口腔生物医学实验室的安全管理与防护措施

口腔生物学实验室是开展口腔医学研究的重要场所,也是培养高素质人才的重要基地。本文归纳了此类实验室可能存在的安全隐患和管理问题,并提出了相应的应对策略。

口腔生物学课程教学改革探讨

口腔生物学是一门介于基础医学与口腔临床医学之间的桥梁学科。随着各学科之间的交叉与渗透,本学科受到越来越多的关注。本文从教材的选择、教学内容的优化、教学方法的改革等方面对口腔生物学课程教学改革进行了探讨,旨在进一步提高课程教学质量。

国内外口腔生物学的发展及其思考

口腔生物学诞生于19世纪末,是一门距今100余年的口腔基础学科。生物学及其分支学科的百年发展为口腔生物学注入了持续鲜活的力量,使得这门学科的内容丰富多样、发展迅速,本文从学科发展的角度,回顾国内外口腔生物学的发展历程,结合历史,探讨目前口腔生物学的学科特征以及未来的发展趋势。

口腔罕见病与遗传病生物样本库的建立与完善

目的:建立口腔罕见病与遗传病生物样本库,实现样本信息系统化管理。方法:以第四军医大学口腔医院为依托,与符合或疑似口腔罕见病与遗传病病症的患者或家属签订知情同意书,采用相关技术提取各类样本,完善样本的临床、遗传及分子生物学信息,录入生物样本库管理系统,通过系统产生的二维条码实施样本入库。定期对样本进行质量控制。结果:自2010年起筹建口腔罕见病与遗传病生物样本库,于2011年开始录入样本,目前已经实现了对7 000余份口腔罕见病与遗传病样本的系统信息化管理,这些样本包括血液、组织、细胞、DNA、RNA、蛋白、引物等多种类型;在样本库建立和维护的过程中,从样本入库、保存、出库等多个环节实现了对样本的质量控制,同时还制定了近10种规章制度完善生物样本库的建设。结论:口腔罕见病与遗传病生物样本库的建立使疾病样本的储存系统化和规范化,为保留珍贵的疾病样本资源提供了保证,也为科研课题的实施和科研单位之间的合作提供了便利。

口腔颌面部肿瘤细胞系中PTEN抑癌基因蛋白表达的研究

目的:研究口腔颌面部恶性肿瘤细胞系内源性PTEN蛋白的表达,比较高转移性癌细胞系与亲本细胞PTEN蛋白表达的差异。方法:应用ABC免疫组化染色法,检测8例癌细胞系PTEN蛋白的表达,包括舌癌细胞系Tca8113和HSC-3、口底癌细胞系HSC-2、颊癌细胞系BcaCD885、粘液表皮样癌细胞系MEC-1、腺样囊性癌细胞系SACC83以及高转移性舌癌细胞系Tb-TLP和高转移性粘液表皮样癌细胞系M3SP2。结果:5/8例癌细胞系PTEN蛋白的表达呈阳性,PTEN蛋白定位于靠近 细胞核周围的细胞质中。3/8例癌细胞系PTEN蛋白的表达呈阴性,即BcaCD885细胞及高转移性Tb-TLP和M3SP2细胞。结论:PTEN蛋白表达缺失与癌细胞转移可能有一定的关系。

全反式维甲酸与8-甲氧基补骨脂素联合应用对口腔鳞癌细胞系的抑制作用

为研究全反式维甲酸（ＲＡ）与８－甲氧基补骨脂素（８－ＭＯＰ）联合应用对２种口腔鳞癌细胞系的抑制作用特点，应用ＭＴＴ法测试并绘制药物抑制曲线，用倒置显微镜观察细胞形态变化。结果表明：３０％细胞生长抑制时，联合用药合并指数（ＣＩ３０）不大于０．８２；５０％细胞生长抑制时，联合用药联合并指数（ＣＩ５０）在０．９到０．９５之间，表明两药联合应用对２种口腔鳞癌细胞系呈现协同效应。单独应用ＲＡ、８－ＭＯＰ或二者联合应用，有类似凋亡小体样结构出现。

常见伴随指/趾甲异常的口腔遗传性疾病

许多口腔遗传性疾病同时伴随指/趾甲的特征改变,这些指/趾甲的特征通常为某些综合征的局部表现,其病因复杂,临床表现多样,具有遗传异质性。本文对同时具有指/趾甲病变的8种口腔遗传性疾病进行了归纳,分别描述了这些疾病的临床特征、候选致病基因、鉴别诊断。旨在促进口腔科医生全面地认识相关疾病,并进行有效的治疗。

组织蛋白酶K与口腔颌面部疾病

组织蛋白酶K(cathepsin K,CTSK)曾被认为是破骨细胞特异性的胶原酶,在骨吸收过程中发挥重要作用。但随着研究的深入,人们发现CTSK在更加广泛的细胞、组织及器官中均有表达,不仅参与机体正常生理活动的调节,还与多种疾病的发生发展密切相关。本文综述了CTSK在牙周炎、种植体周围炎、牙齿移动、口腔颌面部肿瘤、牙根吸收及根尖周病等口腔颌面部疾病中的研究进展。

c-erlbB-2原癌基因与口腔鳞状细胞癌

c-erbB - 2属于受体—酪氨酸激酶类癌基因 ,属于表皮生长因子受体家族成员之一 ,是人类肿瘤中发生改变频率最高的癌基因之一。本文就c -erbB - 2的结构、分子水平调控、与肿瘤的发生、转移以及在口腔鳞状细胞癌中的过度表达同分化。

涎腺粘液表皮样癌高转移细胞克隆的筛选及其生物学特性

目的：筛选人涎腺粘液表皮样癌高转移克隆细胞并研究其生物学特性．方法：采用裸鼠体内人工肺转移和体外细胞培养的方法筛选克隆细胞，应用细胞计数法、染色体显示法、软琼脂克隆形成法、流式细胞术及裸鼠体内试验法研究细胞的生物学特性．结果：经裸鼠体内３次筛选人涎腺粘液表皮样癌细胞系ＭＥＣ１（Ｍ）获得细胞亚系Ｍｃ，经克隆化培养从Ｍｃ获得细胞克隆Ｍｃ１，Ｍｃ２和Ｍｃ３．Ｍ，Ｍｃ，Ｍｃ１，Ｍｃ２和Ｍｃ３细胞的染色体为亚二倍体，保持人类染色体核型，所致肿瘤显示粘液表皮样癌组织学特征．它们的群体倍增时间分别为２４．１，２２．５，２４．０，２３．０和２２．６ｈ；克隆形成率（％）分别为１．８±０．３，２．６±０．４，０．３±０．２，０．４±０．２和２３３±１．９；细胞周期中Ｓ期细胞所占比例（％）分别为２２９，１６．９，６．４，５．９和２４．５；野生型Ｐ５３蛋白阳性表达率（％）分别为４７．４，３４．１，４５．１，５３．１和２４．０；与Ｍ相比较，Ｍｃ，Ｍｃ１，Ｍｃ２和Ｍｃ３引起的裸鼠肺转移结节形成率（％，Ｍ＝１００）分别为２３９，５６，８５和３３８．结论：Ｍｃ３是从ＭＥＣ１细胞系中筛选出的人涎腺粘液表皮样癌高转移克隆细胞．

人涎腺粘液表皮样癌耐药细胞系的建立及其生物学特性

目的 建立人涎腺粘液表皮样癌细胞系耐药细胞株并观察其生物学特性及耐药性能 .方法 采用浓度递增法长期不间断诱导并经克隆化筛选 ,建立稳定的人涎腺粘液表皮样癌细胞系耐药细胞株 (MEC- 1/ 5 - FU) .应用 MTT法、细胞计数法、软琼脂克隆形成试验、流式细胞术、免疫组化、电镜等方法观察及检测该细胞株的生物学特性、耐药性能及参数 .结果 倒置显微镜观察该耐药细胞和其亲本涎腺粘液表皮样癌细胞系 (MEC- 1)的细胞生长活跃 ,MEC- 1为单层贴壁生长于培养器皿中 ,MEC- 1/ 5 - FU则可见重叠生长 ,两种细胞形态及超微结构未见明显改变 .MEC- 1/ 5 - FU和 MEC- 1细胞的群体倍增时间分别为 2 8.8h和 30 .0 h;克隆形成率分别为4.9%和 1.2 %;细胞周期分布 S期细胞分别为 2 5 .4%和17.1%.MEC- 1/ 5 - FU耐药性能稳定 ,给药剂量已达 1.980μg· L- 1 . 12种化疗药物对 MEC- 1/ 5 - FU和 MEC- 1生长抑制作用的剂量效应参数显示 :耐药细胞诱导作用药物 5 - FU对 MEC- 1/ 5 - FU细胞和 MEC- 1的半抑制浓度 (IC50 )值分别为 6 .310 μg· L- 1和 0 .44 7μg· L- 1 ,耐药倍数为 14.1;药物敏感性试验结果同时可见该耐药细胞株对 VCR,VBL ,PYM,DNR,VP16 ,CODP,PADM等化疗药物的 IC50 较MEC- 1表现不同程度的耐药性 ,

人涎腺上皮细胞体外培养及其生物学特性的初步研究

目的建立体外培养人涎腺上皮细胞的方法,观察其体外生长的生物学特性。方法应用组织块培养法,用无血清培养基(SFM),无血清1∶1DMEM/F12以及含25ml/L胎牛血清的1∶1DMEM/F123种不同的培养基对10例人涎腺标本进行体外原代和传代培养。用倒置显微镜观察培养细胞体外生长的形态特征。用细胞计数法观察细胞生长情况。用HE染色、PAS染色、细胞角蛋白、Vimentin免疫组化染色对培养细胞进行形态学检查和鉴定。结果10例人涎腺标本在体外原代培养均有细胞长出,培养的细胞为上皮样。用SFM培养的细胞增殖较旺盛,可传代培养5次,用其它2种培养基培养的细胞仅可传代1次。细胞角蛋白染色阳性,Vi-mentin染色阴性,PAS染色阳性。结论应用组织块培养的方法可以获得原代和传代培养的人涎腺上皮细胞,SFM较1∶1DMEM/F12更适宜涎腺上皮细胞生长。

体外培养的大鼠骨髓基质细胞的生物学特性

目的 :研究体外培养的大鼠骨髓基质细胞的生物学特性及其成骨细胞表型特征。方法 :分离大鼠四肢长骨骨髓基质细胞 ,常规和矿化培养液培养 ,测定细胞生长曲线 ,碱性成纤维细胞生长因子 (bFGF)、重组人骨形成蛋白 -2 (rhBMP -2 )及矿化培养液对骨髓基质细胞碱性磷酸酶 (ALP)活性的影响 ,观察矿化结节的形成。结果 :大鼠骨髓基质细胞群体倍增时间 (DT )为 66.1h ;在矿化液培养条件下细胞DT为 5 0 .3h。bFGF和rhBMP -2均不同程度增加骨髓基质细胞碱性磷酸酶的活性。矿化液有较明显的增加骨髓基质细胞碱性磷酸酶活性的作用 ,用茜素红染色法显示较多的深红色矿化结节 ;常规培养条件下大鼠骨髓基质细胞生长虽呈现密集单层 ,没有矿化结节形成。结论 :大鼠骨髓基质细胞在体外可以稳定传代培养 ,在矿化培养液诱导培养条件下可以向成骨细胞分化 ,bFGF和rhBMP -2有助于骨髓基质细胞表现成骨细胞表型特征 ,提示骨髓基质细胞在骨移植研究领域有重要的应用价值。

人涎腺黏液表皮样癌多药耐药细胞系的建立及其生物学特性

目的:建立一种耐药性稳定的人涎腺黏液表皮样癌细胞株(MEC/5-FU),为研究其耐药机制和逆转药物的筛选奠定实验基础。方法:采用浓度递增法联合大剂量冲击诱导方法,建立稳定的MEC/5-FU。应用MTT法、RT-PCR、罗丹明123蓄积试验等方法检测该细胞株的耐药性能及其生物学特性。结果:MEC/5-FU耐药性能稳定,对5-FU的耐药倍数达到36.11,并且对其他几种化疗药物表现不同程度的交叉耐药性。RT-PCR显示耐药相关基因ABCA2、ABCB1、ABCB11、ABCC1、ABCC4等ABC家族基因在MEC/5-FU细胞中明显高表达。罗丹明123在MEC/5-FU细胞中的蓄积量远低于MEC细胞。结论:MEC/5-FU具有多药耐药特性,为人涎腺黏液表皮样癌耐药机制和耐药逆转研究提供了理想的实验模型。

PTEN抑癌基因对高转移性黏液表皮样癌细胞系生物学行为的影响

目的 探讨外源野生型PTEN抑癌基因对人高转移性黏液表皮样癌细胞系M3SP2体外黏附、迁移和侵袭特性的影响。方法 用脂质体介导方法将PTEN抑癌基因导入M3SP2细胞系 (M3SP2 -PTEN细胞 ) ,转染空载体的细胞系作为对照(M3SP2 -pBp细胞 ) ,分别用四甲基偶氮唑蓝 (MTT)比色法、细胞迁移试验及细胞侵袭试验测定M3SP2 -PTEN细胞和M3SP2 -pBp细胞体外黏附、迁移和侵袭能力。结果 M3SP2 -PTEN细胞在Metrigel和Fn基质上黏附数量减少 ,与对照组比较差异有显著性 (P <0 0 1) ,黏附抑制率分别为 34 3%和 4 9 4 %。M3SP2 -PTEN细胞在Matrigel基质上迁移距离小 ,与对照组比较差异有显著性 (P <0 0 5 ) ,迁移抑制率为 2 6 0 %。M3SP2 -PTEN细胞体外侵袭细胞数量减少 ,与对照组比较差异有显著性 (P <0 0 1) ,侵袭抑制率为 31 4 %。结论 外源性PTEN抑癌基因对高转移性黏液表皮样癌细胞系M3SP2体外黏附、迁移和侵袭具有抑制作用。

阻断氯离子通道对小鼠成牙本质细胞MDPC-23生物学特性影响的研究

目的:研究氯离子通道对小鼠成牙本质细胞MDPC-23生物学特性的影响。方法:应用MTT、生化分析、荧光染色等方法,观察NPPB阻断氯离子通道之后MDPC-23细胞增殖,ALP活性以及形成细胞外矿化基质的能力等方面的变化。结果:氯离子通道被阻断后,细胞的增殖速度减慢,培养上清中的碱性磷酸酶活性明显增高,而且细胞外矿化结节的形成时间比对照组缩短。结论:阻断氯离子通道可抑制成牙本质细胞MDPC-23的增殖,但对其矿化有一定的促进作用。

碱性成纤维细胞生长因子对骨组织的生物学效应

目的 :通过本文的综述 ,使读者了解碱性成纤维细胞生长因子的生物学特性及对骨组织的生物学效应。方法 :采用光盘检索及查询有关中外文献。结果 :碱性成纤维细胞生长因子是一种生物因子 ,其可以诱导骨组织及血管组织细胞的分裂。结论 :碱性成纤维细胞生长因子有诱导成骨作用及诱导血管的形成。

ARHGAP29内含子区域SNP位点的生物信息学分析

目的:通过生物信息学方法对全基因组关联分析(GWAS)得到的ARHGAP29内含子区域的单核苷酸多态性(SNP)进行深度分析,对目标SNP进行信息注释及功能预测。方法:根据病例对照实验筛选出4个有统计学意义的SNP位点,运用美国国家生物技术信息中心(NCBI)中的SNP数据库、3D SNP数据库,RegulomeDB数据库、LncSNP2.0数据库等多种信息分析方法对SNP的生物学信息及相关长链非编码RNA(LncRNA)的功能进行预测。结果:4个SNP(rs3814019、rs72964308、rs17396055、rs7540684)均位于1号染色体,rs72964308的次要等位基因频率(MAF)值小于0.05,在后续分析中将其排除。目标SNP可通过三维的染色质环与ABCA4、ARHGAP29相互作用,线性距离95~200 kb。SNP在多种组织中位于增强子区,在个别组织中属于转录起始位点。rs17396055的转录因子信息中DNA可接近性较高,表明其转录活性较强。rs17396055和rs7540684相关的LncRNA预测显示相关性最高的疾病为唇腭裂。结论:上述生物信息学方法表明rs3814019、rs17396055、rs7540684在多种细胞类型中发挥调控作用,与rs17396055、rs7540684相关的LncRNA可能与颅颌面发育有关。

口腔遗传性疾病系列讲座（六） 口腔遗传性疾病相关的生物信息资源

在口腔遗传性疾病的临床和基础研究工作中,需要掌握一些网络资源,实时查询疾病相关知识以及遗传病相关致病基因的信息、模式生物资源等.如何查阅遗传性疾病的相关文献、临床信息、基因和分子背景将是本讲的主要内容,现介绍与口腔遗传疾病相关联的数据库.

国内外口腔生物学课程内容的对比研究与教学启示

本文通过查询文献和网络资料,总结了北美、欧洲、澳大利亚、日韩以及其他国家地区口腔生物学的课程相关内容,涉及教学目标、课程内容与考核方式;比较了这些院校之间、国外与我国口腔生物学课程的差异,并分析了产生这些差异的原因。对比发现,国外口腔生物学教学对象大多为研究生,教学目标更注重培养学生的科研能力,课程内容差异较大;而国内教学对象兼顾本科生和研究生,注重基础知识讲授,多数依赖于统编教材,课程内容差异小。产生差异的原因可能与教学制度和体系的差异以及培养目标不同有关。研究结果有助于我国口腔生物学未来学科发展与课程体系的完善和发展。