凋亡相关蛋白Apr-2的克隆、测序及初步表达

目的 :从HL 6 0细胞凋亡模型中克隆凋亡相关蛋白Apr 2编码区基因 ,并对其进行表达 ,为进一步研究Apr 2的结构功能及多克隆抗体的制备奠定基础 .方法 :建立HL 6 0细胞凋亡模型 ,提取HL 6 0凋亡细胞总RNA ,以RT PCR方法获取Apr 2cDNA编码区全序列 ,将其与PGEM TEasy载体连接 ,转化E .coliDH5α ,构建重组克隆载体PGEM TEasy/apr 2 ,测序正确后 ,将目的片段亚克隆入PGEX 4T 2原核表达载体 ,并转化大肠杆菌 ,IPTG诱导重组蛋白质表达 ,分析蛋白质在细菌中的表达分布 ,进行凝胶自动扫描分析 .结果 :序列分析表明 ,与GenBank中已登录的Apr 2cDNA编码区序列比较 ,完全一致 .表达的融合蛋白占菌体总蛋白质的 4 0 %以上 ,主要以包涵体的形式存在 .结论 :成功的获得了细胞凋亡模型HL 6 0中Apr 2cDNA编码区的克隆及其融合蛋白表达产物 .

凋亡相关蛋白Apr-2的融合表达及多克隆抗体的制备

目的 融合表达凋亡相关蛋白Apr 2 ,并用该融合蛋白制备多克隆抗体。方法 将凋亡相关蛋白Apr 2克隆入PGEX 4T 2原核表达载体 ,转化大肠杆菌 ,IPTG诱导重组蛋白GST Apr 2表达 ,用该融合蛋白免疫家兔制备多克隆抗体 ,经ELISA及Westernblot检测。结果 融合表达蛋白GST Apr 2主要以包涵体的形式存在 ,表达的融合蛋白占菌体总蛋白质的 4 0 %以上。抗体效价为 1∶5 0 0 0。结论 已成功地进行Apr 2的融合表达 。

口腔扁平苔藓患者的CIITA基因单倍型分析

目的:分析CIITA基因中单核苷酸多态性(Single Nucleotide Polymorphism,SNP)的单倍型与口腔扁平苔藓(Oral Lichen Planus,OLP)之间的关系,并探讨计算单倍型的新方法。方法:在得到42名患者与86名对照的CIITA基因中15个SNP位点的信息后,通过Haploview和SHEsis软件以及本研究组设计的频数计数法进行单倍型分析。组间比较使用χ2检验,并以P=0.05作为统计检验标准。结果:在本研究群体中,CIITA基因上的15个SNP位点能够形成两个单体域(haploblock),其中由位点rs6498124,rs11647384和rs4774所组成的单倍型GAC在三种单倍型分析方法中均显示出显著的统计学差异(Haploview:Chi2=6.127,P=0.013;SHEsis:Chi2=6.469 P=0.011;频数计数法:Chi2=5.460,P=0.019)。结论:在由CIITA基因的SNP位点rs6498124,rs11647384,rs4774组成的单体域中,单倍型GAC对OLP的患病具有潜在的保护性。频数计数法显示,rs4774位点本身的保护性及其与同一单体域内另外两个位点之间的完全连锁不平衡关系是单体型GAC显示出保护性的主要依据。提示单倍型对疾病易感性的解释在于其中的特定SNP位点等位基因型,及其该位点与其它相关位点间的连锁不平衡关系。