晚期正常妊娠及妊娠高血压综合征患者血浆、脐血和胎盘组织中心钠素水平及其意义

为了探讨心钠素(ANP)在正常妊娠及妊娠高血压综合征(简称妊高征)中的病理生理意义,我院进行了临床和实验系列研究,并应用人工固相合成的高活性ANP(24 A.MW=2550 d)治疗妊高征取得显效。

重组人可溶性凋亡素-2在人喉癌株中表达及其体外诱导凋亡作用的实验研究

目的:研究凋亡因子TRAIL结合端粒酶启动子对肿瘤的特异性杀伤作用。方法:刺激人外周血淋巴细胞增殖,提取总RNA。采用RTPCR扩增IL2信号肽基因和TRAIL基因的融合基因,并克隆入真核表达载体pGL3181hTERT肿瘤特异性端粒酶启动子的下游,构建TRAIL基因的重组真核表达载体pGL3181hTERT/TRAIL。用Westernblot鉴定喉癌细胞株Hepa2中表达产物。将该重组载体经阳离子脂质体转染入人喉癌细胞株Hepa2中,用电镜观察细胞的形态变化,用流式细胞仪技术(FCM)分析转染后细胞凋亡率及细胞周期的变化。结果:PCR扩增得到了613bp的cDNA片断。与GenBank中报道的IL2信号肽和TRAIL凋亡诱导功能区cDNA序列完全一致,成功构建了重组真核表达载体pGL3181hTERT/TRAIL。Westernblot结果显示,获得的瞬时转染TRAIL在喉癌细胞Hepa2中特异表达,且能诱导其凋亡。结论:重组真核表达载体pGL3181hTERT/TRAIL的成功构建,为肿瘤基因治疗的靶向性提供了可行的理想工具。

17β雌二醇对人桡动脉舒张作用的体外实验

目的:研究17β雌二醇(17β-estradiol,E2)对人桡动脉(RA)的舒张作用及其机制.方法:采用离体血管灌流的方法,观察E2对人RA的舒张作用以及NO合成酶抑制剂左旋硝基精氨酸甲酯(Nω-nitro-L-argininemethylester,L-NAME),8-Br-cGMP和鸟苷酸环化酶抑制剂美蓝(MB)对这一过程的影响.结果:观察到E2(0.1～100μmol/L)可剂量依赖性地舒张血管且具有内皮依赖性;8-Br-cGMP(0.1～1×103μmol/L)也可引起剂量依赖性的血管舒张效应.10μmol/LMB使E2舒张人RA的作用完全消失.10μmol/LL-NAME能部分抑制E2舒张TA的作用.结论:E2对RA的急性舒张作用具有内皮依赖性.此作用是E2通过非基因组方式使血管内皮细胞分泌NO、进而可能引起血管平滑肌细胞内的cGMP水平升高实现的.

针刺预防激素致小鼠巨噬细胞功能抑制的实验研究

本实验以小鼠腹腔Mφ吞噬中性红能力及Mφ表面C3b受体活性为指标,研究了针刺对激素致Mφ吞噬功能抑制的预防作用及其作用机制。结果表明:针刺可通过Mφ表面C3b受体使Mφ吞噬功能免受抑制;从而为针刺克服激素免疫抑制副作用提供了实验依据。

非小细胞肺癌患者高温射频治疗前、后免疫功能的变化

目的研究非小细胞肺癌（ＮＳＣＬＣ）患者高温射频（ＲＦＡ）治疗前、后机体免疫功能的变化。方法 ＣＴ引导下经皮肺穿刺可伸展锚状电极配合ＲＦ－２０００射频治疗仪高温射频消融，治疗ＮＳＣＬＣ患者３０例。采用流式细胞术及双抗体夹心法，检测治疗前、后外周血Ｔ细胞亚群（ＣＤ３＋、ＣＤ４＋、ＣＤ８＋）、ＮＫ细胞的百分率及ｓＩＬ－２Ｒ含量的变化。采用ＬＤＨ释放法检测ＮＫ细胞的杀伤活性。结果治疗前ＮＳＣＬＣ患者外周血中ＣＤ３＋、ＣＤ４＋细胞的百分率及ＣＤ４＋／ ＣＤ８＋细胞的比值降低，ＮＫ细胞的百分率和ＮＫ细胞杀伤活性亦降低，与对照组相比较差异显著 （Ｐ＜０．０１）。ＣＤ８＋细胞的百分率及ｓＩＬ－２Ｒ含量明显高于正常对照组（Ｐ＜０．０１），提示患者处于免疫抑制状态。治疗后免疫抑制减轻，ＣＤ３＋、ＣＤ４＋、ＮＫ细胞的百分率及ＣＤ４＋／ＣＤ８＋细胞的比值明显升高，ＮＫ细胞杀伤活性也升高，而ＣＤ８＋细胞的百分率及ｓＩＬ－２Ｒ的含量明显降低，治疗前、后相比较差别明显 （Ｐ＜０．０１）。结论 锚状电极高温射频消融具有免疫激活作用，可使机体的免疫功能得到一定程度的改善。

恶性肿瘤患者巨噬细胞淋巴细胞及红细胞免疫功能的研究

目的:通过对巨噬细胞、T淋巴细胞和红细胞免疫功能的检测,探讨恶性肿瘤患者三类细胞免疫检查的临床意义。方法:应用流式细胞仪检测荧光阳性的巨噬细胞数来测定巨噬细胞吞噬率;应用针对CD系列的单克隆抗体作流式细胞仪分析,检测T细胞亚群CD4和CD8的百分率及其比值;应用免疫粘附酵母菌花环法检测红细胞免疫功能。结果:肿瘤组的巨噬细胞吞噬率、T淋巴细胞和红细胞免疫功能均显著低于健康对照组,两组间有显蓍性差异(P<0.05)。巨噬细胞吞噬率与CD4/CD8比值、红细胞免疫RBC-C3bRR及RBC-ICR均有显著正相关性,P=0.01。结论:恶性肿瘤患者巨噬细胞、T淋巴细胞和红细胞免疫功能均有显著降低,对于肿瘤患者的诊治有一定的意义。

带状疱疹患者细胞免疫功能与血液流变学检测观察

目的 了解带状疱疹患者细胞免疫功能与血液流变学的变化。方法 采用双抗体夹心ELISA法检测血清可溶性白细胞介素 2受体 (sIL 2R) ,流式细胞仪测定外周血T淋巴细胞亚群 (CD3 + ,CD4+ ,CD8+ )及红细胞C3b受体花环 (RBC C3 bRR)和红细胞免疫复合物花环 (RBC ICR)试验 ,同时对患者进行血液流变学检测。结果 带状疱疹组sIL 2R明显高于正常组 (P <0 .0 1) ,T淋巴细胞亚群CD3 + ,CD4+ ,CD8+ 与正常组比较明显降低 (P <0 .0 1) ,CD4+ /CD8+ 与正常组比较均降低 (P均 <0 .0 5 ) ;RBC C3bRR较正常组明显降低 (P <0 .0 1) ,RBC ICR与正常组比较明显增高 (P <0 .0 1) ,血液流变学检测示患者血黏度增高。结论 带状疱疹患者存在细胞免疫功能亢进及紊乱及血黏度增高学。

子宫内膜癌患者T细胞亚群、红细胞免疫与Ag-NOR_s定量分析的临床意义

目的 探讨子宫内膜癌患者的免疫功能变化及临床意义 .方法 采用单克隆抗体直接免疫荧光染色法、红细胞花环试验及 KL 型肿瘤免疫图象分析仪 ,对 2 1例子宫内膜癌患者和 2 0名正常对照组分别测定其外周血 T细胞亚群、红细胞免疫 C3b受体花环率 (E- C3b RR% )与红细胞循环免疫复合物花环率 (ICR% )、核仁银染区面积 /细胞核面积比值 (I.S% ) .结果 子宫内膜癌患者 CD+ 3T细胞 ,CD+ 4T细胞 ,CD+ 4/ CD+ 8比值 ,E- C3b RR% ,I.S%值明显降低 ;CD+ 8T细胞 ,E- ICR%明显升高 ,与对照组相比较差异显著 (P<0 .0 1) .结论 子宫内膜癌患者免疫功能低下 ;联合检测 T细胞亚群、红细胞免疫与 Ag- NORs可较全面反映子宫内膜癌患者的免疫功能状态 。

健康人跑步前后红细胞免疫功能的变化

观察了短时间跑步对健康人红细胞免疫功能的影响。结果显示：跑步后即刻红细胞C3b受体花环率（BBC－C3bRR）及红细胞免疫复合物花环率（RBC－ICR）显著高于跑步前（P＜0．01），结果表明短时间跑步可提高红细胞免疫粘附能力，对于提高机体免疫功能（红细胞免疫）有其重要的价值。

抗人精浆蛋白单链抗体基因的构建及序列分析

目的：构建抗人精浆蛋白的单链抗体基因，可为进一步构建、表达抗人精浆蛋白单链抗体／羧肽酶Ａ融合蛋白，用于前列腺癌的抗体导向酶－前体药物疗法奠定基础。方法：利用加端ＰＣＲ技术，在已克隆的抗人精浆蛋白单克隆抗体ＶＨ和Ｖκ基因两端加上限制性酶切位点，再分别克隆入载体ｐＵＣ１９－ｌｉｎｋｅｒ中，构建ＶＨ－ｌｉｎｋｅｒ－Ｖκ形式的Ｅ４Ｂ７单链抗体基因。利用全自动荧光测序仪测定其序列，采用ＰＣ／Ｇｅｎｅ软件与已知的ＶＨ和Ｖκ基因进行核苷酸序列的同源性比较，并推导其编码的氨基酸序列。结果：Ｅ４Ｂ７单链抗体基因全长为７４１ｂｐ，为一开放读框，编码２４７个氨基酸，与已知的抗人精浆蛋白单克隆抗体ＶＨ和Ｖκ基因完全同源。ＶＨ和Ｖκ间有４５ｂｐ的ｌｉｎｋｅｒ序列，推导的氨基酸序列为（Ｇｌｙ４Ｓｅｒ）３，与设计的序列相符。结论：构建成功序列正确的抗人精浆蛋白单链抗体基因，为构建。

兔VX2肿瘤的离体培养及有关生物学特性

目的:在体外分离纯化VX2肿瘤细胞,观察其生物学特性.方法:采用组织块法和消化法结合对兔VX2肿瘤进行原代培养,体外传代观察,传代40次并对培养细胞进行形态学观察、细胞周期检查、核型分析、兔及裸鼠移植.结果:纯化的兔VX2肿瘤细胞形态一致,呈圆形、多角形的上皮细胞,体积小,核浆比倒置,体外连续培养8mo,传代50次以上,细胞倍增时间为26.4h,细胞周期测定G1期为74.61%,G2期为7.78%,S期为17.6%.染色体为亚三倍体核型,众数为60条.高细胞浓度可保证同种移植成瘤率,裸鼠移植可成瘤,无支原体污染.结论:兔VX2肿瘤细胞系来源于Shope病毒致乳头瘤恶变形成的鳞状上皮细胞恶性肿瘤,目前已经纯化,可应用于进一步肿瘤实验研究.

MTT比色法测定细胞生长曲线

ＭＴＴ比色法测定细胞生长曲线郝新保张利朝殷缨韩秀珍陶秦渝郝晓柯张盈华（第四军医大学唐都医院中心实验室西安７１００３８）关键词细胞生长曲线ＭＴＴ比色法中图号Ｑ２８在有关肿瘤细胞生物学的研究中，我们常常要测定细胞的生长状态，制作细胞生长曲线，以往的方法是...

皮肤病患者IL-2R、T细胞亚群及红细胞免疫功能的测定及分析

目的研究某些皮肤病中细胞免疫功能改变情况。方法采用双抗体夹心ELISA法检测血清可溶性白细胞介素2受体SIL2R,流式细胞仪测定外周血T淋巴细胞亚群D3+、CD4+、CD8+,及红细胞C3b受体花环RBCC3bRR和红细胞免疫复合物花环RBCICR试验。结果皮肤病组SIL2R明显高于正常组P0.01,T淋巴细胞亚群CD3+、CD4+、CD8+与正常组比较明显降低P0.01,CD4+/CD8+与正常组比较降低P0.05,RBCC3bRR较正常组明显降低P0.01,RBCICR与正常组比较明显增高P0.01。结论某些皮肤病中存在细胞免疫功能改变。

恶性肿瘤细胞及组织中凋亡抑制蛋白livin的表达及其临床意义

目的:探讨凋亡抑制蛋白livin的两种异构体livinα、和livinβ在多种肿瘤细胞系及肿瘤组织中的表达及其与各类肿瘤临床病理的关系。方法:采用RT-PCR法检测HeLa、SBC-2等12种肿瘤细胞和50例不同肿瘤组织及20例癌旁组织中livinα和livinβ的mRNA的表达水平。结果:12个细胞系中8个细胞系的livin mRNA表达为阳性,分别为HeLa、SPCA-1、SBC-2、PC14、MKN45、LOVO、HHCC、A549,其中A549为弱表达,且livinα的表达强于livinβ;HL-7702、Hep-2、7721、K562四种细胞中livin表达为阴性;50例肿瘤组织中livin mRNA表达阳性率为64.0%,而在癌旁组织中为2%。Livin mRNA的表达与肿瘤患者的肿瘤分化程度、淋巴结转移及TNM分期均无明显相关性。结论:Livin在肿瘤细胞系及肿瘤组织中表达的研究,为进一步研究livin与肿瘤的发生、发展的关系,及其以livin为靶位的肿瘤基因治疗研究提供了有力依据。

乳腺癌组织中孕激素受体与雌激素受体DNA结合功能关系的研究

目的：观察３６ 例（Ｅ２ ＋ ） 乳腺癌患者组织ＰＲ 和ＥＲ ＤＮＡ 结合功能的关系，进而探讨（Ｅ２ ＋ ／ＰＲ＋ ） 表型内分泌治疗无反应的分子机制。方法：用激素结合法和迁移率改变法。结果：１） 用含有ＥＲ 的ＭＣＦ－ ７ 细胞株作为阳性对照，２２ ℃Ｍｇ２ ＋ 存在条件下，迁移率改变法中ＥＲ－ ＥＲＥ 复合物的形成是激素依赖性的，证实了ＥＲ－ ＥＲＥ 复合物的特性。２） 激素结合法和迁移率改变法检测结果显示，３６ 例（Ｅ２ ＋ ） 乳腺癌中有２５ 例相一致，其中两种方法都是阳性者（ＰＲ＋ ／ＥＲＥ＋ ）１７ 例，都是阴性者（ＰＲ－ ／ＥＲＥ－ ）８ 例。３ 例肿瘤，激素结合法阳性而迁移率改变法阴性（ＰＲ＋ ／ＥＲＥ－ ） 。８ 例肿瘤，激素结合法阴性而迁移率改变法阳性（ＰＲ－ ／ＥＲＥ＋ ） 。结论：乳腺癌组织中依赖ＥＲ 的ＰＲ 表达还有其它途径（ＰＲ＋ ／ＥＲＥ－ ） ，且ＰＲ 阴性不能表示ＥＲ ＤＮＡ 结合功能状态有缺陷（ＰＲ－ ／ＥＲＥ＋ ） ，利用ＰＲ 评估ＥＲ ＤＮＡ 结合功能状态以指导乳腺癌的内分泌治疗存在约３０ ％ （１１／３６） 的误差率。因此，传统的激素结合法检测结果（Ｅ２ 、ＰＲ） 同迁移率改变法检测结果（ＥＲＥ） 相结合，能更准确地反应ＥＲ

Stathmin基因在人成骨肉瘤细胞中的表达及意义

背景与目的:Stathmin作为细胞信号转导分子在细胞分化及恶性肿瘤发生、发展上发挥重要作用。本研究旨在探讨Stathmin基因在人成骨肉瘤细胞中的表达,并探讨阻断其表达对该肿瘤细胞的生物学行为的影响。方法:RT-PCR及原位杂交法检测2个人成骨肉瘤细胞系及45例人成骨肉瘤组织中Stathmin基因表达情况;以高表达Stathmin基因的人成骨肉瘤细胞系SOSP-9607为靶细胞、反义Stathmin(ASODN)为阻断剂,通过MTT实验观察ASODN对该细胞系的生长抑制作用,并用流式细胞仪分析其对细胞增殖周期的影响。结果:Stathmin基因在2个成骨肉瘤细胞系高表达,45例成骨肉瘤组织中24例呈阳性表达(阳性率为53.3%),10例正常组织中2例呈弱阳性表达,Stathmin在人成骨肉瘤组织的表达与正常组织中的表达有显著性差异(P<0.05)。ASODN明显抑制成骨肉瘤细胞的生长(P<0.05)。SOSP-9607在ASODN作用下,细胞分裂阻滞在分裂期的中期,并诱导细胞发生凋亡。结论:Stathmin基因在人成骨肉瘤中高表达,该基因有望成为成骨肉瘤生物治疗中的重要靶点。

乳腺癌ER功能状态及腋淋巴结转移的检测

目的 探讨ER功能检测及RT PCR检测乳癌淋巴结转移的临床应用。方法 应用凝胶迁移阻滞法及配体亲和组织化学法检测乳癌患者ER的功能状态。以患者腋窝淋巴结的RNA作模板 ,应用特异性引物扩增相应的Keratin19片段 ,据此判断有无腋窝淋巴结转移。结果 在 5 5例ER阳性的标本中 ,ERE结合阳性者达 71%。在HE染色淋巴结阴性的患者中 ,有 12 .8%经RT PCR检测阳性。结论 ERE结合功能有助于全面反映患者ER功能状态。RT PCR检测淋巴结Keratin19表达可作为乳腺癌转移的标志。

端粒酶活性检测在胃癌诊断中的应用及其临床意义

目的 通过检测胃癌组织及其相应正常组织中端粒酶活性 ,探讨其在胃癌发生发展中的作用。方法 采用PCR TRAP法检测 6 0例胃癌 ,39例正常组织的端粒酶活性。结果 胃癌组织中端粒酶阳性率为 86 .7% ,而正常组织为 10 .3% ,胃癌组织端粒酶活性显著高于正常组织 (P <0 .0 1) ;胃癌组织不同分化程度、TNM各期以及淋巴转移之间端粒酶活性阳性率未发现显著差异 (P >0 .0 5 )。结论 端粒酶参与各型、各期及不同分化程度胃癌的发生 ;其在胃癌组织中高表达、而在正常组织中低表达或不表达使其成为一种较为理想的胃癌诊断标志物。

氨甲喋呤-α-肽的固相合成

用固相肽合成法合成了氨甲喋呤（ＭＴＸ）与ＭＴＸα苯丙氨酸及精氨酸衍生物，产物不经进一步分离纯化即可达到ＨＰＬＣ单峰，质谱分析其分子量符合理论值。ＭＴＸα苯丙氨酸经羧肽酶Ａ处理后，可完全降解为ＭＴＸ。体外细胞毒性试验，两者活性差异在１００倍以上，提示ＭＴＸα苯丙氨酸是一理想的前体药物。