Shh反义核酸对体外培养小鼠牙胚发育的影响

目的用Shh反义寡脱氧核苷酸(ODN)抑制体外培养小鼠牙胚中Shh的翻译,观察该抑制反应对牙胚生长及矿化的影响。方法培养牙胚取自胎龄为E17.5d昆明小鼠下颌第一磨牙,利用简易Trowell支架,建立小鼠牙胚体外培养模型,实验共分为三组:反义ODN组;正义ODN组及空白对照组,核酸浓度为30μmol/L。体外分别培养10d后,进行HE染色、von Kossa染色。结果蛋白印迹结果显示所应用的反义核酸阻断了牙胚中Shh的表达。HE、von Kossa染色结果显示:培养10d,S-ODN组与空白对照牙胚进入钟状晚期,细胞分化,并可见分泌的基质带;钙磷酸盐在成牙本质细胞与成釉细胞间的基质中沉积。AS-ODN组牙胚培养10d,牙胚进入钟状期,但牙胚体积明显变小,牙尖形态发育不良,成牙本质细胞排列紊乱,但仍可见高柱状分泌期细胞;von Kossa染色未见明显钙磷酸盐沉积。结论Shh反义核酸减缓体外培养牙胚的发育,可能通过对成牙本质细胞分泌功能的影响而影响牙胚的矿化。

人牙胚Shh的基因克隆和序列分析

目的 :从人牙胚组织克隆Shh的全部编码区 ,测定并分析其基因序列。方法 :利用RT -PCR方法 ,扩增人Shh基因片段 ,将基因片段插入 pMD18-T载体 ,限制性内切酶酶切鉴定 ,测定序列。 结果 :从人牙胚中成功扩增Shh ,Blast分析与GeneBank公布的Shh基因编码区一致。结论

秦巴山区儿童FRAXE脆性位点CGG重复多态性分布及与智力的相关性分析

采用PCR扩增技术和聚丙烯酰胺凝胶电泳技术,并结合测序,对秦巴山区随机抽样儿童及不同智力水平儿童的FRAXE脆性位点CGG重复序列进行检测。并把所得的CGG重复数与智测成绩(用韦氏儿童智力量表(C-WISC)进行智力测量)做关联分析。结果表明,FRAXE脆性位点CGG重复的等位基因分布范围在不同地域人群中有所差异,同一地域人群中等位基因频率分布基本一致;随机抽样儿童的CGG重复多态性与智力没有相关性(r=0.083,P>0.05),男性和女性的CGG重复多态性分别与儿童智力也无相关性(r男=0.225,r女=?0.041,P>0.05);在智力低下(MR)、边缘和正常儿童中,CGG重复数值之间也没有显著性差异(F=0.195,P>0.05)。因而认为,秦巴山区儿童FRAXE脆性位点CGG的正常重复多态性(重复数为8-30)与其智力成绩亦无相关性。

HUMARA多态性与男性动脉粥样硬化的关系

应用多聚酶链式反应对 96例老年 AS患者及 92例非 AS老年人 HUMARA- STR位点进行多态性分析。结果表明 :1在 HUMARA位点重复单位 CAG,对照群体片段大小 2 80～ 4 4 5 bp,重复次数为 N=2 3～ 77,杂合度为 83% ,多态信息量为 0 .76。 2 AS人群中 HU MARA位点片段大小 2 2 0～ 4 4 5 bp,重复次数为 N=2～ 77,杂合度为 89% ,多态信息量为 0 .80。 3将男性的 AS组与对照比较差异显著 ;AS组男性与女性比较差异显著。

Shh在大鼠牙胚发育过程中的表达

目的 :通过检测Shh(SonicHedgehog)在大鼠牙胚发育不同时期的表达 ,探讨其在牙齿发育过程中的作用。方法 :采用免疫组化方法 ,观察大鼠牙齿发育各阶段标本中Shh的表达。结果 :大鼠牙齿发育早期 ,Shh表达于口腔上皮和牙上皮 ;帽状期表达于成釉器 ;钟状期 ,成釉细胞和成牙本质细胞表达阳性。结论 :Shh在牙齿发育过程中的表达有时空特异性 。

人WNT6的基因克隆和序列分析

目的:从人胎盘组织克隆WNT6的全部编码区,测定并分析其基因序列。方法:利用RT-PCR方法,扩增人WNT6基因片段,将基因片段插入pMD18-T载体,限制性内切酶酶切鉴定,测定序列。结果:重组质粒pMD18-T-WNT6酶切鉴定正确,测序结果经Blast分析与GeneBank公布的WNT6基因编码区一致。结论:成功克隆人WNT6编码区基因,为体外表达其活性蛋白奠定了基础。