HLA-DR在口腔鳞状细胞癌组织中的表达及临床意义

目的 探讨HLA DR抗原在口腔鳞状细胞癌组织中的表达及其意义。方法 采用S P免疫组化的方法 ,利用HLA DR的单克隆抗体检测 4 7例口腔鳞癌组织中HLA DR的表达。结果 正常上皮组织中HLA DR的表达为阴性 ,在各级口腔鳞癌中均有表达 ,且表达的阳性率随口腔鳞癌分化程度的下降而下降 ,在不同病理分级之间的阳性率有显著性差异 (P <0 .0 5 ) ,且与临床分期有关 (P <0 .0 5 )。结论 HLA DR抗原可能作为口腔鳞癌发生、发展不同时期的一个标志物 ,并对判断口腔鳞癌的预后有一定价值。

口腔颊粘膜癌组织中CD1a^+的树突状细胞的免疫组化分析

目的通过免疫组化技术分析树突状细胞(dendritic cell,DC)在口腔颊粘膜鳞状细胞癌(oralsquamous cell carcinoma,OSCC)中的表达,探讨其在肿瘤组织中的功能状态。方法随机选取22例临床收集的未经任何其他非手术治疗的颊粘膜OSCC患者标本,以10例正常口腔粘膜(normal mucosa,NM)和10例口腔非特异性炎症上皮(inflammatory mucosa,IM)为对照,采用CD1a单抗通过免疫组化技术标记上皮组织中的DCs,结果进行统计学分析。结果 NM组中有3例未见CD1a+DC表达,OSCC组及IM组中各有1例未见CD1a+DC表达,OSCC组与NM组、OSCC组与IM组之间CD1a+DC的计数均有显著性差异(P<0.05);肿瘤不同病理分级中,癌旁组织(ESCC)中CD1a+DC的数量在OSCCⅠ级与Ⅱ级间有显著性差异(P<0.05);ESCC中CD1a+DC在有或无淋巴结转移中的差别有显著意义(P<0.05)。结论 ESCC中CD1a+DC与肿瘤分级呈显著负相关,与颊癌的预后相关。

表皮生长因子促进真皮成纤维细胞生长的机制(英文)

目的探讨表皮生长因子(EGF)对真皮成纤维细胞中cyclinD1和CDK-4表达的影响,从细胞周期的角度认识EGF促进真皮成纤维细胞生长的机制。方法研究对象为大鼠真皮成纤维细胞,用含100ml/L胎牛血清的DMEM,加入50mg/L的EGF培养SD大鼠的真皮成纤维细胞,通过MTT检测、流式细胞仪分析观察细胞的生长状态,免疫组化检测cyclinD1和CDK-4的表达结合流式细胞仪分析来观察细胞的周期变化。结果MTT检测(加药前0.37±0.011,加药后0.55±0.008)、流式细胞仪结果(加药前9.1,加药后14.7)都显示50mg/L的EGF能显著促进真皮成纤维细胞的生长增殖,免疫组化结果显示,两者一致,加药后阳性明显增强。结论50mg/L的EGF对真皮成纤维细胞的生长有极大地促进作用,促进了细胞周期蛋白cyclinD1和CDK-4的表达增强,细胞G1期变短,增殖能力增强。

TGF-β1、dNCPs及TGF-β1/dNCPs复合物对组织工程牙髓形成促进作用的研究

目的 研究转化生长因子 (TGF- β1)、牙本质非胶原蛋白 (d NCPs)及 TGF- β1/ d NCPs复合物对组织工程牙髓形成的促进作用。 方法 使用 型胶原及牙本质粉构建牙髓细胞的三维培养模型 ,按不同分组分别在组织工程牙髓中加入 TGF- β1、d NCPs及 TGF- β1/ d NCPs复合物 ;对照组中不加入以上物质。培养 3、6和 14天 ,在不同时间点行 HE染色 ,观察细胞的形态变化。牙本质涎蛋白 (DSP)免疫组织化学观察牙髓细胞向成牙本质细胞的诱导。 结果 胶原可形成凝胶网状结构 ,牙髓细胞的生长状况与体内牙髓细胞相似。加入 TGF- β1和 d NCPs后 ,培养第 6天部分牙髓细胞开始出现成牙本质样细胞的一些特性 ,出现单侧细胞突起 ;培养第 14天 ,牙本质粉区域附近细胞呈高柱状平行排列 ,形成类似体内的牙本质牙髓复合物。免疫组织化学染色可见部分细胞出现 DSP的表达 ,其中 TGF- β1组阳性细胞最多 ,复合物组次之 ,d NCPs组最少 ;而对照组未发现 DSP的表达。 结论 TGF- β1和 d NCPs可不同程度地刺激牙髓细胞向成牙本质样细胞转化 ,促进组织工程牙髓的形成。

去细胞周围神经移植物的制备及生物相容性评测

目的:制备去细胞周围神经移植物并评测其生物相容性。方法:实验于2005-05/12在解放军第四军医大学口腔医学院组织病理教研室和组织工程实验中心完成。①将猪肋间神经经低渗、-80℃反复冻融和NaOH裂解等方法制备去细胞神经异体移植物;光、电镜观察其结构特征。②材料细胞毒性试验按照GB/T16886.5-2003《医疗器械生物学评价》体外细胞毒性试验的试验方法进行,毒性程度的评估标准参见美国药典。③大鼠皮下植入试验,取成年SD大鼠9只,于脊柱中线两侧约2cm处平行各取2点作为皮下植入点,植入1cm去细胞异体神经移植物。于手术后第1,2,4周时各取1只大鼠麻醉状态下处死,作组织切片检查。结果:去细胞神经异体移植物的制备:①应用正常猪的周围神经,清除许旺细胞、神经外膜和束膜细胞以及神经纤维的髓鞘和轴突,保存由许旺细胞基底膜管以及神经外膜和束膜的细胞外基质构成的三维支架结构。②生物相容性测试结果:显示去细胞神经异体移植物细胞毒性试验为1级。③SD大鼠皮下植入试验结果:去细胞神经异体移植物无明显的免疫排斥反应。结论:该方法所制备的去细胞神经移植物神经膜管结构保存完好,有良好的组织相容性,可能成为自体神经移植的替代材料。

陶瓷化骨/水凝胶与骨髓基质细胞修复自体颅骨缺损实验

目的:观察以陶瓷化骨(ceramic bovine bone,CBB)/水凝胶为支架复合骨髓基质细胞修复颅骨极量缺损效果。方法:将滴有rhBMP-2(10μg)/TGF-β(50ng)、经矿化诱导的SD大鼠自体骨髓基质细胞分别复合在陶瓷化骨/水凝胶和陶瓷化骨上,修复大鼠的颅骨缺损(8mm直径),以CBB/MSCs植入另8只SD大鼠颅骨缺损处为对照组,未修复组为空白对照。分别在术后4、8周取材,应用常规HE染色、改良Mallory三色法染色观察骨缺损修复情况,图像分析测量单位面积骨形成量。结果:4周时2组均有骨样组织形成,陶瓷化骨/水凝胶组形成的骨基质(6813.09±96.32)μm2明显多于陶瓷化骨组(3839.25±104.52)μm2。8周时2组骨缺损均为骨性修复,组间差别与4周时一致,C组骨缺损为纤维覆盖。结论:陶瓷化骨/水凝胶、陶瓷化骨复合骨髓基质细胞能够修复颅骨缺损。

去势小鼠尾静脉注射骨髓间充干细胞通过抑制体内破骨细胞活性治疗绝经后骨质疏松

目的探讨骨髓间充质干细胞(BMMSCs)尾静脉注射对体内破骨细胞活性及骨质疏松治疗作用。方法选用8周龄健康雌性小鼠行双侧卵巢切除术(OVX),建立绝经后骨质疏松模型。选用同一批次、周龄相同、体质量相近的健康小鼠行双侧卵巢附近脂肪组织部分切除,建立假手术组(sham)。对OVX组小鼠尾静脉注射BMMSC治疗,1个月后分别取双侧股骨行TRAP染色及mciro-CT检测体内破骨细胞数量和骨小梁微结构改变。结果 OVX+BMMSC注射组中破骨细胞的数量较OVX不治疗组显著降低。micro-CT显示OVX+BMMSC组骨小梁数量及骨密度显著高于OVX不治疗组。结论尾静脉注射骨髓间充质干细胞能够抑制体内破骨细胞活性,对绝经后骨质疏松具有一定的治疗作用。

SD大鼠毛乳头细胞体外培养及组织工程皮肤的构建

目的了解SD大鼠毛乳头细胞(DPCs)体外培养的生长特性,并用其构建组织工程双层皮肤。方法分离大鼠触须部获取完整毛囊,胶原酶消化获取毛乳头组织,组织块法培养毛乳头细胞并传代。以Ⅰ型胶原、α-平滑肌肌动蛋白(smooth muscle actin-α,SMA-α)、CK抗体免疫组化法鉴定细胞,MTT法检测并绘制细胞生长曲线。将第二代DPCs作为真皮种子细胞,角质形成细胞作为表皮种子细胞,用气-液面培养制备组织工程双层皮肤,HE染色观察其组织学结构。结果成功培养DPCs并传代,Ⅰ型胶原、SMA-α染色阳性;成功构建出含表皮与真皮层的组织工程双层皮肤。结论体外培养得到的DPCs与表皮结合较好,可作为组织工程皮肤的种子细胞。

肿瘤坏死因子α和白细胞介素2在大鼠皮肤移植中的作用

目的 探讨肿瘤坏死因子α(TNF_α)和白细胞介素 2 (IL_2 )在同种异体大鼠皮肤移植后免疫排斥反应中的作用 ,研究组织工程皮肤的组织相容性。方法 取SD大鼠皮肤和实验室培养的组织工程SD大鼠皮肤移植于成年Wistar大鼠 ,移植成功后取不同时间点标本用免疫组织化学方法和Westernblot方法检测TNF_α和IL_2在组织中的表达。结果 同种异体皮肤移植组 ,TNF_α和IL_2有显著表达 ;组织工程皮肤移植后 ,局部组织中TNF_α和IL_2水平显著低于同种异体皮肤移植组。结论 TNF_α和IL_2水平的改变与同种异体皮肤移植后免疫排斥反应的发生密切相关 ,组织工程皮肤只具有很弱的免疫原性 ,不引起显著的排斥反应。

三维立体培养中不同浓度的胶原凝胶对成纤维细胞生长的影响

目的 :研究在三维立体培养中不同浓度胶原对成纤维细胞生长状态的影响。方法 :分离 1～ 2dSD新生鼠背部皮肤的成纤维细胞 ,分别种入 6 4、5 3、4mg/ml的胶原中 ,光镜观察立体培养条件下成纤维细胞的生长状态和细胞数量 ,并进行统计分析。结果 :6 4mg/ml胶原中细胞的生长状态良好 ,细胞突起明显 ,和二维条件下的形态相似。 5 3mg/ml组中 ,部分细胞出现了空泡和颗粒 ,细胞的生长状态趋于不良。4mg/ml中细胞的大部分突起消失 ,细胞核固缩、溶解 ,部分细胞类似凋亡细胞。 结论 :6 4mg/ml浓度的胶原最适宜于成纤维细胞的生长。

重组人骨形成蛋白-2/转化生长因子-β作用下陶瓷化骨粉/水凝胶与骨髓基质细胞修复自体颅骨缺损

目的:以矿化诱导的骨髓基质细胞作为种子细胞,应用陶瓷化骨粉/水凝胶复合材料修复大鼠颅骨极量骨缺损,观察骨髓基质细胞修复自体颅骨缺损效果。方法:实验于2002-05/08在解放军第四军医大学口腔医学院口腔组织病理教研室完成。选取健康SD大鼠8只,随机分为重组人骨形态蛋白-2/转化生长因子-β组、陶瓷化骨粉/水凝胶复合物对照组,4只/组。重组人骨形态蛋白-2/转化生长因子-β组将矿化诱导的大鼠自体骨髓基质细胞与水凝胶、陶瓷化骨粉混合,向其中加入重组人骨形态蛋白-210μg、转化生长因子-β50ng,修复自体颅骨8mm直径缺损。陶瓷化骨粉/水凝胶复合物对照组以单独水凝胶/陶瓷化骨粉修复颅骨8mm直径缺损。术后6周取材,应用苏木精-伊红染色、改良Mallory三色法以及彩色图像分析观察骨缺损修复情况。结果:实验纳入8只大鼠,全部进入结果分析。①两组术后6周大体标本观察:两组大鼠的植入物牢固嵌在骨缺损处,未见脱落、移位,表面被纤维被膜包绕,被膜内可见少量毛细血管,两组植入物无明显差别。②两组术后6周骨形成情况比较:苏木精-伊红染色:重组人骨形态蛋白-2/转化生长因子-β组有大量网格状的骨形成,仍有部分水凝胶残留,周围是条索状软骨样组织和纤维组织。陶瓷化骨粉/水凝胶复合物对照组水凝胶部分吸收,陶瓷化骨颗粒和水凝胶粒周围只有少量的骨样或软骨样基质形成,大部分为纤维结缔组织。改良Mallory’s三色法:重组人骨形态蛋白-2/转化生长因子-β组的创缘断端附近的网状骨为砖红色的成熟骨,植入物的中心部可见蓝色的新生骨,以及散在的黄色毛细血管。而陶瓷化骨粉/水凝胶复合物对照组只见少量不规则红色的骨样基质,以及黄色毛细血管。③两组术后6周骨基质及成熟骨基质面积值的比较:重组人骨形态蛋白-2/转化生长因子-β组骨基质面积、成熟骨基质面积明显均多于陶瓷化骨粉/水凝胶复合物对照组[(8207.22±46.31),(375.05±25.83);(6376.73±78.35),(134.44±14.62)μm2;P均<0.05]。结论:陶瓷化骨粉/水凝胶与骨髓基质细胞在重组人骨形成蛋白-2、转化生长因子-β等生长因子联合作用下能够成功构建组织工程骨,修复颅骨极量缺损明显好于单独应用陶瓷化骨粉/水凝胶。

骨髓间充质干细胞对雌激素缺乏所致骨质疏松症的治疗作用

目的探讨骨髓间充质干细胞(BMSC)治疗雌激素缺乏骨质疏松症的疗效。方法建立卵巢摘除术后骨质疏松症模型和假手术模型,通过小鼠尾静脉注射BMSC,利用micro-CT扫描小鼠股骨检测BMSC发挥免疫调控功能治疗骨质疏松症的效果,同时运用ELISA测定经治疗后小鼠血清TNF-α的表达水平,用FITC-annexin V/7-amino actimycin D染色和流式细胞仪观察治疗前后BMSC诱导T淋巴细胞凋亡程度的改变。结果通过卵巢摘除术构建的小鼠骨质疏松模型其股骨干骺端骨密度、骨小梁数量及骨体积分数较sham组均有一定程度的降低,血清TNF-α较sham组相比,有一定程度升高。通过尾静脉注射BMSC,OVX组股骨干骺端骨密度、骨小梁数量及骨体积分数有一定的提高。经BMSC治疗后,小鼠T淋巴细胞凋亡数量增多,而TNF-α表达水平降低。结论 BMSC因其具有免疫调控的能力,在治疗骨质疏松症中可能有一定作用。

骨髓间充质干细胞Fas／FasL介导的免疫调节在结肠炎治疗中的作用

目的探索卵巢摘除术(OVX)所致骨质疏松症小鼠骨髓间充质干细胞(BMSC)与假手术组(sham)BMSC治疗结肠炎效果差异,明确Fas/FasL表达水平改变情况及其下游T淋巴细胞趋化及凋亡程度的差异。方法建立实验性结肠炎模型,OVX小鼠骨质疏松及假手术模型,对比注射OVX组与sham组小鼠BMSC治疗结肠炎的效果,检测2组BMSC对T淋巴细胞趋化及凋亡的差异,采用RT-PCR和Western blot法对BMSC的凋亡相关基因Fas/FasL的表达进行对比。结果注射雌激素缺乏所致骨质疏松小鼠的BMSC与注射假手术组的BMSC相比,表达Fas/FasL降低,从而使T淋巴细胞趋化及凋亡能力减弱,导致用OVX-BMSC治疗结肠炎效果较差。结论 OVX-BMSC通过降低自身Fas/FasL表达减弱肠炎小鼠T淋巴细胞的趋化和凋亡。

异种脱细胞角膜基质囊袋移植的生物相容性研究

目的探讨脱细胞猪角膜基质移植入兔角膜囊袋后的生物学反应。方法猪角膜通过不同方式去除细胞及免疫源性成分,保留角膜组织基质的弹力纤维及胶原纤维,将其切取为直径为4 mm的植片,植入兔角膜囊袋内,在不同时间点观察生物材料在角膜内生物学反应。结果材料植入兔角膜囊袋3个月,生物相容性良好,材料逐渐降解,材料内有胶原和角膜基质细胞长入。结论新型可降解角膜基质材料植入后未见兔角膜有明显的炎症反应,材料的组织相容性好,可作为组织工程角膜的支架材料。

人牙胚BMP2A基因扩增的原位杂交研究

利用地高辛甙元标记的ＤＮＡ探针进行了人牙胚中ＢＭＰ２Ａ基因扩增的定位研究。结果发现，钟状期以前．杂交信号主要位于原始口腔上皮、蕾状期和帽状期造釉器上皮；钟状期和钟状期以后．杂交信号则局限于造釉细胞和造牙本质细胞，造釉器的星网层和编余釉上皮、牙乳头间充质细胞也有弱阳性信号分布．表明，人牙胚中，ＢＭＰ２Ａ基因扩增与其蛋白质的免疫组化研究结果是一致的，在造釉细胞和造牙本质细胞分化成熟过程中，伴随着ＢＭＰ２Ａ基因的扩增与表达．

构建神经再生室培养成年SD大鼠许旺细胞

目的:探讨从成年SD大鼠坐骨神经分离培养获得大量许旺细胞的有效手段。方法:实验于2005-05/11在解放军第四军医大学口腔医学院组织病理教研室和组织工程实验中心完成。①取成年SD大鼠1只截断坐骨神经5mm,缝接入20mm硅胶管中,形成神经再生室。7d后重新打开伤口,刨开硅胶管,截取再生室内神经段置离心管中作为实验组。②取SD仔鼠5只,无菌条件下取双侧坐骨神经混合于离心管中作为对照组。③将两组坐骨神消化培养。通过相差显微镜活细胞计数和S-100细胞化学标记相结合鉴定了许旺细胞增殖和纯化程度。结果:①两组培养的细胞光镜观察结果:实验组的许旺细胞密度高于对照组,特别是在培养4d后细胞的密度差别尤为显著。实验组的许旺细胞密度大于600个/mm,而对照组密度不足200个/mm。②两22组许旺细胞免疫组织化学染色:实验组衬染后计数许旺细胞的纯度为(98.0±1.2%,对照组许旺细胞的纯度为(93.0±2.1)%(P<0.05)③)而。两组细胞的生长曲线:培养7d,实验组细胞数量较对照组明显增加,达到(49.6±3.5)×10L-1,远高于对照组的(31.7±3.9)×10L。77-1结论:从成年SD大鼠坐骨神经分离培养方法能获得大量高纯度的许旺细胞,为自体许旺细胞在修复周围神经缺损中的应用提供了可能。

釉基质蛋白对牙周膜成纤维细胞合成蛋白的影响

目的:检测釉基质蛋白作用下牙周膜成纤维细胞合成蛋白的变化,分析釉基质蛋白促进牙周组织再生的作用。方法:实验于2004-04/08在第四军医大学口腔医院组织工程实验室完成。选取11～14岁儿童因正畸需要拔除的无牙周病及龋病的健康新鲜前磨牙,锐利刀片刮除牙根颈部1/3牙龈及牙周膜,采用全牙胶原酶消化法培养获得牙周膜成纤维细胞,经免疫细胞化学检测证实为外胚间充质细胞。取第3代细胞用于实验,分为2组:对照组为含10mL/L新生牛血清的低糖DMEM培养液,实验组为100mg/L釉基质蛋白,用含10ml/L新生牛血清的低糖DMEM培养液配制。将第3代人牙周膜成纤维细胞制备成密度为1×104/mL的细胞悬液,接种入预先放置有细胞爬片的6孔板中,24h后按实验分组更换诱导液。逐日倒置显微镜下观察细胞形态。第3,7天利用免疫组化方法和图像分析技术检测两种细胞骨涎蛋白、骨桥蛋白、骨粘连蛋白、牙骨质附着蛋白的表达。结果:①细胞形态学观察:加入诱导因子初期细胞形态无明显变化,随时间延长,实验组细胞突起逐渐变短,与对照组相比有明显差异。②免疫细胞化学检测结果:对照组骨涎蛋白、骨桥蛋白呈弱阳性到阳性表达,实验组与对照组相比,骨涎蛋白、骨桥蛋白均呈现不同程度胞浆着色加深,与作用时间成正比。对照组细胞骨粘连蛋白基本为阴性表达,而实验组细胞第3天时即检测到了骨粘连蛋白的表达,且随时间的延长染色加深。未经釉基质蛋白处理的牙骨质附着蛋白抗体为阴性表达,经过釉基质蛋白作用第3,7天均检测到牙骨质附着蛋白抗体的弱阳性表达,胞浆着色呈淡棕黄色。设立的空白对照和阴性对照均未见着色。③釉基质蛋白对人牙周膜成纤维细胞合成骨涎蛋白、骨桥蛋白、骨粘连蛋白的影响:与对照组比较,实验组第3,7天骨涎蛋白和骨桥蛋白均明显上调(184.31±5.67,168.20±6.93;181.42±4.99,163.91±5.86;213.02±5.40,194.81±5.06;211.12±5.59,182.06±6.66;P均<0.01),骨粘连蛋白对照组未表达,实验组第3天时检测到表达;实验组第7天骨涎蛋白、骨桥蛋白、骨粘连蛋白上调幅度均明显高于第3天(163.91±5.86,168.20±6.93,P<0.05;182.06±6.66,194.81±5.06,P<0.01;196.73±5.47,204.67±5.12,P<0.01)。结论:釉基质蛋白对人牙周膜成纤维细胞具有上调骨涎蛋白、骨桥蛋白、骨粘连蛋白的作用,随时间延长这种促进作用愈明显;并能诱导细胞表达牙骨质附着蛋白。釉基质蛋白在一定浓度下可使人牙周膜成纤维细胞向成骨、成牙骨质样细胞分化。

新基因mcpr1在小鼠牙胚发育中的时空表达和意义

目的:探讨mcpr1在牙胚发生过程中的可能作用。方法:采用免疫组化LsAB法观察MCPR1在小鼠牙胚发育各个时期的表达分布及其变化情况。结果:MCPR1在小鼠牙胚各个时期均有表达,但各期分布模式有所不同,帽状期开始在成釉器上皮细胞表达,在釉结节内亦呈现强阳性表达,在分化成熟的成牙本质细胞及成釉细胞内呈现出强阳性表达。结论:mcpr1可能通过上皮-间充质之间的信号传递及相关基因的相互调控,参与成釉器的成熟及牙胚的发育。

联合应用釉基质蛋白,骨形成蛋白-2对人牙囊细胞生物学行为的影响

目的观察联合应用釉基质蛋白(EMPs)、骨形成蛋白-2(BMP-2)对人牙囊细胞增殖及分化的影响。方法以不同浓度的EMPs、BMP-2作用于牙囊细胞,通过四唑盐比色法和酶动力学法检测对细胞增殖及ALP活性的变化,再筛选出浓度为100 mg/l的EMPs、100μg/L的BMP-2,检测单独或联合运用二者对牙囊细胞生物学特性的影响。结果EMPs、BMP-2均能促进牙囊细胞增殖和ALP的分泌,联合应用与单独应用两种因子相比,对增殖的影响无差异,对ALP的合成促进更显著。结论EMPs、BMP-2联合可影响牙囊细胞的生物学特性。EMPs、BMP-2两种因子可能在牙囊细胞的诱导分化中起重要作用。

生物工程活性角膜基质的研制及相容性研究

研究生物工程活性角膜的生物相容性,为进一步临床应用提供理论基础。猪角膜基质脱细胞并去除免疫源性物质形成网状半透明生物材料,将培养的角膜基质细胞与生物材料复合构建生物工程活性角膜基质。对复合物进行倒置显微镜和扫描电镜检测细胞附着情况及材料的细胞相容性;将活性角膜基质移植入新西兰兔角膜囊袋内,细胞用B rdU标记检测在体内移植过程中的存活及转归,不同时间观察角膜的生物相容性及改建情况。结果显示脱细胞基质材料的细胞相容性较好,细胞种植后可存活、黏附并增殖;移植区细胞可有B rdU阳性着色,4周后角膜开始透明,8周后角膜改建基本完成。