还原变性核糖核酸酶的高效液相色谱复性

目的:研究还原变性的核糖核酸酶(RNase)在高效疏水作用色谱(HPHIC)及高效离子交换色谱(HPIEC)上的复性及影响因素.方法:在二硫苏糖醇(DTT)存在的条件下用盐酸胍(GuHCl)和尿素(Urea)将RNase变性还原,先在溶液中加入氧化型谷胱苷肽(GSSG)进行氧化,然后在流动相中有低浓度变性剂存在的条件下,用HPHIC,HPIEC及稀释法对其进行复性并测定其生物活性及回收率.结果:HPHIC和HPIEC对RNase的复性效率均高于稀释法,两者的色谱固定相对RNase的复性均有所贡献.在色谱流动相中加入低浓度的变性剂可以提高复性效率,改变GSSG的浓度对复性效率也有影响.结论:用HPHIC,HPIEC对RNase进行复性,不仅复性效率高,而且快速、简便,具有很好的应用前景.

增强型绿色荧光蛋白与MAGE-n共表达载体的构建及表达

目的构建增强型绿色荧光蛋白(enhancedgreenfluorescentprotein,EGFP)与人黑色素瘤抗原-n(melanomaantigenn,MAGE-n)真核共表达载体,并在小鼠黑色素瘤B16细胞中进行表达。方法采用酶切法从pLXSN-MAGE-n中得到MAGE-n基因片段,克隆至真核表达载体pIRES2-EGFP中,构建真核共表达质粒pIRES2-EGFP-MAGE-n。用脂质体法转染小鼠黑色素瘤B16细胞,G418筛选阳性克隆,荧光显微镜检测阳性克隆中EGFP的表达,RT-PCR、Westernblot和免疫组化分别检测阳性克隆中MAGE-nmRNA和蛋白的表达水平。结果从pLXSN-MAGE-n重组质粒中酶切获得一条约950bp的片段,成功构建了真核共表达载体pIRES2-EGFP-MAGE-n,转染B16细胞后筛选得到阳性克隆,可见到EGFP的表达,产生明亮的绿色荧光,RT-PCR检测到MAGE-nmRNA的表达,Westernblot和免疫组化检测到MAGE-n蛋白的表达。结论成功构建了共表达质粒pIRES2-EGFP-MAGE-n,获得了稳定共表达EGFP和MAGE-n的小鼠黑色素瘤B16细胞系,为进一步研究MAGE-n在肿瘤免疫治疗中的作用奠定了基础。

多元化口腔医学实验教学模式探讨

随着教育信息化的深入发展，计算机仿真技术、多媒体网络技术的日益普及，第四军医大学口腔医院教学中心将教学与信息技术相结合，在口腔临床实验教学中逐步应用多元化教学模式。不仅节省了教员、耗材的投入，更提高了口腔实验教学质量，实现了教学现代化。