组织工程牙胚异体异位发育的实验研究

目的比较组织工程牙胚在体内不同部位移植的生长与发育情况,为进一步明确组织工程化牙齿的体内构建探寻合适的生长环境。方法采用出生后大鼠/猪第一磨牙牙胚为种子细胞,与不同生物材料相复合构建组织工程牙胚,分别植入裸鼠皮下、猪肠系膜内、SD成年大鼠肾被膜下,特定时间点取材,HE染色观察移植牙胚的发育情况。结果移植于裸鼠皮下、肠系膜内的移植物未见进一步发育趋势,皮下构建的组织工程牙胚部分从皮肤脱落而丧失,在肠系膜内可见大量浸润的淋巴细胞;而移植于大鼠肾被膜下的牙胚生长良好,可见釉质和牙本质-牙髓复合体。结论肾被膜下的种植环境有利于异体组织工程牙胚的生长,可为牙齿体内组织工程化方式及进一步发育提供良好的微环境。

路漫漫其修远——谈组织工程皮肤研究“军队科技进步一等奖”之不足

长期以来人们一直致力于研制一种较为理想的皮肤替代物，能够与正常皮肤组织结构相似，对伤口具有一定的贴附性，可防止细菌入侵及生长．无毒性、无免疫排斥性或较低免疫排斥．具有良好的生物相容性等。近年来．随着组织工程技术的发展．体外构建人工皮肤将为这一目标带来希望：

体外组织培养模式的构建及转化生长因子促进牙髓细胞向成牙本质细胞诱导分化的研究

目的通过构建体外组织培养模式,观察牙髓细胞向成牙本质细胞诱导分化的潜力及转化生长因子-β1(TGF-β1)的促进作用。方法获取人第三磨牙牙髓组织,剪碎后与牙本质陶瓷粉(CDP)及2μg/mL TGF-β1混合,将混合物以骨基质明胶(BMG)为载体构建牙髓组织培养模型,在培养3、7、14和21 d后,通过HE和组织特异性染色鉴定有无骨-牙本质基质成分形成,免疫组化检测细胞有无牙本质特异性蛋白——牙本质涎蛋白(DSP)的表达。结果牙髓组织经TGF-β1诱导培养后可进一步矿化,甲苯胺蓝和Mallory染色表明在牙髓组织的中心出现骨-牙本质样基质的沉积,免疫组化检测牙髓细胞开始出现DSP的表达。结论成功构建体外牙髓组织培养模型,该模型能维持牙髓细胞的生长和存活,可用于体外对牙髓细胞的诱导分化观察;该模型模式下TGF-β1可明显促进牙髓细胞向成牙本质细胞的分化诱导潜能。

评价三种消毒方法处理脱细胞神经支架的生物相容性

目的:比较应用三种消毒方式处理脱细胞神经支架(ANS)的生物相容性,为组织工程神经支架产业化制备研究奠定基础。方法:取新鲜York猪神经,应用改良的NaOH消蚀技术处理后,分别应用60Co、ETO和0.1%PAA3种消毒方法处理;观察不同实验组ANS的细胞毒性、体外胶原酶敏感性、细胞相容性和植入后局部反应,评价应用不同消毒方法对ANS的生物相容性的影响。结果:消毒前ANS保持完整的结构和主要基底膜成份。MTT实验中PAA和60Co组分别与ETO组存在统计学差异(P<0.05)。体外胶原酶敏感性实验未见各组ANS对胶原酶的敏感性增加。皮肤成纤维细胞能在PAA和60Co组良好地黏附、增殖、生长。而ETO组仅见少量细胞黏附。植入后局部反应实验均未见各组ANS降解存在明显差异;植入ETO组,开始出现了急性炎症反应后,转变为慢性炎症反应。而PAA和60Co组开始也出现了急性炎症反应,后炎症逐渐减轻,最终ANS被机体接受。结论:应用PAA消毒有效并且便利,经PAA处理的ANS有良好的细胞、组织相容性和生物安全性,所以应用PAA是消毒ANS的理想方法。

脱细胞猪角膜基质的基底膜在修复兔角膜损伤中的作用

目的探讨脱细胞角膜基质支架材料表面保存基底膜样结构对修复角膜损伤的必要性。方法将采用反复冻融及酶消化法制备的脱细胞猪角膜基质,移植到兔角膜损伤模型上,通过大体及组织学分别观察材料表面基底膜结构的有无对修复兔角膜基质损伤的影响。结果脱细胞猪角膜基质材料表面有基底膜的实验组(n=8)兔角膜损伤全部修复,无穿孔,支架材料与受体角膜整合。材料表面无基底膜的对照组(n=8)中,有6例植入的支架材料溶解,兔角膜穿孔。两组结果比较差异有显著统计学意义。结论脱细胞角膜基质支架材料表面具有基底膜样结构,有利于形成正常角膜上皮屏障,从而防止了生物材料的过快降解,有利于材料与宿主基质的整合和改建。

复合自体脂肪干细胞的脱细胞猪角膜基质移植治疗兔角膜碱烧伤

目的:研究复合脂肪干细胞的脱细胞猪角膜基质对碱烧伤角膜的治疗效果。方法:制备晾干的脱细胞猪角膜基质,取第3代体外培养的兔自体脂肪干细胞,体外种植到脱细胞猪角膜基质上,培养3d后用于板层角膜移植。结果:板层角膜移植2mo后,术眼角膜基本恢复透明,未发生排斥反应,新生血管较少,3mo后新生血管基本消退。结论:复合自体脂肪干细胞的脱细胞猪角膜基质对兔碱烧伤角膜具有良好的修复能力。

脱落乳牙牙髓干细胞聚合体再生牙髓实验研究

目的利用动物实验模型证明使用小型猪脱落乳牙牙髓干细胞(stem cells from minipig exfoliated deciduous teeth,SPED)聚合体进行原位牙髓再生的可行性。方法分离和培养SPED,检测和分析其细胞生物学行为,进而诱导制备SPED聚合体;建立年轻恒牙牙髓坏死的小型猪动物模型,设置SPED聚合体再生组和传统根尖诱导成形治疗组;术后4个月进行常规组织学取材,利用HE、免疫荧光染色等方法观察牙髓再生和牙根尖形成情况。结果 SPED聚合体再生组受试牙齿组织学HE染色检测发现,牙根继续发育并形成正常的根尖形态,此外全长根管内可见类牙髓结构的再生组织,免疫荧光染色可见组织中CGRP、TRPV1、TRPM8表达阳性细胞的规则分布;而传统根尖诱导成形治疗组受试牙齿仅在根管内形成不规则的钙化组织,未见牙髓组织形成。结论 SPED聚合体在小型猪体内可以实现牙髓再生,同时再生牙髓具有正常组织学形态,而且具有牙本质形成和诱导根尖形成的生理功能。