教育国际化背景下的传染病学教育

传染病学教育国际化已成为传染性疾病防控全球化发展的必然要求。面对新的形势,军队传染病学教育要立足军事医学发展,结合战时和平时传染病防控、救治需要,从本土重大传染病防治和教育出发,以核心传染病专科建设为载体,以培养适应国际化发展的传染病学专门人才为目标,坚持不懈走传染病学教育国际化发展道路。

传染病学实习教学中的实践与思考

临床实习是传染病学教学的重要组成部分。近年来,由于传染病病例严重不足,传染病病种减少,患者的法制意识不断增强,临床已难以找到与教学相符的病例,学生看什么学什么已成为突出的问题,加上学生偏科思想严重,临床带教如何进行,已越来越引起有关人员的关注。本文结合多年的传染病学课堂教学经验,对传染病学实习教学作了初步探讨。

传染病学临床实习教学的实践与探讨

临床实习是传染病学教学的重要组成部分。该文结合多年的传染病学课堂教学经验,对传染病学实习教学作了初步探讨。文章针对教学实践中传染病实习教学内容的调整,实习制度的建立,实习大纲的完善,学生临床思维的培养和能力的提高以及明确带教老师角色和目的等方面的体会加以总结和讨论。

执业医师资格考试与本科教学衔接模式探讨

执业医师资格考试是评价申请医师资格者是否具备从事医师工作所必须的专业知识与技能的考试,是衡量医科大学本科教学质量的重要指标。PBL教学法是提高学生综合能力、有效衔接教考两方面的教学模式,它将不同学科、不同知识点融会贯通到疾病诊、防、治这个医学学习的中心主题和核心目标上来,使学生密切联系临床提出问题、分析问题和解决问题,在提高学生综合知识和实践技能的同时,也提高学生执业医师资格考试通过率。

地高辛素标记探针原位杂交技术检测肝硬变组织中TIMPs mRNA

目的金属蛋白酶组织抑制因子(TIMPs)具有抑制金属蛋白酶(MMPs)的作用,为了阐明TIMP-1和TIMP-2在肝硬变患者肝组织中的表达水平及分布状态。我们检测了肝硬变患者肝组织中的TIMP-1和TIMP-2,探讨TIMP-1和TIMP-2在肝硬变发病机制中的作用。方法以TIMP-1和TIMP-2 cDNA探针为试剂。采用原位杂交技术检测40例经肝组织病理学检查证实为结节性肝硬变患者肝组织中(其中男32例.女8例,平均年龄为50岁)TIMP-1和TIMP-2 mRNA的表达。结果 40例肝硬变患者肝组织中TIMP-1利TIMP-2 mRNA表达的阳性率为100％,TIMP-1 mRNA的表达强阳性40例中有32例,占80％,中等阳性6例,占15％.弱阳性2例,占5％;TIMP-2 mRNA的表达强阳性40例中有22例。占55％,中等阳性16例,占40％,弱阳性2例,占5％TIMP-1 mRNA阳性的肝组织中TIMP-2 mRNA亦为阳性,且TIMP-1 mRNA表达强度略高于TIMP-2 mRNA。而正常肝组织中未见阳性表达。TIMP-1利TIMP-2 mRNA表达的阳性信号主要位于肝细胞胞质中,未见细胞核表达。结论肝硬变患者肝组织中的肝细胞中存在TIMP-1和TIMP-2 mRNA的表达,TIMP-1和TIMP-2可能与肝病的进展相关,它通过抑制MMPs的活性,使得ECM降解减少而导致肝纤维化,以至肝硬变。

Th1型细胞因子基因对结核分枝杆菌基因疫苗诱导BALB/c小鼠产生抗CFP10抗体水平的影响

目的 :研究分别表达含IL 12和IL 18基因的质粒 ,对结核分枝杆菌 (Mycobacteriumtuberculosis,MTB)H3 7Rv 株CFP10基因疫苗诱导免疫应答的影响。方法 :从正常人外周血单个核细胞 (PMBCs)中提取RNA ,用RT PCR扩增IL 18cDNA ,并克隆入载体 pGEM Teasy中。测序证实后 ,亚克隆至真核表达载体 pcDNA3.1的BamHI和EcoRI酶切位点。将分别表达小鼠IL 12和人IL 18基因的真核表达质粒pcmIL12和pcIL18,与MTBCFP10基因疫苗联合肌注免疫BALB/c小鼠 ,共免疫 3次 ,每次间隔 2wk。每次免疫后 2wk采血、分离血清 ,用ELISA检测小鼠血清抗CFP10抗体的滴度。结果 :用RT PCR成功地从人PMBC的RNA中扩增出IL 18cDNA ,测序结果正确。用BamHI和EcoRI酶切鉴定证实 ,目的基因已插入载体 pcDNA3.1中 ,阳性克隆命名为pcIL18。pc CFP10组第 1次免疫后 ,血清抗CFP10抗体的平均滴度为 1∶6 0 0 ,末次免疫后的滴度为 1∶4 0 0 0。pcIL18+pcCFP10组联合免疫后 ,血清抗CFP10抗体的滴度高于 pcCFP10组 ,最终达 1∶80 0 0。而pcmIL12 + pcCFP10组联合免疫后滴度仅为 1∶2 0 0。结论 :pcIL18与CFP10基因疫苗联合免疫 ,可增强CFP10抗原的特异性体液免疫应答 ;pcmIL12则可使CFP10基因疫苗产生的抗体水平降低。pcIL18+ pcCFP10基因联合免疫是否具有?

CLEC4L介导丙型肝炎病毒感染人胎盘滋养层细胞的作用机制

目的探讨细胞间黏附分子非整合素蛋白3(CLEC4L)介导丙型肝炎病毒(HCV)对人胎盘滋养层细胞感染情况,观察相关抗体体外干预CLEC4L与HCV结合作用的初步研究。方法培养滋养层细胞设CLEC4L单抗组、甘露聚糖组,同时设对照组。HCV与CLEC4L作用之前,先分别加入CLEC4L单抗及甘露聚糖进行干预,同时以高滴度HCV RNA阳性血清与各组细胞共培养。经RT-PCR法检测HCV感染后细胞内HCV RNA含量的变化。结果 CLEL4L单抗组细胞内HCV RNA水平较低,甘露聚糖组显示类似结果。结论 CLEC4L能够介导HCV进入人胎盘滋养层细胞,CLEC4L单抗和甘露聚糖对HCV与人滋养层细胞的结合有一定阻断作用。

夹心ELISA法快速检测肝病患者血清中金属蛋白酶组织抑制剂-1

目的建立一种快速检测肝病患者血清基质金属蛋白酶组织抑制剂-1(TIMP-1)的双抗体夹心ELISA,了解血清TIMP-1的水平与肝纤维化病程进展程度的关系。方法以不同浓度的抗人TIMP-1单克隆抗体(mAb)为包被抗体,加入待测抗原以及辣根过氧化物酶(HRP)标记的抗TIMP-1mAb作为标记抗体进行方阵滴定,建立双抗体夹心ELISA,并用于临床检测408例肝病患者血清TIMP-1的水平。结果方阵滴定的结果表明包被抗体浓度为1mg/L,血清稀释倍数1∶100,HRP标记mAb的最佳工作浓度为1∶400。以此条件建立的夹心ELISA法具有良好的可重复性,中和抑制率在85%以上,稳定性良好,与国外检测TIMP-1的ELISA试剂盒进行对比试验,具有良好的相关性(r=0.988)。用于临床快速检测肝硬化的检出阳性率为76.4%,明显高于慢性肝炎(40.2%)和急性肝炎(19.5%,P<0.005),并随着患者肝纤维化程度的加重而升高(P<0.001)。结论血清TIMP-1水平的变化可作为诊断肝纤维化良好指标。本法简便、快速,敏感性高、特异性强,用于肝纤维化的人血清学快速诊断。尤其适于医院及基层医疗单位应用。

HCV感染后机体保护性免疫缺陷原因探讨

目的探讨丙型肝炎患者保护性免疫缺陷的原因。方法根据HCVC区和NS4区基因序列设计并人工合成3条合成肽,采用抗原捕捉酶联免疫吸附试验检测HCV感染者血清中抗-HCV IgG抗体轻链κ/λ比值,同时以正常人血清做对照。结果抗-HCV SP42,CP10和CP9抗体轻链的表达呈明显的偏斜;116例抗-HCV阳性者中113例(97.41％),抗-HCV IgG抗体轻链κ/λ比值偏高,所有病例追踪观察1a(其中11例抗-HCV阳性者随访2a);30例患者接受α-干扰素治疗,发现抗-HCV抗体κ/λ比值恒定不变。结论 HCV感染者抗-HCV抗体的产生不均匀性并呈稳定的克隆性。B细胞克隆优势化可能是HCV感染后机体保护性免疫缺陷的原因之一。

GB病毒B型(GBV-B)感染的临床与免疫病理研究

目的自从建立起甲、乙、丙、丁、戊5种肝炎病毒的病原学诊断之后,仍有少部分肝炎患者的病因得不到明确,因此不少学者试图探索是否还有新型肝炎病毒的存在,并进行了大量的流行病学和实验诊断的研究,认为的确存在可经肠道外传播并引起人类肝炎的致病因子.1995年 Simons et al 成功地克隆出2株黄病毒 RNA 序列,称之为 GBV-A,GBV-B.继而从一名西非患者血清中克隆出另一黄病毒 RNA 序列,称之为 GBV-C.1996年初美国另一研究小组从一名慢性输血后肝炎患者血清中克隆出一株黄病毒 RNA 序列,称之为 HGV.进一步的研究后认为 GBV-C,HGV 为同一病毒的不同分离株.动物实验发现,GBV-B 可单独引起动物发病,而 GBV-A 单独感染时未能引起发病.本文以此为依据,对 GBV-B 感染者的临床与免疫病理加以研究,试图探讨 GBV-B 对人体肝脏的致病性及其在人体内的分布状态.方法根据 GBV-B NS5区的核苷酸和氨基酸序列,通过计算机软件对其抗原位点进行了预测,并分析其亲水性、键流动性、电荷状态及抗原表位分布等特性,合成一条30个氨基酸多肽.探讨合成肽最佳包被量之后,成功地建立了间接 ELISA 法,用来检测抗-GBV-B.应用此方法检测各型肝炎及其他高危人群血清标本1286份.同时应用 RT-PCR 检测血清中 GBV-B RNA及免疫组化检测肝炎患者肝组织相关病毒抗原.结果经鉴定合成肽纯度在95%以上,氨基酸分析的实际值与理论值基本一致.将合成肽与牛血清清蛋白(BSA)偶联免疫白兔获得高效价抗-GBV-B NS5区的多克隆抗体(PcAb).批内、批间变异系数分别为6.06%和7.65%(均<10%);中和抑制试验结果证明我们建立的 ELISA 法具有较好的特异性.血清抗-GBV-B 检测结果表明各型肝炎患者血清抗-GBV-B 阳性率为10.56%;其中非甲～非戊型肝炎患者血清抗体阳性率为8.57%;肝炎高危人群如献血员、血液透析者及静脉药瘾者血清抗-GBV-B 阳性率分别为2.90%,8.62%及13.44%.随机抽取抗-GBV-B 阳性和抗-GBV-B 阴性血清标本各32例进行RT-PCR 检测 GBV-B RNA,结果64例均为阴性.应用抗-GBV-B 多克隆抗体为试剂,对42例肝炎患者肝组织进行免疫组化研究,均未检测出 GBV-B 相关抗原.结论提示 GBV-B 可能不是人类肝炎病毒,对人体肝脏的致病性轻微,其抗体在不同人群中出现可能是一种短暂的感染,其意义有待进一步研究.

成年树实验感染丙型肝炎病毒的初步研究

成年树鼠句实验感染丙型肝炎病毒的初步研究＊王海平周永兴姚志强洪沙李光玉（第四军医大学唐都医院传染病科西安７１００３８）关键词丙型肝炎病毒树鼠句动物模型中图号Ｒ５１２．６３树鼠句（Ｔｕｐａｉａ，ＴｒｅｅＳｈｒｅｗ）属低等灵长类动物，生长于我国西南各省，...

肝硬化患者外周血单核细胞表面TLR4和TLR2表达的临床意义

目的:探讨肝硬化患者外周血中单个核细胞(PBMC)表面Toll样受体4(Toll-likereceptor4,TLR4)、TLR2表达与肝硬化患者细菌感染的关系,观察抗生素治疗对TLR4与TLR2表达的影响.方法:采用三色荧光染色法,荧光素标记的抗TLR2/抗TLR4/抗CD14mAb对42例肝硬化患者及正常人的血液单核细胞表面TLR2、TLR4及CD14分子进行免疫荧光染色,应用流式细胞仪检测.结果:肝硬化腹水组TLR2和TLR4表达(n=30,TLR2,47.65±0.75;TLR4,22.28±0.80)与正常对照组(n=15,TLR2,24.40±2.77;TLR4,14.45±3.23)比较有显著性差异(P<0.05),肝硬化腹水患者治疗前(n=20,TLR2,47.79±0.76;TLR4,28.58±0.79)和治疗后(n=20,TLR2,17.22±2.48;TLR4,12.37±0.35)比较有显著性差异(P<0.05);肝硬化腹水患者与肝硬化无腹水患者组(n=12,TLR2,25.37±1.62;TLR4,14.81±0.29)比较有显著性差异(P<0.05);肝硬化无腹水患者组与正常对照组比较无显著性差异(P>0.05).结论:肝硬化腹水患者TLR4与TLR2的表达显著上调,抗生素治疗后显著下调.

肝病患者血清中TIMP-1与HA、PCⅢ、CⅣ、LN水平的相关性

目的了解肝病患者血清中基质金属蛋白酶组织抑制物-1(TIMP-1)与透明质酸(HA)、Ⅲ型前胶原(PCⅢ)、Ⅳ型胶原(CⅣ)和层粘连蛋白(LN)的相互关系及临床意义。方法425例肝病患者和110例正常对照者采用双抗体夹心酶联免疫吸附方法(ELISA)测定血清TIMP-1,放射免疫分析法测定HA、PCⅢ、CⅣ和LN和全自动酶法测定血清总胆汁酸(TBA)、丙氨酸氨基转移酶(ALT)。结果与健康正常人对照比较,肝病患者五项指标均有不同程度的升高,除慢性肝炎轻度组CⅣ含量水平与对照组无统计学意义外,其余各组均与对照组有显著性差异(P<0.01)。其中唯有TIMP-1血清含量水平从急性肝炎至肝硬化依次进行性升高,慢性肝炎轻度组与急性肝炎组相比,t=2.603,P<0.01。血清TIMP-1与HA、PCⅢ、CⅣ和LN呈显著正相关(P<0.01),与TBA、ALT呈正相关(P<0.05),并随肝脏病损纤维化程度加重而检出阳性率逐渐增高(P<0.005)。结论五项指标均可不同程度的反映肝脏的纤维化程度,其中以血清TIMP-1更为可靠、有效。

地高辛素标记探针原位杂交法检测肝组织中庚型肝炎病毒RNA

目的自从建立起甲、乙、丙、丁、戊5种肝炎病毒的病原学诊断之后,仍有少部分肝炎患者的病因得不到明确,因此不少学者试图探索是否还有新型肝炎病毒的存在,并进行了大量的流行病学和实验诊断的研究,认为的确存在可经肠道外传播并引起人类肝炎的致病因子.目前关于庚型肝炎病毒(HGV/GBV-C)的致病性和组织嗜性尚无结论性资料.本文目的是研究 HGV/GBV-C RNA 在肝组织中表达并进一步探讨HGV/GBV-C 引起肝脏损害的可能机制.方法应用地高辛素标记 HGV/GBV-C cDNA 探针原位杂交法检测肝组织中庚型肝炎病毒 RNA.结果检测196例肝炎患者肝组织切片中的 HGV/GBV-CRNA 阳性率为37.24%;在血清中 HGV/GBV-C RNA 呈阳性患者肝组织中该病毒 RNA 检出率为48.94%;单一 HGV/GBV-C 感染者肝组织中检出率为58.33%;阳性信号仅为胞质型.原位杂交信号阳性细胞与肝细胞变性、瘀胆、炎性细胞浸润及细胞坏死程度等并不相关.本文原位杂交与免疫组化两种检测方法对比研究结果表明,两项技术有较高的符合率(86.74%),说明这两项技术具有相辅相成的作用.结论提示 HGV/GBV-C RNA 并不直接损害肝细胞.原位杂交和免疫组化两项技术成功地应用于石蜡包埋切片,为回顾性研究 HGV/GBV-C 的致病性及致病机制提供了有价值的实验手段.

单克隆抗体双抗体夹心ELISA快速检测肝炎患者血清中TIMP-2

目的建立一种检测人血清中基质金属蛋白酶组织抑制剂-2(TIMP-2)的双抗体夹心ELISA法,探讨血清TIMP-2的水平与肝纤维化病程进展程度的关系.方法确定包被TIMP-2单克隆抗体(McAb)和辣根过氧化物酶(HRP)标记的抗TIMP-2 McAb的最佳工作浓度,建立双抗体夹心ELISA方法.并用于临床初步检测408例肝炎血清TIMP-2水平.结果包被TIMP-2 McAb的最佳工作浓度为2μg/ml,HRP标抗体的最佳工作浓度1:400.该法具有良好的重复性,灵敏度达5 ng/ml,中和抑制率在80%以上,稳定性能好,与国外TIMP-2 ELISA试剂盒进行对比试验,表明两种检测方法有良好的相关性(Y=1.2752X-4.7465,r=0.976).临床检测表明TIMP-2随着病损纤维化程度加重而升高,与正常人血清TIMP-2水平相比差异显著(P＜0.01～0.001).结论该法能够快速检测人血清中TIMP-2浓度,血清TIMP-2可作为定量诊断肝纤维化指标之一.本试验为国内TIMP-2诊断试剂盒的研制和开发提供了科学实验依据.

不同载体及靶基因对乙型肝炎病毒DNA疫苗免疫效果的影响

目的 探讨不同DNA载体及靶基因对DNA疫苗免疫效果的影响。 方法 用已构建的不同载体HBV S基因疫苗(pCR3.1-S,pcDNA3-S)和HBVC基因疫苗(pCR3.1-C)分别给Balb/c小鼠多点肌肉注射,2wk后追加免疫一次,用ELISA法及MTT法分别检测小鼠血清抗-HBs及抗HBc及脾细胞对HBsAg或HBcAg的特异性增殖反应。 结果 免疫接种2wk后小鼠血清抗-HBs及抗HBc抗体均明显高于对照组,载体pCR3.1的表达效力稍高于pcDNA3,但同一基因不同载体间无显著差异,不同靶基因血清抗体滴度及脾细胞对HBsAg或HBcAg的刺激指数均明显高于对照组,刺激指数pCR3.1-C组明显高于单纯pCR3.1-S注射组。 结论 两种载体均可以诱导较强的体液免疫应答;但同一基因不同载体间无显著差异,HBVS和C基因疫苗均可诱导较强的体液和细胞免疫应答强度;C基因以细胞免疫增高为主。

胆汁酸代谢及相关进展

胆汁酸在肝脏由胆固醇合成,是机体类固醇物质的主要清除途径,胆汁酸代谢在维持机体的胆固醇稳态中起重要的作用。本文就胆汁酸合成的机制、生理功能、肝肠循环、胆汁酸障碍相关疾病及胆汁酸合成的调节等方面的一些进展作一简要综述。

聚合酶链反应技术用于汉坦病毒的基因分型

应用反转录ＰＣＲ技术对国内外分离的１８株汉坦病毒基因进行了检测，结果１０株血清Ⅰ型病毒仅能用Ⅰ型引物扩增，８株血清Ⅱ型病毒仅能用Ⅱ型引物扩增，与既往空斑减少中和试验的分型结果完全一致，两种ＰＣＲ产物经内引物再次扩增及酶切分析鉴定证明具有特异世，表明ＲＴ－ＰＣＲ是一项比较特异、敏感和简便实用的汉坦病毒基因分型方法。

HGV/GBV-C与HCV混合感染者肝组织中相关病毒表达的免疫组化研究

目的 了解HGV/GBV C与HCV混合感染者肝组织中HGV/GBV C相关抗原的分布状况 ,探讨HGV/GBV C对肝脏的损害机制。方法 以抗HGV/GBV CNS5单克隆抗体或抗HCVNS3单克隆抗体为试剂 ,采用免疫组织化学方法检测肝炎病人肝组织中HGV/GBV C、HCV相关抗原表达。结果 5 6例肝炎病人肝组织中HGV/GBV C相关抗原表达阳性率为 2 6 .79% (15 / 5 6 ) ;HCVNS3抗原表达阳性率为 39.2 9% (2 2 / 5 6 )。HGV/GBV CNS5抗原表达阳性信号主要位于肝细胞胞浆中 ,染色阳性细胞周围可见淋巴细胞浸润。结论 肝细胞中存在HGV/GBV C相关抗原表达 ,其编码产物可能作为一种靶抗原 ,诱发免疫病理反应 。