将病例分析式教学模式融入口腔生物学教学的实践与探索

口腔生物学是口腔基础医学的重要学科之一,与口腔临床学科相比该课程相对枯燥,学生的学习积极性不高。为了提高学生的学习热情,改善教学效果,我们尝试将病例分析式教学模式引入到口腔生物学的教学过程中,既针对具体的授课内容设计引入合适的病例,并帮助学生掌握该课程的基础知识点。通过课后的调查反馈,教员和学生均认为此教学模式能提高学生学习口腔生物学课程的兴趣,使基础学科和临床学科有机的结合,便于学生在更深、更广的层次掌握口腔疾病发生、发展的机制。

胎儿骨的生物学特性及其应用

临床上许多骨科医师乐意采用自体骨移植来治疗因创伤和骨病所致的骨缺损。自体植骨的骨生成能力强，容易与骨融合，但患者要承受切口增多、手术麻醉时间长、伤口出血感染等风险，以及因牺牲正常结构而使供骨部的稳定性减弱等不足。自１９１８年Ｃａｌｉｅ首先报道采用同种...

WNT10A基因突变导致非综合征型先天缺牙的表型与基因型分析

目的:分析WNT10A基因突变所导致非综合征型先天缺牙(NSTA)的临床表型特点及其与基因型的关系。方法:在PubMed数据库检索2007年1月至2023年12月发表的WNT10A突变相关NSTA文献,由两名研究者按照纳排标准独立筛选并提取数据,主要分析病例的临床表型特点(包括性别、年龄、缺牙部位、缺牙数目)和基因突变位点特征。结果:共纳入35篇文献及225例患者和45种WNT10A突变。患者年龄分布在6~54岁之间,女性患者多于男性,平均缺牙数为9.5颗,以Ⅱ型先天缺牙(多数牙先天缺失)为主,主要缺牙部位为下颌及上颌第二前磨牙和上颌侧切牙,左右同名牙常同时缺失,c.682T>A(p.Phe228Ile)突变最常见。结论:WNT10A突变导致的先天缺牙具有选择性,最常导致下颌第二前磨牙、上颌第二前磨牙和上颌侧切牙缺失,且存在基因型和表型之间的显著关联。

口腔遗传病学课程优化探索

口腔遗传病学作为一门新兴学科逐渐受到口腔基础和临床领域的关注,由于其独特的学科内容也逐步成为口腔医学教学内容的一个重要组成。本文结合口腔遗传病学的教学现状,从教材的选择、教学内容的优化、教学模式的健全等方面对口腔遗传病学课程教学改革进行了探讨,旨在推动口腔遗传病学课程的更快发展。

ATP6V1H基因及其在骨骼发育中作用的生物信息学分析

目的:探讨ATP6V1H基因在骨骼发育过程中发挥作用的分子机制。方法:应用在线或线下生物信息学软件对ATP6V1H基因及其编码蛋白质进行分析,并预测基因编码蛋白的理化性质和蛋白跨膜区域,结合遗传变异与临床表型分析的结果,应用STRING在线软件分析ATP6V1H基因与骨骼发育相关因子之间的关联度。结果:ATP6V1H基因位于8号染色体,其编码的蛋白质含有483个氨基酸,是非跨膜亲水蛋白,含有43个可能的磷酸化位点,与破骨和成骨相关的多种蛋白存在相互作用关系。结论:ATP6V1H基因与骨骼发育密切相关,并可能通过影响破骨细胞的生理功能,进而影响体内的骨代谢平衡。

骨硬化症患者CLCN7基因突变的生物信息学分析

目的:采用生物信息学方法对两名骨硬化症患者的电压门控氯通道7基因(CLCN7)突变位点进行分析,比较突变对蛋白结构、理化性质等方面的影响,预测突变可能对疾病发生产生的作用。方法:提取两例骨硬化症患者及家庭成员外周血基因组DNA,PCR扩增CLCN7基因并进行序列分析;采用NCBI在线搜索、Poly Phen-2数据库、DNAStar软件、SWISS MODEL等多种手段对突变基因编码的蛋白质进行多方面预测。结果:病例1为中间型常染色体隐性遗传骨硬化症,基因测序表明其CLCN7基因16号外显子产生了c.1409 C>T纯合突变,所编码氨基酸由脯氨酸变为亮氨酸;病例2为Ⅱ型常染色体显性遗传骨硬化症,其10号外显子发生了c.856 C>T杂合突变,精氨酸变为色氨酸。两个突变位点在多个物种均表现出高度同源性,突变可导致CLC-7蛋白二级结构发生变化,从而改变蛋白质立体结构、理化特性等方面的特征。结论:多种生物信息学分析表明CLCN7基因的c.856 C>T和c.1409 C>T可改变蛋白的分子结构和功能,表现为有害类型的突变,可能导致骨硬化症的发生。

牙菌斑检测技术及其应用

牙菌斑是牢固黏附于牙面或硬的口腔结构表面的细菌性生物膜,不易被中度水喷冲去,是导致龋病与牙周病的关键因素[1],牙菌斑的检测与监测具有重要的临床意义。随着分子生物学和电子显微镜技术等的发展,人们对于牙菌斑的结构与特征有了更深的了解。本文就牙菌斑的传统检测技术、荧光成像技术、pH检测技术、分子生物学检测技术及其应用作一综述。

PTEN抑癌基因转染粘液表皮样癌细胞系M_3SP_2的建立和鉴定

目的 :为了研究外源性基因PTEN对粘液表皮样癌细胞生物学行为的影响 ,建立稳定表达PTEN的粘液表皮样癌细胞系。方法 :应用脂质体介导方法将野生型PTEN基因导入高转移性粘液表皮样癌细胞系M3 SP2 ,嘌呤霉素筛选阳性克隆 ,用免疫印迹法和ABC免疫酶染色法检测转染细胞中PTEN蛋白的表达。结果 :野生型PTEN基因成功地导入细胞M3 SP2 ,转染细胞稳定表达PTEN蛋白 ,PTEN蛋白分布于细胞质。结论 :M3 SP2 细胞能稳定表达外源性基因PTEN。

PTEN基因对粘液表皮样癌细胞裸鼠移植瘤生长的抑制作用

目的研究外源野生型PTEN抑癌基因对人高转移性粘液表皮样癌细胞裸鼠移植瘤生长的抑制作用。方法取PTEN抑癌基因转染粘液表皮样癌细胞的M3SP2-PTEN及逆转录病毒空载体转染的对照细胞M3SP2-pBp,接种于裸鼠背部皮下,测定移植瘤生长曲线,并对移植瘤进行组织学观察。结果对照组移植瘤生长迅速,肿瘤体积倍增时间为32.68h。HE染色切片显示,细胞数量多、排列紧密,核分裂相较多见;而实验组M3SP2-PTEN细胞移植瘤生长比较缓慢,肿瘤体积倍增时间延长为36.58h,肿瘤结节体积明显小于对照组(P<0.01),抑瘤率达63.82%。HE染色切片显示,细胞排列比较松散,较多的细胞出现变性和坏死,部分细胞染色体边集并出现凋亡小体。结论外源野生型PTEN抑癌基因能够显著抑制人高转移性粘液表皮样癌细胞在裸鼠体内的生长,其作用机制与PTEN基因诱导癌细胞变性和凋亡有关。

外源性PTEN抑癌基因对高转移性黏液表皮样癌细胞系形态的影响

目的 :观察外源野生型PTEN基因对高转移性黏液表皮样癌细胞系形态的影响。方法 :应用倒置显微镜观察法、HE染色观察、扫描电镜及透射电镜观察法 ,比较野生型PTEN抑癌基因转染的黏液表皮样癌细胞M 3SP2 PTEN与对照的黏液表皮样癌细胞M 3SP2 pBp的形态学差异。 结果 :M 3SP2 pBp细胞体外生长活跃 ,细胞数量多 ,核分裂相多 ,细胞表面微绒毛丰富 ,细胞核切迹明显 ,细胞质中线粒体丰富 ;M 3SP2 PTEN细胞生长缓慢 ,分裂相很少 ,细胞数量少 ,部分细胞空泡变性 ,染色质凝集 ,细胞膜彭出 ,线粒体数量少并发生肿胀 ,较多的溶酶体融合。结论 :外源野生型PTEN基因的转染能导致体外培养的高转移性黏液表皮样癌细胞变性、坏死或凋亡。

MEC-1、Mc3细胞的生长抑素受体表达及其与放射配基结合特性的研究

目的 探讨人涎腺粘液表皮样癌细胞系 (MEC 1)及人粘液表皮样癌高转移细胞株(Mc3)生长抑素受体 (SSTR) 2种亚型 (SSTR1、SSTR2 )的表达 ,及两者与SSTR的放射配基1 2 5I RC 16 0的结合差异。方法 ①采用细胞计数法、软琼脂法等观察MEC 1及Mc3细胞株生物学特性 ;②以原位杂交法检测MEC 1、Mc3细胞株SSTR1及SSTR2亚型的表达情况 ;③以放射配基结合分析法分析MEC 1、Mc3细胞与1 2 5I RC 16 0结合情况。结果 ①MEC 1、Mc3细胞生长稳定 ,Mc3细胞较MEC 1生长速度略快 ,克隆形成率高 ;②MEC 1细胞高度表达SSTR1及SSTR2 ,表达率分别为 82 .6 %和 81.7% ;Mc3细胞未见 2种亚型表达 ;③MEC 1和Mc3细胞与1 2 5I RC 16 0的特异结合率分别为 (2 3.8± 9.4 ) %和 (3.2± 2 .3) % ,差异有显著性 (P <0 .0 1)。结论 MEC 1高度表达SSTR1及SSTR2 ,其与SSTR配基RC 16 0的特异结合率显著高于Mc3细胞。

兔脂肪干细胞的分离培养鉴定及诱导分化研究

目的:分离培养家兔脂肪干细胞(Adipose-derived stem cells,ASCs),观察体外培养生长特性,并在特定条件下诱导分化,探讨其成脂成骨分化能力。方法:无菌条件下切取家兔腹股沟处脂肪组织,0.25%Ⅰ型胶原酶消化,分离培养原代细胞,取第3代ASCs做实验,用HE染色观察细胞形态,MTT比色法测定细胞生长曲线;用流式细胞仪检测其细胞表面标志物;用油红O染色和茜素红染色鉴定成脂和成骨诱导分化。结果:从家兔脂肪组织中分离获得的ASCs形态为长梭形,成纤维细胞样,生长活力旺盛,具有较强的增殖能力;流式细胞仪分析CD29呈阳性表达,CD31呈阴性表达;成脂诱导的细胞油红O染色阳性,成骨诱导的细胞茜素红染色阳性。结论:本实验分离培养的细胞为ASCs,具有成脂和成骨分化潜能。

富血小板纤维蛋白体外释放VEGF影响因素的探讨

目的:探讨不同材质的离心管和储存温度对制备的富血小板纤维蛋白(platelet-rich fibrin,PRF)释放血管内皮生长因子(vascular endot helial growth factor,VEGF)的影响。方法:分别用玻璃离心管和塑料离心管从健康家兔耳中动脉采血制备PRF,制备成PRF膜片后,加入无菌DMEM培养液各分为两组置于37℃和4℃条件下,并分别从20min,4h,24h,72h,120h,168h,0～168h七个时间点收集PRF样本,用ELI SA试剂盒检测各时间点VEGF的含量情况。结果:4℃条件下保存的PRF膜片释放VEGF含量高于37℃,玻璃离心管制备的PRF释放的VEGF含量高于塑料离心管。结论:不同的材质离心管和不同的储藏温度对PRF的特性存在一定影响,PRF的制备宜用玻璃离心管,在使用前宜储藏于4℃条件下。

可注射自体脂肪组织移植动物模型的建立

目的:建立一种可注射自体脂肪组织移植的动物模型。方法:从6只新西兰家兔背部获取脂肪颗粒(adipose granule,AG),取部分AG经Ⅰ型胶原酶消化得到基质血管成分(stromal vascular fraction,SVF)。将自体SVF与AG复合作为实验组移植到兔右耳移植区,单纯AG为对照移植到兔左耳移植区。术后当日、1、3个月通过B超和游标卡尺测量移植物体积,并用透射光活体观察各时间点新生血管的形成。术后3个月取材,观察移植物组织学变化。结果:术后1、3个月对照组脂肪组织存活率分别为:(64.35±8.36)%、(58.22±2.88)%;实验组脂肪组织存活率分别为:(77.42±5.1)%、(67.95±6.09)%(P<0.05)。术后3个月,实验组与对照组组织学变化未见明显差异。结论:根据兔耳血管分布特点建立的动物模型具有标准统一、易于观察与测量、容易重复的特点,为脂肪组织工程研究提供了一种新的动物模型。

自体基质血管成分改善脂肪组织移植效果的实验研究

目的:分析自体脂肪基质血管成分(stromal vascular fraction cells,SVF)对脂肪颗粒(adipose granule,AG)移植的作用。方法:从6只健康新西兰家兔背部肩胛区获取脂肪组织,实验组将自体SVF与自体AG复合,植入家兔耳部皮下,对照为单纯脂肪移植。在术后1、3、6个月,用B超和游标卡尺测量移植脂肪体积;术后6个月取材常规组织学观察。结果:术后1、3、6个月对照组脂肪组织存活率分别为:(64.35±8.36)%、(58.22±2.88)%、(50.61±9.47)%;实验组脂肪组织存活率分别为:(77.42±5.1)%、(67.95±6.09)%、(72.75±4.37)%。两组比较均存在显著性差异(P<0.05)。术后6个月组织学观察两组呈正常脂肪组织形态,未见明显差异。结论:自体SVF复合脂肪颗粒能够显著提高移植脂肪组织的成活率,为临床脂肪移植提供实验依据。

含锶磷酸钙骨水泥的细胞毒性

目的利用MTT法评价含锶磷酸钙骨水泥的细胞毒性。方法将制备好的含锶量分别为0%、1%、5%和10%的4种磷酸钙骨水泥材料的浸提液培养L929细胞,1、3和5d后采用MTT比色法和细胞形态直接观察法测定细胞与材料浸提液作用后的生长情况。结果细胞在不同含锶量的磷酸钙骨水泥材料浸提液培养条件下,其细胞相对增殖率在92.6%～103.1%之间,含锶磷酸钙骨水泥材料的细胞毒性评级为0级或1级;随着材料中掺锶量的增加其细胞毒性有略微增大的趋势。结论含锶量不同磷酸钙骨水泥材料具有较好的细胞亲和性,没有明显的细胞毒性。

富含血小板血浆对组织工程脂肪移植效果的影响

目的:在移植的组织工程脂肪组织中加入含激活剂的富含血小板血浆(PRP)或不含激活剂的富含血小板血浆,通过观察脂肪组织各个时间段的成活率来证明PRP的作用。方法:根据Landesberg二次制备法制备PRP。按1000U凝血酶溶于1ml质量百分比为10%的CaCl2配制激活剂。从兔背部取脂肪组织制备好,按实验分组分别加入不同的成分移植到兔子耳部。分别在术后1月、3月、6月测量体积变化。结果:含激活剂的PRP加入组织工程脂肪移植后3个时间段的体积成活率均高于对照组。结论:加入激活剂的PRP释放生长因子增多,释放速度增加,间接促进了脂肪干细胞分裂、分化、成活,促进了移植脂肪组织的更新,使脂肪移植成活率增加。

异体脱矿骨复合碱性成纤维细胞生长因子修复骨缺损的实验研究

目的评价异体脱矿骨(allograftdemineralizedbone,ALB)复合碱性成纤维细胞生长因子(basic fibroblastgrowthfactor,bFGF)诱导成骨的能力。方法以ALB作为bFGF可吸收性载体,制备成复合的bFGF/ALB复合骨。将32只新西兰大白兔随机分成A、B、C、D组,每组8只,制备左、右双侧桡骨中段15mm缺损模型,采用4种不同的处理方法:A组植入bFGF/ALB复合骨,B组植入ALB,C组植入bFGF,D组为空白对照。分别于术后2、4、6和8周摄X线片、组织切片和骨痂钙含量测定,了解各组骨缺损修复速度和愈合程度。结果X线片显示:2周时,A组和B组均表现为少量骨性阴影,而C组和D组表现为透亮阴影;4周和6周显示A组骨缺损处密度增高,部分新骨形成,B组和C组骨缺损处密度轻度增高,D组仅在两断端处有少量成骨阴影;8周A组在骨缺损处已桥接融合,B组从两断端形成新骨向中间靠拢、桥接,C组骨缺损处仍有间隙,其骨密度低于A组,D组骨缺损中央仍为软组织阴影。4周和8周骨痂钙含量测定显示A组骨痂钙含量相对值均高于B组、C组和D组(P<0.05和P<0.01)。组织学切片观察显示,在不同时间点骨缺损修复程度A组均明显高于B组和C组,D组骨缺损处被纤维组织及肌组织等填充。结论bFGF/ALB是一种较好的促进骨缺损修复的复合材料。

miRNA对肿瘤生物学特性的影响

研究显示miRNA与肿瘤发生形成过程及其恶性生物学行为密切相关，作为一种调节分子可能参与了肿瘤的发生以及肿瘤细胞的增殖、分化、细胞凋亡、侵袭和转移及肿瘤耐药等的调节。miRNA靶标及其作用机制的深入研究可为解开肿瘤的发生发展机制及肿瘤治疗策略提供新的思路。

研究生《细胞培养技术》教学实验课程实践与思考

细胞培养技术是医学研究生从事课题研究必备的一项基本技能.<细胞培养技术>课程的教学实验课程学习,目的在于使学员掌握和熟悉有关细胞培养的基本技术并为其今后进一步深入学习和实验研究创造条件、奠定基础.本文结合该项课程实验教学落实的实施过程,浅谈保证研究生<细胞培养技术>课程实验课教学顺利进行的几点体会.