活性变化

目的：研究端粒酶活性与结直肠癌恶性进展的关系。方法：应用端粒重复扩增（ＴＲＡＰ）方法检测２２例大肠腺瘤、４３例结直肠癌及邻近组织中的端粒酶活性，并分析其与临床病理的关系。结果：端粒酶活性阳性率在大肠癌中为９５．４％，腺瘤中为９．１％，而邻近组织中仅为２．３％，在低、未分化癌及粘液腺癌中端粒酶活性呈中、强表达者占多，而在中、高分化癌包括乳头状腺癌及管状腺癌中存在相当低、弱表达，但其总的表达在大肠癌Ｄｕｋｅｓ各期中无甚差异。结论：大肠癌的恶性转化与端粒酶的活化有关，检测端粒酶活性对临床大肠癌尤其是早期大肠癌具有特别重要的诊断意义。

胃癌与癌前病变CdX2基因蛋白表达的意义

目的:研究胃癌、胃黏膜异性增生组织中肠道特异性分化基因CdX2蛋白的表达及意义,探讨胃黏膜癌前病变癌变的分子机制. 方法:应用多克隆抗体ABC免疫组化检测胃黏膜异性型增生36例、慢性浅表性胃炎35例、肠型胃癌30例及未分化型胃癌28例CdX2基因蛋白的表达. 结果:CdX2基因蛋白在慢性胃炎中表达均为阴性;重度异型增生(68%)及肠型胃癌组(71%)CdX2蛋白表达阳性率较轻、中度异型增生组(13%,22%)、及未分化型胃癌组(35%)增高,差异有显著意义(P<0.01);但是,CdX2基因表达与胃癌的分期及淋巴结转移无关(P>0.05). 结论:CdX2基因过度表达与胃黏膜上皮细胞异型增生的形成及癌变有关,可能是胃癌发生的早期事件,特别是与肠型胃癌的形成关系密切.

小鼠干扰素-γ诱生单核因子在昆虫细胞中的高效表达及其血管生成抑制作用

干扰素-γ诱生单核因子(monokineinducedbyinterferon-γ,MIG,CXCL,9)是一种具有趋化T淋巴细胞NK细胞的CXC趋化因子家族成员之一.通过RT-PCR技术从小鼠脑组织中克隆了小鼠MIGcDNA,利用Bac-to-Bac杆状病毒表达系统构建了MIG重组杆状病毒,并在Tn-581-4昆虫细胞内将其进行了表达,最后对表达产物进行了纯化和活性鉴定.结果显示:小鼠MIG蛋白在Bac-to-Bac杆状病毒表达系统中可得到高效分泌性表达;分泌到培养上清中的重组MIG蛋白经S-Sepharose纯化后得到的MIG蛋白纯度约为90%,产量为10mg/L;在SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳和蛋白质印迹分析中该蛋白质分子质量显示为14.4ku左右;该纯化蛋白在体外具有诱导CTLL-2淋巴细胞钙离子内流和抑制血管内皮细胞迁移和增值的活性,在鸡胚尿囊膜实验中小鼠重组MIG具有抑制新血管生成的功能.实验表明,在杆状病毒系统中高效表达的小鼠重组MIG蛋白具有抑制内皮细胞迁移、增殖和血管生成活性,为今后进一步研究其血管生成抑制活性的机理和将其应用于肿瘤血管抑制实验建立了基础.

ZnPPⅨ对胃癌腹膜转移细胞凋亡的影响

目的研究ZnPPⅨ对人胃癌腹膜细胞GC9811-P凋亡的影响。方法采用MTT法测定GC9811-P细胞在ZnPPⅨ作用48 h后生长抑制情况;流式细胞仪观察ZnPPⅨ对GC9811-P细胞周期和细胞凋亡的影响;western blot免疫印迹法观察ZnPPⅨ对细胞系CIAPIN1、Bcl-2、Bax蛋白表达水平的影响。结果各浓度值的ZnPPⅨ均可抑制GC9811-P细胞增殖,并促进肿瘤细胞凋亡,并降低CIAPIN1和Bcl-2/Bax蛋白的表达水平。结论ZnPPⅨ可诱导GC9811-P细胞的凋亡,其作用机制可能通过调控CIAPIN1基因影响Bcl-2/Bax分子的表达。

小鼠肝脏RNA编辑酶ADAR1 4种剪切体:克隆、表达及功能分析

RNA编辑是DNA转录为RNA后遗传信息发生改变的一种方式.A-to-IRNA编辑酶ADAR1(adenosinedeaminasethatactsonRNA1)具有将pre-mRNA中特定的腺嘌呤核苷转变为次黄嘌呤核苷的功能.通过RT-PCR技术从小鼠肝脏组织中克隆了小鼠A-to-IRNA编辑酶ADAR1的4种剪切体,采用荧光示踪技术研究其在细胞内定位,利用Bac-to-Bac杆状病毒表达系统构建了ADAR1重组杆状病毒并在sf9昆虫细胞内将其进行了表达,最后对表达产物进行了活性鉴定.结果发现,小鼠ADAR1在小鼠肝脏组织中主要以4种剪切方式存在,分别命名为ADAR1-La\Lb和ADAR1-Sa\Sb.这4种ADAR1剪切体在细胞内分布有着明显的区别,ADAR1-La\Lb主要分布于胞浆,而ADAR1-Sa\Sb主要分布于细胞核及核仁.Bac-to-Bac杆状病毒表达系统表达的4种ADAR1剪切体蛋白的双链RNA编辑活性明显不同,提示各个ADAR1剪切体的底物识别和特异性RNA编辑功能可能有所不同.ADAR1剪切体的克隆和表达以及它们在细胞内定位和编辑活性的差异的发现为进一步研究其结构和功能的关系及寻找它们的新底物奠定了基础.

大鼠小肠粘膜损伤修复过程中肠段细胞因子的表达

目的探讨部分细胞因子在大鼠小肠粘膜损伤的修复过程中的作用.方法首先用巴西日圆线虫感染大鼠,建立肠粘膜损伤与修复模型,采集建模后4,8,12,16,20 d 的小肠组织标本,运用定量反转录 PCR 技术进行 IL-2,3,4,5,10,TGF-α与 TGF-β表达水平的检测,以β-actin 作内参照,扫描所得 A(OD 值)与βactin A(OD 值)比值为结果值.其次,在感染巴西日圆线虫同时,分别向感染巴西日圆线虫大鼠转输大鼠肠道固有膜淋巴细胞和该淋巴细胞培养上清,同样方法检测不同时间段肠段各细胞因子的表达.结果①大鼠感染巴西日圆线虫后4,8,12,16,20 d 的细胞因子表达水平分别为:IL-2:3.07,2.84,3.33,3.24.3.85;IL-3:6.02,5.13,3.54,2.20.1.98;IL-4为:0.25,0.26,0.18,0.17,0.15;IL-5为:0.16,0.16,0.07,0.05,0.05;IL-10:6.25,6.87,7.44,7.32,6.45;IFNγ:7.43,6.24,7.28,15.42,7.82;TGF-α:3.70,10.09,6.94,4.88,4.01:TGF-β:4.14,15.76,10.66,5.25,4.55;②感染巴西日圆线虫大鼠,传输淋巴细胞后4,8,12,16,20 d 的细胞因子表达水平为:IL-2:3.70,3.99,4.24,3.86,2.90;IL-3:3.45,3.78,4.46,3.99,3.25;IL-4:0.15,0.24,0.25,0.22,0.15;IL-5:0.16,0.16,0.06,0.07,0.05;IL-10:5.29,5.38,6.59,7.33,4.88;IFN-γ:3.24,3.39,3.78,3.42,3.02;TGF-α:3.99,14.54,10.33,6.29,4.01;TGF-β:5.14,16.26,15.74,10.83,6.98;③感染巴西日圆线虫大鼠,传输淋巴细胞培养上清治疗后4,8,12,16,20 d 的细胞因子表达水平为:IL-2:4.82,5.76,5.78,5.69,4.42;IL-3:2.99,4.04,3.21,3.38,2.57;IL-4:0.32,0.40,0.48,0.23,0.19;IL-5:0.22,0.22,0.18,0.13,0.11;IL-10:6.44,6.38,6.57,6.33,5.81;IFN-γ:3.24,3.09,3.11,2.70,2.97;TGF-α:4.09,14.55,11.33,8.2l,6.58;TGF-β:5.24,16.60,13.84,9.24.7.01.结论随着大鼠肠粘膜损伤的发生,IL-2 mRNA 的表达渐有增加,感染 Nb 后7 d～10 d 达到高峰,在损伤修复过程中表达水平变化无显著差异;IL-10的表达在粘膜炎症最严重时稍有增加,在修复过程中表达水平无显著差异;肠粘膜损伤后修复过程中,IL-3,IL-4,IL-5的 mRNA 的表达均有升高,TGF-α,TGF-β表达水平显著升高.这些细胞因子在肠粘膜损伤修复过程中作用不同.感染 Nb、转输大鼠肠道固有膜淋巴细胞和该淋巴细胞培养上清后,各细胞因子表达无显著化.

Ⅴ型腺病毒纤维蛋白基因真核表达质粒的构建及表达

目的 :构建腺病毒纤维蛋白基因的真核表达质粒 ,并检测其在真核细胞中的表达 ,为腺病毒靶向性载体构建创造条件。方法 :采用限制性内切酶技术 ,酶切腺病毒骨架质粒pAdEasy 1,经多次亚克隆 ,最后完成克隆纤维蛋白基因并构建其真核表达质粒。用脂质体法将构建好的真核表达质粒瞬时转染COS 7细胞 ,于转染后 72h ,用Westernblot法检测所表达的蛋白。结果 :克隆成功纤维蛋白基因 ,并构建纤维蛋白基因真核表达质粒pcDNA/Fiber,经限制性内切酶酶切鉴定及测序证实了其正确性。Westernblot结果显示 ,新表达蛋白在变性条件下大小为 6 2kD ,而在非变性条件下为 186kD。结论 :纤维蛋白基因真核表达质粒能在真核细胞中表达 ,产物具有三聚体结构 ,可用于腺病毒靶向性载体的构建。

Ⅴ型腺病毒纤毛基因的克隆及其在大肠杆菌中的表达

目的克隆腺病毒纤毛基因,为构建腺病毒靶向性载体创造条件。方法应用限制性内切酶酶切技术酶切腺病毒骨架质粒pAdEasy1,经多次亚克隆最后完成克隆纤毛基因并构建纤毛基因原核表达载体。用IPTG诱导纤毛蛋白的表达,再用SDS-PAGE和Westernblot对其进行分析。结果成功地克隆纤毛基因。质粒pBS/Fiber经限制性内切酶酶切鉴定及测序证实了其正确性。经质粒pQE/Fiber转化的细菌,在IPTG诱导下可表达一种新的蛋白,并于5h表达量最高。经Westernblot证实,在变性条件下表达蛋白的Mr为62000,在非变性条件下为186000。结论已克隆的纤毛基因能在大肠杆菌中表达,并具有三聚体结构,可用于腺病毒载体靶向性构建。

脂质体作为抗原载体及佐剂诱导免疫应答方式及强度的变化

脂质体做为蛋白及多肽抗原的载体及佐剂已广泛应用。其磷脂成份、净电荷、大小、层数及抗原的位置均影响免疫反应。主要的机理是脂质体可与网状内皮系统尤其是巨噬细胞相互作用,从而改变免疫应答的方式及类型,如增强体液免疫和细胞免疫(包括迟发性超敏反应及细胞毒淋巴细胞应答)。说明脂质体在细菌、病毒、寄生虫和肿瘤的疫苗领域大有前景。

微生物表面呈现技术及应用

微生物表面呈现技术以其广泛的应用前景 ,日益引起关注 .

胃粘膜异型增生的中医微观辨证分型与MG7抗原表达的关系及临床随访研究

目的 :探讨胃粘膜异型增生中医微观辨证分型与胃癌MG7抗原表达及临床随访结果的关系。方法 :应用中医脏腑辨证理论与ABC免疫组化方法 ,对 12 0例胃粘膜异型增生进行内镜下微观辨证分型 ,并与胃癌MG7抗原表达的关系进行免疫组化分析 ,同时进行临床随访研究。结果 :胃络瘀滞型与胃络灼伤型胃粘膜MG7抗原表达阳性率 (37 5 %、6 6 7% )较胃寒型及胃热型 (6 7%、12 5 % )明显增高 ,差异有非常显著性意义 (P <0 .0 1)。对其中6 3例进行了 6～ 72个月 (平均 2 4个月 )的随访 ,癌变组中胃络瘀滞型粘膜 (2 3/ 30 )明显高于未癌变组 (9/ 33) ,差异有非常显著性意义 (P <0 .0 1)。结论 :中医微观辨证分型对辨别胃粘膜异型增生的癌变性质具有重要意义 ,胃络瘀滞型胃粘膜异型增生与癌变关系密切。

胃黏膜异型增生微观辨证分型CdX2基因表达及随访研究

[目的]探讨胃脘痛胃黏膜异型增生患者中医微观辨证分型与CdX2基因蛋白表达的意义及与临床随访结果的关系。[方法]应用中医脏腑辨证理论与ABC免疫组化方法对120例胃脘痛胃黏膜异型增生患者进行胃镜下微观辨证分型与CdX2基因蛋白表达的免疫组化分析,同时进行临床随访研究。[结果]胃络瘀滞型与胃络灼伤型患者胃黏膜CdX2基因蛋白表达阳性率(37.5％、66.7％)较胃寒型与胃热型(6.7％、12.5％)明显增高(P<0.01),其中具有完整随访结果者63例,随访时间6-72个月(平均24个月),其癌变者中胃络瘀滞型(76.7％)明显高于未癌变者(27.3％)(P<0.01)。[结论]中医微观辨证分型与CdX2基因蛋白表达有关,对辨别胃黏膜异型增生的癌变性质具有重要意义,胃络瘀滞型胃黏膜异型增生与癌变关系密切,在辨证施治中应给予重视。