动物细胞系的染色体组型与遗传变异率分析

在建立国内首家犬、猫、猴、鼠传代细胞库，即７种动物肾细胞系（Ｆ－８１、ＣＲＦＫ、ＭＤＣＫ、Ｖｅｒｏ、Ｖｅｒｏ－２、ＭＡ－１０４、ＢＨＫ－２１）的种子库和工作库的基础上，通过细胞染色体组型、Ｇ带核型、染色体数目变异率、结构畸变率分析，了解７种细胞系传代培养不同代次的染色体变异情况。以相应的细胞株皮下接种裸鼠形成肿瘤实验、软琼脂细胞克隆形成率与植物凝集素作用下细胞凝集实验为对照，筛选出无致癌／致瘤性、符合细胞遗传学要求、无传染因子污染的细胞系（Ｆ－８１、ＣＲＦＫ、Ｖｅｒｏ、Ｖｅｒｏ－２）或极低致癌性的ＭＤＣＫ细胞系用于制苗，发现肿瘤细胞系高变异率株可在裸鼠体内快速选育成功。细胞系染色体遗传特征决定致瘤性质并具有种属特异性，得到一些１００％成瘤和１００％不成瘤的细胞株并探讨了与染色体组型的关系。对于肿瘤的发病机理及实验治疗，都是非常好的模型。一些细胞系不仅成瘤而且还可转移（致恶性横纹肌样瘤的ＢＨＫ－２１和Ｖｅｒｏ细胞株），其他致瘤细胞株只成瘤不转移或不明显转移。

驴抗犬细小病毒IgG的研制

用关中驴制备抗犬细小病毒 (CPV)免疫球蛋白 ,预防和治疗犬CPV感染。制备CPV抗原复合物 ,通过免疫驴 ,用纯化方法从驴血清中提取特异性抗体 (IgG) ,经过物理化学检定、血清学、免疫金电镜技术、动物效力实验。免疫驴均可产生特异IgG ,免疫金电镜可观察到抗原抗体免疫复合物 ;血凝抑制试验 (HI)≥1∶512(IgG浓缩浓度为60mg/mL) ;可保护犬免受CPV攻击 ;室温保存半年 ,4℃两年效价不变。已成功地应用CPV免疫驴制备出高效价特异性抗CPV -IgG。

动物细胞系的毒理学研究新进展

以犬五联和猫三联疫苗制备用细胞系的染色体组型分析和致癌/致瘤性鉴定为主,对动物细胞系的毒理学研究新进展进行评述。该毒理实验旨在确定供生物制品制造用和生物工程产品生产用动物传代细胞系有无致癌/致瘤性,只有无致癌/致瘤性的细胞系方可使用。本研究在中国生物制品...

抗猪瘟病毒IgG的研制

用驴制备抗猪瘟病毒 (HCV)免疫球蛋白 ,预防和治疗猪HCV感染。制备HCV抗原复合物 ,通过免疫驴 ,用纯化方法从驴血清中提取特异性抗体 (IgG) ,经过理化学检定、血清学、动物效力实验。免疫驴均可产生特异IgG ,Dot ELISA效价大于 1∶640 (IgG浓缩浓度为 60mg/mL) ;可保护猪免受HCV攻击 ;室温保存半年 ,4℃两年效价不变。已成功地应用HCV免疫驴制备出高效价特异性抗HCV IgG。

猪繁殖与呼吸综合征病毒形态学特征

应用电镜和免疫金电镜技术对猪繁殖与呼吸综合征病毒的中国分离株进行了形态学研究。该病毒粒子直径约 5 5nm ,多数呈球形 ,有囊膜 ,但在其囊膜上没有发现纤突结构。在病毒粒子中央部可观察到拟核 (核衣壳 ) ,其直径约为 4 0nm。在宿主细胞浆的空泡膜及滑面内质网小池膜上“出芽” ,成熟的病毒粒子多蓄积在空泡腔内。病毒增殖数量与其适应宿主细胞程度有密切关系。

猫鼻气管炎病毒、杯状病毒、泛白细胞减少症病毒的分离及其形态学观察

根据病毒的理化特性 ,从猫三联活疫苗中分离出猫鼻气管炎、猫杯状和猫泛白细胞减少症病毒 ;筛选出每种病毒敏感的细胞 ,并将该 3种病毒分别在其中传代与扩增 ;通过电镜观察此 3种病毒的形态学特征及其在宿主细胞内增殖部位、分布情况等 ,并以此对猫 3种病毒进行了初步鉴定。

恶性横纹肌样瘤(MRT)的起源研究——高变异率HeLa细胞致裸鼠产生MRT的实验研究

：HeLa细胞KB株、X株、NM20／X株、H株的染色体众数依次为60±3（超二倍体）、62±3（超二倍体）、68±3（超二倍体和亚四倍体）和78±2（亚四倍体），所占比率分别为72%～76%，69%，52%和40%。在纯化3代的肿瘤阴性对照二倍体猫肾（染色体众数38所占比率80%）和犬肾原代细胞皮下接种裸鼠的致癌／致瘤率分别为0%（0／22）和0%（0／10），X株HeLa细胞冻融裂解物皮下接种裸鼠产生进行性缩小肿瘤的比率为20%（1／5）的前提下，HeLa细胞KB株、X株、NM20／X株皮下接种裸鼠产生进行性生长恶性肿瘤的比率分别为100%（10／10），100%（25／25）和100%（5／5），H株细胞皮下接种裸鼠产生恶性肿瘤的比率为50%（5／10）。其中，只有HeLa细胞KB株10～11代（染色体结构畸变率高达20%，出现18%双着丝点和2%断片）以超高数量接种的1组4只裸鼠（0.17ml 12.75×107／鼠）才均形成MRT，特别是从染色体众数不同的3株HeLa细胞中筛选出致瘤性强的X株，连传20代后皮下接种裸鼠形成低分化肿瘤，定名为NM20／X株0代，其染色体众数因经裸鼠体内传代选育而明显增大（染色体众数为68±3，所占比率为52%），实体瘤手术切除后体外连传11代，再皮下接种裸鼠均形成MRT（5／5），但要求完形活细胞接种量要大（5～12×107／鼠），肿瘤产生?

犬肾细胞系的染色体组型分析与致癌/致瘤性的实验研究

以人类子宫颈癌细胞系Hela为阳性对照 ,以连传 3代的犬、猫肾原代细胞 (CKC、FKC)为阴性对照 ,对来自国内外不同单位收集的 4株MDCK传代细胞系培养 2 5～ 4 5代的完整活细胞或冻融裂解细胞进行裸鼠致癌 /致瘤实验观察 ,筛选出致癌性极低、符合细胞遗传学要求、无传染因子污染的几株MDCK细胞系用于制苗 ,并建立了相应的细胞种子库和工作库 ,供科研和生产使用 ,4年运转很好。不同代次MDCK细胞系染色体众数所占比率的相差率一般不超过 5 %～ 15 % ,结构畸变率一般为 0～ 3%。研究表明 ,MDCK细胞染色体遗传特征决定致瘤性质 ,并具有种属特异性 ,MDCK细胞不论核型如何 ,始终具有致癌性 ,但其致癌 /致瘤性差 ,只有超二倍体以上细胞才具有高的致癌 /致瘤率 (如YA株的为 2 8/ 5 8) ,亚二倍体细胞的致癌 /致瘤率很低 (其它 3株MDCK细胞的致癌 /致瘤率为 5 / 5 4 ) ,且一般致上皮源性恶性肿瘤 ,多为高中分化腺癌。冻融裂解癌细胞系 (X株Hela、JA株Vero、M株BHK 2 1、YA株MD CK)的致癌 /致瘤性相应降低 ,极低致癌 /致瘤性细胞系 (M株或JC株MDCK)不会因冻融裂解而增加致癌 /致瘤性。证明MDCK细胞系冻融裂解物不致癌 ,降低制苗毒液中细胞系基因含量 ,完全可以将MDCK细胞系 (M ,JB ,JC株 )用于犬五联苗生产。MDCK细胞?

免疫金电镜技术检测犬细小病毒免疫球蛋白

本文应用免疫金电镜技术检测犬细小病毒免疫球蛋白（Ｉｇ）。检测结果证明驴抗犬细小病毒所产生的Ｉｇ对犬细小病毒具有较强的特异性反应。因此认为，第四军医大学动物保健品研制中心所制备的免疫球蛋白对犬细小病毒性肠炎和心肌炎具有良好的治疗和预防作用。

应用免疫金电镜技术检测犬的两种副粘病毒免疫球蛋白

应用免疫金电镜技术检测犬瘟热病毒 (CDV)和犬副流感病毒 (CPIV )免疫球蛋白 (Ig)。结果证明驴所产生的Ig与CDV、CPIV具有较强的特异性反应。

犬五联病毒活疫苗制备用犬肾细胞系的建库筛选与检定

以人类子宫颈癌细胞系Hela为阳性对照 ,以连传 3代的犬、猫肾原代细胞 (CKC、FKC)作为阴性对照 ,对来自国内外不同单位收集的另外 4株MDCK传代细胞系培养 2 5～ 6 7代的完整活细胞进行裸鼠致癌 /致瘤实验观察 ,筛选出致癌性极低、符合细胞遗传学要求、无传染因子污染的 2株MDCK细胞系用于制苗 ,并建立了相应的细胞种子库和工作库 ,供科研和生产使用 ,4年运转很好。不同代次MDCK细胞系染色体众数所占比率的相差率一般不超过 5 %～ 15 % ,结构畸变率一般为 0～ 3%。研究表明 ,MDCK细胞染色体遗传特征决定致瘤性质 ,并具有种属特异性 ,MD CK细胞不论核型如何 ,始终具有致癌性 ,但其致癌 /致瘤性差 (2 3/ 5 9) ,且一般致上皮源性恶性肿瘤 ,多为高中分化腺癌。降低制苗毒液中细胞系基因含量 ,完全可以将MDCK细胞系 (WB和H株 )用于犬五联苗生产。MDCK细胞超二倍体YB株和亚二倍体与超二倍体KA株不能用作病毒活疫苗培养基质。找出了MDCK细胞系的染色体变异率、软琼脂中克隆形成率、对植物凝集素的凝集性和在裸鼠体内形成癌肿的潜力之间的可能相关性 ,发现细胞系染色体数目增加、克隆形成率增高、凝集性增强 ,则致癌

应用电镜技术对狂犬病不同毒株的形态学研究

将狂犬病固定毒CTN株 (中国济南株 )、CVS株 (国际标准攻击毒株 )、ERA株 (兽用疫苗弱毒株 ) ,分别在小鼠脑组织增殖及ERA毒株在BHK2 1 传代细胞增殖 ,通过超薄切片和负染色制备样品 ,电镜观察。结果发现 ,在相同鼠脑组织中 ,CTN株病毒粒子比较难查找 ,而CVS株和ERA株较易被发现。另外 ,在不同毒株的脑组织和细胞培养物中还发现了大量的非典型粒子 ,诸如削了顶的粒子以及锥形、柱形等形态 ,同时还发现了胞浆包涵体。通过试验 ,我们认为 :( 1)典型病毒数量与免疫原性呈正相关。 ( 2 )在观察鼠脑组织中的病毒时 ,发现有神经髓鞘部位是难以找到病毒粒子的。 ( 3)狂犬病病毒粒子存在于宿主细胞浆内 。

抗犬细小病毒免疫球蛋白临床应用研究

用犬细小病毒性肠炎免疫球蛋白注射液对382例临床诊断为犬细小病毒性肠炎病犬进行了治疗,结果治愈344只,治愈率为90.05%;早期治疗效果更好,小于3个月的幼犬治愈率为93.88%。对临床病例进行分析,进一步证明该产品对犬细小病毒病的治疗是有效的。

横纹肌样瘤的起源研究——高变异率BHK-21细胞致裸鼠产生恶性横纹肌样瘤的实验研究

横纹肌样瘤（ＲＴ）的起源迄今仍是世界上悬而未决的重大难题。第一例ＲＴ发现于肾脏。但迄今发现的ＲＴ均难以复制成功。在纯化３代的肿瘤阴性对照猫肾和犬肾原代细胞皮下接种裸鼠的致癌／致瘤率为０％（０／３２），肿瘤阳性对照Ｈｅｌａ细胞皮下接种裸鼠产生进行性生长恶性肿瘤的比率为１００％（４０／４０）的前提下，ＢＨＫ－２１细胞皮下接种裸鼠均产生进行性生长的恶性肿瘤（６５／６５），其中染色体众数为４０±２（比率５８％～６８％）的ＫＡ株致ＲＴ比率为５２．３８％（１１／２１），具有两个染色体众数４０±２（比率４１％～５３．５）和７２±２（比率３１％～３５％）的ＹＡ株致ＲＴ的比率为８３．３３％（１０／１２），染色体众数为７３±３（比率４２％～５０％）的成瘤细胞体外再培养ＮＭ２８／ＹＡ株致ＲＴ的比率为７１．４３％（１５／２１），染色体众数为４２（比率２８％～３０％）的Ｍ株致ＲＴ的比率为０％（０／１０），致形态类似于分化比较好的平滑肌肉瘤的恶性肿瘤的比率为１００％（１０／１０），可见ＢＨＫ－２１细胞不能用作病毒活疫苗培养基质，可替代Ｈｅｌａ细胞用作恶性肿瘤阳性对照细胞。高变异率ＢＨＫ－２１细胞株皮下接种无胸腺裸鼠大多产生恶性ＲＴ（２?

电镜技术检验犬四联弱毒苗种子毒及成品的外源病毒

我们用电子显微镜（电镜）技术，检验犬四联弱毒疫苗种子毒及其成品疫苗中的外源毒。经对每批种子毒细胞培养物及间隔一定批次成品疫苗抽样检查，其中在一批种子毒细胞培养物中发现了呼肠病毒污染，得到及时有效的处理。同时证明应用电镜技术检验外源病毒确是一种快速而有效的方法。

Vero-2和MA-104细胞系染色体组型分析与致癌─致瘤性研究——在犬五联疫苗制备中替代BHK-21细胞系细胞株的筛选和检定

在用纯化３代的猫肾原代细胞（ＦＫＣ）和犬肾原代细胞（ＣＫＣ）皮下接种裸鼠无致癌致瘤性，以人类子宫颈癌细胞系（Ｈｅｌａ）超二倍体ＫＢ株、Ｘ株及超二倍体和亚四倍体ＮＭ２０／Ｘ株皮下接种裸鼠产生进行性恶性肿瘤比率分别为１０／１０，２５／２５和５／５的前提下，非洲绿猴肾细胞系亚二倍体（Ｖｅｒｏ２）ＪＣ株５～１９代和超二倍体ＹＡ株１２～１８代分别皮下接种２０和１０只裸鼠，均未产生肿瘤，恒河猴肾细胞系亚四倍体（ＭＡ１０４）ＪＣ株４代皮下接种５只裸鼠亦未产生肿瘤。不同株的Ｈｅｌａ和地鼠肾细胞系（ＢＨＫ２１）在３．３ｇ／Ｌ琼脂中均具有抛锚独立生长特性，并在终浓度３．１２５～２００ｍｇ／ｍＬ植物凝集素（ＰＨＡ）作用下出现凝集现象，而ＦＫＣ、ＣＫＣ及Ｖｅｒｏ２细胞系ＪＣ株、ＹＡ株既不具有抛锚独立生长特性，在不同浓度ＰＨＡ作用下也不发生凝集，符合非肿瘤源性细胞的特性。因此，Ｖｅｒｏ２细胞系ＪＣ株可用作病毒疫苗毒株的传代培养，而Ｖｅｒｏ２细胞系ＹＡ株和ＭＡ１０４细胞系ＪＣ株则不适宜。

应用电镜技术快速检测传代细胞中的污染因子——传代细胞污染细菌的快速检测

应用电镜技术检测传代细胞中的细菌污染 ,即快速又准确。根据细菌的形态及其鞭毛、噬菌体等指标的其中一项均可以判定细菌的污染 。

犬腺病毒Ⅱ型弱毒疫苗株的分离、鉴定与筛选

应用犬肾传代细胞 (MDCK) ,通过人“O”型红细胞吸附和氯仿处理等方法 ,从美国犬四联弱毒疫苗中分离出一株腺病毒 ,经形态、理化及生物学特性等系统鉴定证明 :该毒株是犬Ⅱ型腺病毒 ,命名为CAV2 XN3 株。实验将该病毒复制成弱毒疫苗 ,免疫 8只 2月龄当地幼犬 ,经临床观察证明 ,试验犬未出现不良反应 ;免疫后 14天采血测定血清中和抗体效价达到 1∶12 8,免疫后 2 5天血清中和抗体效价达到 1∶2 5 6 ,免疫后 10个月降至 1∶32 ,但仍能耐受强毒攻击 ,而对照组 4只犬则发病死亡。表明该弱毒疫苗激发免疫快 ,免疫期长 ,安全有效。

应用电镜技术对犬腺病毒及其免疫球蛋白的检测

应用电镜技术及免疫金电镜技术检测犬腺病毒及驴抗犬腺病毒免疫球蛋白 ( Ig)。实验结果证明了由驴所产生的 Ig对犬腺病毒具有较强的特异性反应 ,对犬肝炎。