将病例分析式教学模式融入口腔生物学教学的实践与探索

口腔生物学是口腔基础医学的重要学科之一,与口腔临床学科相比该课程相对枯燥,学生的学习积极性不高。为了提高学生的学习热情,改善教学效果,我们尝试将病例分析式教学模式引入到口腔生物学的教学过程中,既针对具体的授课内容设计引入合适的病例,并帮助学生掌握该课程的基础知识点。通过课后的调查反馈,教员和学生均认为此教学模式能提高学生学习口腔生物学课程的兴趣,使基础学科和临床学科有机的结合,便于学生在更深、更广的层次掌握口腔疾病发生、发展的机制。

PBL在口腔正畸进修生临床教学中的初步应用

在2004—2005年度口腔正畸进修生教学中，尝试PBL教学模式，通过摸底考试、尽早进入临床实践、根据临床病例设计问题、定期小组讨论等形式引导进修生学习理论知识，将枯燥的理论学习与临床实践有机地结合起来，培养了进修生良好的学习方法和独立解决临床问题的能力，提高了正畸进修教学的质量。

口腔遗传病学课程优化探索

口腔遗传病学作为一门新兴学科逐渐受到口腔基础和临床领域的关注,由于其独特的学科内容也逐步成为口腔医学教学内容的一个重要组成。本文结合口腔遗传病学的教学现状,从教材的选择、教学内容的优化、教学模式的健全等方面对口腔遗传病学课程教学改革进行了探讨,旨在推动口腔遗传病学课程的更快发展。

ATP6V1H基因及其在骨骼发育中作用的生物信息学分析

目的:探讨ATP6V1H基因在骨骼发育过程中发挥作用的分子机制。方法:应用在线或线下生物信息学软件对ATP6V1H基因及其编码蛋白质进行分析,并预测基因编码蛋白的理化性质和蛋白跨膜区域,结合遗传变异与临床表型分析的结果,应用STRING在线软件分析ATP6V1H基因与骨骼发育相关因子之间的关联度。结果:ATP6V1H基因位于8号染色体,其编码的蛋白质含有483个氨基酸,是非跨膜亲水蛋白,含有43个可能的磷酸化位点,与破骨和成骨相关的多种蛋白存在相互作用关系。结论:ATP6V1H基因与骨骼发育密切相关,并可能通过影响破骨细胞的生理功能,进而影响体内的骨代谢平衡。

骨硬化症患者CLCN7基因突变的生物信息学分析

目的:采用生物信息学方法对两名骨硬化症患者的电压门控氯通道7基因(CLCN7)突变位点进行分析,比较突变对蛋白结构、理化性质等方面的影响,预测突变可能对疾病发生产生的作用。方法:提取两例骨硬化症患者及家庭成员外周血基因组DNA,PCR扩增CLCN7基因并进行序列分析;采用NCBI在线搜索、Poly Phen-2数据库、DNAStar软件、SWISS MODEL等多种手段对突变基因编码的蛋白质进行多方面预测。结果:病例1为中间型常染色体隐性遗传骨硬化症,基因测序表明其CLCN7基因16号外显子产生了c.1409 C>T纯合突变,所编码氨基酸由脯氨酸变为亮氨酸;病例2为Ⅱ型常染色体显性遗传骨硬化症,其10号外显子发生了c.856 C>T杂合突变,精氨酸变为色氨酸。两个突变位点在多个物种均表现出高度同源性,突变可导致CLC-7蛋白二级结构发生变化,从而改变蛋白质立体结构、理化特性等方面的特征。结论:多种生物信息学分析表明CLCN7基因的c.856 C>T和c.1409 C>T可改变蛋白的分子结构和功能,表现为有害类型的突变,可能导致骨硬化症的发生。

胎儿骨的生物学特性及其应用

临床上许多骨科医师乐意采用自体骨移植来治疗因创伤和骨病所致的骨缺损。自体植骨的骨生成能力强，容易与骨融合，但患者要承受切口增多、手术麻醉时间长、伤口出血感染等风险，以及因牺牲正常结构而使供骨部的稳定性减弱等不足。自１９１８年Ｃａｌｉｅ首先报道采用同种...

WNT10A基因突变导致非综合征型先天缺牙的表型与基因型分析

目的:分析WNT10A基因突变所导致非综合征型先天缺牙(NSTA)的临床表型特点及其与基因型的关系。方法:在PubMed数据库检索2007年1月至2023年12月发表的WNT10A突变相关NSTA文献,由两名研究者按照纳排标准独立筛选并提取数据,主要分析病例的临床表型特点(包括性别、年龄、缺牙部位、缺牙数目)和基因突变位点特征。结果:共纳入35篇文献及225例患者和45种WNT10A突变。患者年龄分布在6~54岁之间,女性患者多于男性,平均缺牙数为9.5颗,以Ⅱ型先天缺牙(多数牙先天缺失)为主,主要缺牙部位为下颌及上颌第二前磨牙和上颌侧切牙,左右同名牙常同时缺失,c.682T>A(p.Phe228Ile)突变最常见。结论:WNT10A突变导致的先天缺牙具有选择性,最常导致下颌第二前磨牙、上颌第二前磨牙和上颌侧切牙缺失,且存在基因型和表型之间的显著关联。

PTEN抑癌基因转染粘液表皮样癌细胞系M_3SP_2的建立和鉴定

目的 :为了研究外源性基因PTEN对粘液表皮样癌细胞生物学行为的影响 ,建立稳定表达PTEN的粘液表皮样癌细胞系。方法 :应用脂质体介导方法将野生型PTEN基因导入高转移性粘液表皮样癌细胞系M3 SP2 ,嘌呤霉素筛选阳性克隆 ,用免疫印迹法和ABC免疫酶染色法检测转染细胞中PTEN蛋白的表达。结果 :野生型PTEN基因成功地导入细胞M3 SP2 ,转染细胞稳定表达PTEN蛋白 ,PTEN蛋白分布于细胞质。结论 :M3 SP2 细胞能稳定表达外源性基因PTEN。

雌二醇对人涎腺腺样囊性癌细胞增殖和转移作用的研究

目的根据雌二醇(E2)临床用药在体内的药物浓度,探讨E2对人涎腺腺样囊性癌细胞(SAcc83)增殖和转移的影响。方法通过MTT法、细胞分裂指数、流式细胞仪等方法研究E2对SAcc83细胞增殖的影响;通过鸡胚心侵袭实验研究E2对SAcc83细胞的转移影响情况;通过对去势的雌裸鼠尾静脉注射方法建立动物转移模型和皮下致瘤实验,研究E2在动物体内对SAcc83的增殖和转移能力的影响。结果1×10-7、1×10-8、1×10-9mol/L的E2对SAcc83均有促增殖作用,其中10-7mol/L的E2作用最显著,作用1、2、3d时细胞分裂指数分别增加了33.3%,40.9%,17.8%,作用12、18、24h时S期细胞分别增加了12.3%,3.3%和9.7%。裸鼠皮下致瘤性实验中每只鼠每天皮下注射0.2ml9.55×10-5mol/LE2,注射10d,试验组肿瘤比对照组增加了24.8%。裸鼠肺转移实验中试验组裸鼠用药42d后,肺转移结节形成率增加了41.2%。结论10-7mol/L的E2对SAcc83细胞有明显的促增殖和转移作用,提示这类雌激素应在严密监控下使用。

拨出下颌第二磨牙矫治11例医源性后牙反颌的疗效观察

目的通过拔除下颌第二前磨牙矫治11例因矫治不当导致后牙反袷的患者，观察该方法的临床效果及不足。方法选择因矫治而导致后牙反袷的患者11例（男4例，女7例）。所有患者均拔除下颌2颗第二前磨牙，采用全程式化直丝弓矫治器进行重新矫治。借助34-44的整体支抗及上颌支抗先后近移第一、第二磨牙，并适当缩小弓丝后段的牙弓宽度。测量治疗前、后下颌的牙弓宽度和第一磨牙近移量。结果11例患者的后牙反袷均得到矫正。尖牙宽度变化不明显，第一前磨牙和第一磨牙的宽度发生了显著减少（2．61mm、5．33mm；P〈0．05）。第一磨牙平均近移3．43mm，近移量与宽度变化具有明显的相关性。结论拔除第二前磨牙可显著减小磨牙宽度，能够矫治医源性的后牙反袷，但其适用范围应需进一步探讨。

改良一步法分离变形链球菌RNA

目的快速、高效分离高质量变形链球菌RNA。方法溶菌酶处理变形链球菌后加入10%SDS,再经沸水浴1-2min可快速裂解细菌;裂解产物以一步法分离RNA。琼脂糖凝胶电泳及紫外分光光度计观察和测量RNA完整性及浓度。结果与其他方法比较,该法所获RNA产量高,几乎达30μgRNA/109细胞且无DNA污染。反转录（RT）-PCR证实mRNA的完整性好。结论改良一步法简便、经济、稳定,所得RNA可用于后续研究。

PTEN基因对粘液表皮样癌细胞裸鼠移植瘤生长的抑制作用

目的研究外源野生型PTEN抑癌基因对人高转移性粘液表皮样癌细胞裸鼠移植瘤生长的抑制作用。方法取PTEN抑癌基因转染粘液表皮样癌细胞的M3SP2-PTEN及逆转录病毒空载体转染的对照细胞M3SP2-pBp,接种于裸鼠背部皮下,测定移植瘤生长曲线,并对移植瘤进行组织学观察。结果对照组移植瘤生长迅速,肿瘤体积倍增时间为32.68h。HE染色切片显示,细胞数量多、排列紧密,核分裂相较多见;而实验组M3SP2-PTEN细胞移植瘤生长比较缓慢,肿瘤体积倍增时间延长为36.58h,肿瘤结节体积明显小于对照组(P<0.01),抑瘤率达63.82%。HE染色切片显示,细胞排列比较松散,较多的细胞出现变性和坏死,部分细胞染色体边集并出现凋亡小体。结论外源野生型PTEN抑癌基因能够显著抑制人高转移性粘液表皮样癌细胞在裸鼠体内的生长,其作用机制与PTEN基因诱导癌细胞变性和凋亡有关。

外源性PTEN抑癌基因对高转移性黏液表皮样癌细胞系形态的影响

目的 :观察外源野生型PTEN基因对高转移性黏液表皮样癌细胞系形态的影响。方法 :应用倒置显微镜观察法、HE染色观察、扫描电镜及透射电镜观察法 ,比较野生型PTEN抑癌基因转染的黏液表皮样癌细胞M 3SP2 PTEN与对照的黏液表皮样癌细胞M 3SP2 pBp的形态学差异。 结果 :M 3SP2 pBp细胞体外生长活跃 ,细胞数量多 ,核分裂相多 ,细胞表面微绒毛丰富 ,细胞核切迹明显 ,细胞质中线粒体丰富 ;M 3SP2 PTEN细胞生长缓慢 ,分裂相很少 ,细胞数量少 ,部分细胞空泡变性 ,染色质凝集 ,细胞膜彭出 ,线粒体数量少并发生肿胀 ,较多的溶酶体融合。结论 :外源野生型PTEN基因的转染能导致体外培养的高转移性黏液表皮样癌细胞变性、坏死或凋亡。

趋化因子受体CXCR4 shRNA真核表达载体的构建

目的:构建趋化因子受体(CXCR4)特异的RNA干扰质粒载体。方法:根据GenBank数据库提供的CXCR4基因核苷酸序列,选择设计能转录短发夹状RNA(short hairpin RNAs,shRNA)的DNA序列,并与pWH1质粒载体连接,用酶切的方法进行鉴定;将构建成功的特异性表达载体(pWH1-CXCR4)稳定转染至人涎腺黏液表皮样癌Mc3细胞系,并应用RT-PCR和流式细胞术对细胞CXCR4的表达进行检测。结果:与Mc3细胞和转染空白质粒pWH1 Mc3细胞相比,转染pWH1-CXCR4表达载体的Mc3细胞CXCR4 mRNA和蛋白的表达明显降低。结论:构建的CXCR4特异性shRNA表达载体可有效的沉默CXCR4基因,为进一步研究CX-CR4表达对涎腺黏液表皮样癌增殖和转移的意义及治疗涎腺黏液表皮样癌奠定了基础。

MEC-1、Mc3细胞的生长抑素受体表达及其与放射配基结合特性的研究

目的 探讨人涎腺粘液表皮样癌细胞系 (MEC 1)及人粘液表皮样癌高转移细胞株(Mc3)生长抑素受体 (SSTR) 2种亚型 (SSTR1、SSTR2 )的表达 ,及两者与SSTR的放射配基1 2 5I RC 16 0的结合差异。方法 ①采用细胞计数法、软琼脂法等观察MEC 1及Mc3细胞株生物学特性 ;②以原位杂交法检测MEC 1、Mc3细胞株SSTR1及SSTR2亚型的表达情况 ;③以放射配基结合分析法分析MEC 1、Mc3细胞与1 2 5I RC 16 0结合情况。结果 ①MEC 1、Mc3细胞生长稳定 ,Mc3细胞较MEC 1生长速度略快 ,克隆形成率高 ;②MEC 1细胞高度表达SSTR1及SSTR2 ,表达率分别为 82 .6 %和 81.7% ;Mc3细胞未见 2种亚型表达 ;③MEC 1和Mc3细胞与1 2 5I RC 16 0的特异结合率分别为 (2 3.8± 9.4 ) %和 (3.2± 2 .3) % ,差异有显著性 (P <0 .0 1)。结论 MEC 1高度表达SSTR1及SSTR2 ,其与SSTR配基RC 16 0的特异结合率显著高于Mc3细胞。

基质金属蛋白酶-1 shRNA真核表达载体的构建

目的构建基质金属蛋白酶-1(MMP-1)特异的RNA干扰质粒载体。方法根据GenBank数据库提供的MMP-1基因核苷酸序列,选择设计能转录短发夹状RNA(Short hairpin RNAs,shRNA)的DNA序列,并与pWH1质粒载体连接,用酶切的方法进行鉴定;将构建成功的特异性表达载体(pWH1-MMP1)稳定转染至人腺样囊性癌ACC-M细胞系后,应用RT-PCR、免疫组织化学及Western Blot对细胞MMP1的表达进行检测。结果在成功转染pWH1-ACC-M表达载体的ACC-M细胞中,MMP1 mRNA和蛋白的表达明显降低。结论成功构建了MMP1特异性shRNA表达载体,可有效地沉默MMP1基因,为进一步研究MMP1表达与腺样囊性癌增殖和转移的相关性奠定了一定的实验基础。

兔脂肪干细胞的分离培养鉴定及诱导分化研究

目的:分离培养家兔脂肪干细胞(Adipose-derived stem cells,ASCs),观察体外培养生长特性,并在特定条件下诱导分化,探讨其成脂成骨分化能力。方法:无菌条件下切取家兔腹股沟处脂肪组织,0.25%Ⅰ型胶原酶消化,分离培养原代细胞,取第3代ASCs做实验,用HE染色观察细胞形态,MTT比色法测定细胞生长曲线;用流式细胞仪检测其细胞表面标志物;用油红O染色和茜素红染色鉴定成脂和成骨诱导分化。结果:从家兔脂肪组织中分离获得的ASCs形态为长梭形,成纤维细胞样,生长活力旺盛,具有较强的增殖能力;流式细胞仪分析CD29呈阳性表达,CD31呈阴性表达;成脂诱导的细胞油红O染色阳性,成骨诱导的细胞茜素红染色阳性。结论:本实验分离培养的细胞为ASCs,具有成脂和成骨分化潜能。

富血小板纤维蛋白体外释放VEGF影响因素的探讨

目的:探讨不同材质的离心管和储存温度对制备的富血小板纤维蛋白(platelet-rich fibrin,PRF)释放血管内皮生长因子(vascular endot helial growth factor,VEGF)的影响。方法:分别用玻璃离心管和塑料离心管从健康家兔耳中动脉采血制备PRF,制备成PRF膜片后,加入无菌DMEM培养液各分为两组置于37℃和4℃条件下,并分别从20min,4h,24h,72h,120h,168h,0～168h七个时间点收集PRF样本,用ELI SA试剂盒检测各时间点VEGF的含量情况。结果:4℃条件下保存的PRF膜片释放VEGF含量高于37℃,玻璃离心管制备的PRF释放的VEGF含量高于塑料离心管。结论:不同的材质离心管和不同的储藏温度对PRF的特性存在一定影响,PRF的制备宜用玻璃离心管,在使用前宜储藏于4℃条件下。

可注射自体脂肪组织移植动物模型的建立

目的:建立一种可注射自体脂肪组织移植的动物模型。方法:从6只新西兰家兔背部获取脂肪颗粒(adipose granule,AG),取部分AG经Ⅰ型胶原酶消化得到基质血管成分(stromal vascular fraction,SVF)。将自体SVF与AG复合作为实验组移植到兔右耳移植区,单纯AG为对照移植到兔左耳移植区。术后当日、1、3个月通过B超和游标卡尺测量移植物体积,并用透射光活体观察各时间点新生血管的形成。术后3个月取材,观察移植物组织学变化。结果:术后1、3个月对照组脂肪组织存活率分别为:(64.35±8.36)%、(58.22±2.88)%;实验组脂肪组织存活率分别为:(77.42±5.1)%、(67.95±6.09)%(P<0.05)。术后3个月,实验组与对照组组织学变化未见明显差异。结论:根据兔耳血管分布特点建立的动物模型具有标准统一、易于观察与测量、容易重复的特点,为脂肪组织工程研究提供了一种新的动物模型。

自体基质血管成分改善脂肪组织移植效果的实验研究

目的:分析自体脂肪基质血管成分(stromal vascular fraction cells,SVF)对脂肪颗粒(adipose granule,AG)移植的作用。方法:从6只健康新西兰家兔背部肩胛区获取脂肪组织,实验组将自体SVF与自体AG复合,植入家兔耳部皮下,对照为单纯脂肪移植。在术后1、3、6个月,用B超和游标卡尺测量移植脂肪体积;术后6个月取材常规组织学观察。结果:术后1、3、6个月对照组脂肪组织存活率分别为:(64.35±8.36)%、(58.22±2.88)%、(50.61±9.47)%;实验组脂肪组织存活率分别为:(77.42±5.1)%、(67.95±6.09)%、(72.75±4.37)%。两组比较均存在显著性差异(P<0.05)。术后6个月组织学观察两组呈正常脂肪组织形态,未见明显差异。结论:自体SVF复合脂肪颗粒能够显著提高移植脂肪组织的成活率,为临床脂肪移植提供实验依据。